1.一种检测白色念珠菌耐药基因的试剂盒,其中包括引物组、2×taqmix和ddh2o;
引物组如下:
用于检测白色念珠菌的erg11的引物:
f:5’-atggctattgttgaaactgtcatt-3’;
r:3’-ttcataaggttgttgaccattatg-5’;
引物所扩增的目的片段长度为140bp;
用于检测白色念珠菌的cdr1的引物:
f:5’-ttgttggaagacatgaagatgctg-3’;
r:3’-cttccaacaaaggtacgtcttcca-5’;
引物所扩增的目的片段长度为280bp;
用于检测白色念珠菌的cdr2的引物:
f:5’-ctgccaaagtgccacgttgggccc-3’;
r:3’-catctcaaactcctctaccaggtt-5’;
引物所扩增的目的片段长度为346bp;
用于检测白色念珠菌的mdr1的引物:
f:5’-atgtcattttttgattctttacgt-3’;
r:3’-gttcactctatcagaatgcccttt-5’;
引物所扩增的目的片段长度为204bp;
用于检测白色念珠菌的adh1的引物:
f:5’-agatcacgtgtgggatcagctgac-3’;
r:3’-gctcacccaggacaccttcagcact-5’;
引物所扩增的目的片段长度为271bp;
用于检测白色念珠菌的cap1的引物:
f:5’-ccagatcaaccgcgacatcgaatt-3’;
r:3’-ctcgagccgagtgagcccgttcgc-5’;
引物所扩增的目的片段长度为205bp;
用于检测白色念珠菌的flu1的引物:
f:5’-atgaataacaataccaacag-3’;
r:3’-agctttgtacattgagatta-5’;
引物所扩增的目的片段长度为205bp。
2.根据权利要求1所述的一种检测白色念珠菌耐药基因的试剂盒,其特征在于:所述2×taqmix包括taqdna聚合酶、dntps、标准taq酶反应缓冲液、酶稳定剂和溴酚蓝染料。
3.一种根据权利要求1所述的白色念珠菌耐药基因的检测方法,其特征在于:按照先后顺序包括以下步骤:
步骤一:待测样本的获取;
步骤二:pcr反应液的配置:待测组:总反应体系为50μl,其中包括2×taqmix25-35μl、各引物组的混合液f6μl、r6μl、样本2μl、ddh2o补至50μl;阴性对照组:总反应体系为50μl,其中包括2×taqmix25-35μl、各引物组的混合液f6μl、r6μl、ddh2o补至50μl;
步骤三:pcr扩增:将上述配置的pcr反应液放入pcr仪中,并设定反应参数;
步骤四:将上述pcr反应液进行1%的琼脂糖凝胶电泳,将样本中与预期条带大小相同的进行回收;
步骤五:将样本回收的dna进行纯化,然后连接载体送去测序;
步骤六:与将测序得到的序列与基因组序列进行比对,如果序列比对正确,则指示该样品中存在该白色念珠菌的耐药基因。
4.根据权利要求3所述的一种白色念珠菌耐药基因的检测方法,其特征在于:所述步骤三中反应参数为:94℃,3min;进入循环程序,94℃,30s;60℃,30s;72℃,10s,循环次数为40次;72℃,10min。
5.根据权利要求3所述的一种白色念珠菌耐药基因的检测方法,其特征在于:所述步骤六中所述序列比对的相似度在95%以上为同一个基因。