本发明属于微生物制药技术领域，具体涉及一种替考拉宁的提纯方法。
背景技术：
替考拉宁，又名太古霉素，是游动放线菌(actinoplanesteichomyceticus)经发酵、提取后得到的一种万古霉素族糖肽类抗生素，为多个化学结构非常相似的化合物组成的抗生素混合物。替考拉宁对革兰阳性菌如葡萄球菌、链球菌、肠球菌和大多厌氧性阳性菌敏感，临床上主要用于金葡菌及链球菌属等敏感菌所致的严重感染，如心内膜炎、骨髓炎、败血症及呼吸道、泌尿道、皮肤、软组织等的感染。
替考拉宁ep9.8标准是替考拉宁最新的最高标准，现有技术通过丙酮除杂，碳脱结晶的方法得到的产品，其各个单组分的纯度已经无法达到替考拉宁ep9.8的标准。而通过凝胶层析、大孔树脂分离等方法进行提纯时，多数只能控制其中部分单组分的纯度，也无法达到替考拉宁ep9.8标准。如申请号为200710107185.6的中国发明专利，根据其步骤能够控制a2组比例，但未提及到对其他组分的比例控制。如何得到满足替考拉宁ep9.8标准的替考拉宁成品成为了目前亟待解决的问题。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：如何通过对提纯方法的改进，在不使用有毒溶剂的前提下制备得到符合替考拉宁ep9.8标准的替考拉宁。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型q-f层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂由0.5mol/l的氯化钠溶液和30％的乙醇溶液组成；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
本发明的有益效果在于：本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁ep9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的纯化(提纯)效率。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明提供一种替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型q-f层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为：由0.5mol/l的氯化钠溶液和95％的乙醇配制成的30％的乙醇溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，利用强酸、强碱型q-f层析填料进行吸附，在于预洗中去除大量杂质，在洗脱中除去剩余一部分未去除的杂质，解吸得到替考拉宁，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁ep9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化仅需层析、洗脱、过滤浓缩和冻干几个步骤，过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的提纯效率。
进一步的，所述强酸、强碱型q-f层析填料为qfocurose6ff。
进一步的，所述步骤3中使用10％的乙醇溶液预洗3bv。
进一步的，所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩。
进一步的，所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24h，第二阶段为20℃，时间为40h。
温度低只对冷冻时间有影响，温度高会导致组分a2-2转变为a3，无法满足替考拉宁ep9.8标准。
实施例1：
替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至qfocurose6ff的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为：由0.5mol/l的氯化钠溶液和95％的乙醇配制成的30％的乙醇溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品；
所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩；
所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24h，第二阶段为20℃，时间为40h。
对比例1：
对比例1与实施例1的不同在于，使用hz-s-02为填料进行层析。
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至hz-s-02层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用20％的乙醇溶液预洗5bv，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为50％的乙醇ph10溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
对比例2：
对比例2与实施例1的不同在于，对比例2使用c18为填料进行层析。
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至c18层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用20％的乙醇溶液预洗5bv，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为45％的乙醇ph9.0溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
其中，实施例1和对比例1-2使用的替考拉宁粗品为同一批次产品。
对实施例1、对比例1-2，以及一种市售的替考拉宁成品样品进行测定，并与替考拉宁ep9.8标准对比，结果见表1所示。
表1
从表1中可以看出，对比例1的结果当中a3系和a2-1系及rs2不满足ep9.8的要求，对比例2结果当中z10和i3不满足要求，而本发明提供的方法制备得到的替考拉能成品能够满足替考拉宁ep9.8标准。
综上所述，本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁ep9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化仅需层析、洗脱、过滤浓缩和冻干几个步骤，过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的提纯效率。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。