技术特征：
1.一种核酸序列，所述核酸序列包含a.至少一个异源调控序列，所述异源调控序列选自于造血增强子元件和用于hsc限制性mirna的mirna结合位点；以及b.编码gata结合因子1(gata1)多肽的序列。2.如权利要求1所述的核酸序列，所述核酸序列包含至少一个造血增强子元件。3.如权利要求2所述的核酸序列，其中，所述增强子元件包含与选自于由以下序列所组成的组中的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列：seq id no：10、seq id no：11、seq id no：12、seq id no：38和/或seq id no：39。4.如权利要求2所述的核酸序列，其中，所述增强子元件包含选自于由以下所组成的组的基因的增强子元件：kell金属内肽酶(kel)；5'氨基乙酰丙酸合酶2(alas2)；和血型糖蛋白a(gypa)。5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列包含用于至少一个hsc限制性mirna的至少一个mirna结合位点。6.如权利要求1-5中任一项所述的核酸序列，其中，所述用于至少一个hsc限制性mirna的至少一个mirna结合位点选自于由用于以下的mir结合位点所组成的组：mir10at、mir125、mir155、mir130at、mir142t、mir196bt、mir99、mir126mir126、mir181、mir193、mir223t、mir542和let7e。7.如权利要求1-6中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列包含至少一个造血增强子元件以及用于至少一个hsc限制性mirna的至少一个mirna结合位点。8.如权利要求1-7中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含：a.异源5'utr，所述异源5'utr包含：i.除gata1以外的造血转录因子的5'utr序列，ii.至少20个核苷酸的序列，和/或iii.1-25个上游密码子uaug；和/或b.造血增强子微小基因。9.一种核酸序列，所述核酸序列包含：a.5'utr，所述5'utr包含：i.除gata1以外的造血转录因子的5'utr序列，ii.至少20个核苷酸的序列，和/或iii.1-25个上游密码子uaug；b.编码gata结合因子1(gata1)多肽的序列。10.如权利要求1-9中任一项所述的核酸序列，其中，所述5'utr包含选自于由以下所组成的组的基因的5'utr：runt相关转录因子1(runx1)、lim domain only 2(lmo2)或ets变体6(etv6)。11.如权利要求1-10中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含至少一个造血增强子元件、用于hsc限制性mirna的mirna结合位点和/或造血增强子微小基因(g1hem)。12.一种核酸序列，所述核酸序列包含a.造血增强子微小基因(g1hem)；b.编码gata结合因子1(gata1)多肽的序列。
13.如权利要求12所述的核酸序列，其中，所述造血增强子微小基因(mg1hem)包含与核苷酸序列seq id no：13具有至少80％同源性的序列。14.如权利要求12-13中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含5'utr、和/或至少一个造血增强子元件、和/或用于hsc限制性mirna的至少一个mirna结合位点，所述5'utr包含：i.除gata1以外的造血转录因子的5'utr序列；ii.至少20个核苷酸的序列；和/或iii.1-25个上游密码子uaug。15.如权利要求14所述的核酸序列，其中，所述除gata1以外的造血转录因子的5'utr序列为选自于由以下所组成的组的基因的5'utr序列：runt相关转录因子1(runx1)；至少一个造血增强子元件；和/或用于hsc限制性mirna的至少一个mirna结合位点。16.如权利要求1-15中任一项所述的核酸序列，其中，所述用于至少一个hsc限制性mirna的结合位点包含选自于seq id no：31-seq id no：37和seq id no：43-seq id no：55的序列。17.如权利要求1-16中任一项所述的核酸序列，其中，所述造血增强子元件包含与选自于seq id no：10、seq id no：11、seq id no：12、seq id no：38和seq id no：39的序列具有至少80％序列同一性的序列。18.如权利要求1-17中任一项所述的核酸序列，其中，所述5'utr序列包含与选自于seq id no：14、seq id no：15和seq id no：16的序列具有至少80％序列同一性的序列。19.如权利要求1-18中任一项所述的核酸序列，其中，所述序列包含与a和b的元件可操作地连接的启动子。20.如权利要求19所述的核酸序列，其中，所述启动子不为gata1启动子。21.如权利要求20所述的核酸序列，其中，所述启动子包含延伸因子1-α1(eef1a1)的启动子序列。22.如权利要求1-21中任一项所述的核酸序列，其中，所述编码gata结合因子1(gata1)多肽的序列包含与编码人gata1多肽的核苷酸序列具有至少60％序列同一性的序列。23.如权利要求1-22中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含：与编码所述gata1多肽的序列可操作地连接的转录后调控元件。24.如权利要求23所述的核酸序列，其中，所述转录后调控元件包括土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)。25.如权利要求1-24中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含内部核糖体进入位点。26.如权利要求25所述的核酸序列，其中，所述内部核糖体进入位点与标志物基因可操作地连接，并且其中，所述标志物基因编码光学可见的蛋白质或酶。27.如权利要求1-26中任一项所述的核酸序列，其中，所述序列包含选自于seq id no：8、seq id no：9、seq id no：61和seq id no：62的序列。28.如权利要求1-27中任一项所述的核酸序列，其中，所述核酸序列为载体。29.如权利要求28所述的核酸序列，其中，所述载体为质粒、或腺病毒载体、慢病毒载体
或逆转录病毒载体。30.一种包含如权利要求1-30中任一项所述的核酸序列的慢病毒颗粒。31.一种组合物，所述组合物包含如权利要求1-31中任一项所述的核酸序列或颗粒以及药学上可接受的运载体。32.一种治疗有需要的受试者中的diamond-blackfan贫血的方法，所述方法包括向患者给予治疗有效量的如权利要求1-31中任一项所述的核酸序列、颗粒或组合物。33.一种恢复早期红系祖细胞细胞特异性gata1表达的方法，所述方法包括使包含早期红系祖细胞的细胞群与如权利要求1-31中任一项所述的核酸序列、颗粒或组合物接触。34.如权利要求33所述的方法，其中，所述早期红系祖细胞包含dba相关的基因突变。35.如权利要求1-31中任一项所述的核酸序列、颗粒或组合物用于治疗有需要的受试者中的diamond-blackfan贫血的用途。
技术总结
本文描述的是与用于治疗Diamond-Blackfan贫血的GATA-1基因疗法相关的方法和组合物。组合物。组合物。
技术研发人员：维杰
受保护的技术使用者：儿童医疗中心有限公司
技术研发日：2020.06.08
技术公布日：2022/3/18