1.一种用于快速检测烟曲霉的序列,其包括烟曲霉-crrna序列、以及相应的带有t7启动子的rpa扩增引物序列,其中,所述烟曲霉-crrna序列的核苷酸序列如seqidno.1所示,所述rpa扩增引物序列的正向引物核苷酸序列如seqidno.2所示,所述rpa扩增引物序列的反向引物核苷酸序列如seqidno.3所示。
2.根据权利要求1所述的序列,其特征在于,所述rpa扩增引物序列的终浓度为0.1~1μmol/l,所述烟曲霉-crrna的终浓度为20~200nmol/l。
3.一种试剂盒,其含有根据权利要求1或2所述的用于快速检测烟曲霉的序列,还含有rpa酶预混液、信号报告探针、lwcas13a蛋白、醋酸镁、t7rna聚合酶混合液和ntp缓冲液混合液。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述rpa酶预混液中含有磷酸肌酸、肌酸激酶、dntps、atp、dtt、醋酸钾、重组酶uxsx、重组酶uxsy、单链结合蛋白和bsu聚合酶。
5.一种快速检测烟曲霉的方法,其特征在于包括以下步骤:
步骤一:提取待检测样本的dna;
步骤二:利用rpa和crispr一步法检测体系对烟曲霉核酸进行扩增和信号检测,其中使用根据权利要求1或2所述的用于快速检测烟曲霉的序列。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤二中,所述rpa和crispr一步法检测体系包括第一部分和第二部分;
所述第一部分含有浓度为10μm的rpa正向引物0.5-2.5μl、浓度为10μm的rpa反向引物0.5-2.5μl、rpa酶预混液21μl,其中所述rpa酶预混液含有浓度为20-80mm的磷酸肌酸、浓度为50-150mm的肌酸激酶、浓度为100-300μm的dntps、浓度为20-80mm的atp、浓度为1-10mm的dtt、浓度为50-200mm的醋酸钾、浓度为50-300ng/μl的重组酶uxsx、浓度为10-100ng/μl的重组酶uxsy、浓度为200-1000ng/μl的单链结合蛋白以及浓度为10-100ng/μl的bsu聚合酶;
所述第二部分含有浓度为1-5μm的lwcas13a蛋白1μl、浓度为1-5μm的crrna1μl、t7rna聚合酶混合液0.2-2μl、ntp缓冲液混合液1-10μl和浓度为1-10μm的信号报告探针1μl。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,将所述第一部分配制好后震荡离心把体系收集于管子底部,再加入所述第二部分,于恒温37℃反应10-30分钟后,震荡混匀后离心,读取fam荧光值。
8.根据权利要求1或2所述的用于快速检测烟曲霉的序列在用于制备烟曲霉检测试剂中的应用。