洗涤剂组合物中的脱氧核糖核酸酶用途的制作方法

洗涤剂组合物中的脱氧核糖核酸酶用途
1.序列表的引用
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技术领域
3.本发明涉及包含脱氧核糖核酸酶(dna酶)的洗涤剂组合物。本发明进一步涉及洗涤方法和洗涤剂组合物中的dna酶的用途。


背景技术：

4.众所周知，洗涤剂组合物包括大量成分，这些成分在整个清洁过程中提供特定的功能性。然而，由于潜在的环境问题，一些洗涤剂成分面临审查。期望提供从可制造性和消费者角度看均安全，同时保持与其他洗涤剂成分的相容性的替代品。此外，必须保持消费者利益和性能效果。
5.从消费者角度来说，服装的灰化、暗淡和黄化是关注的问题，但目前开发了聚合物产品(如羧甲基纤维素、聚丙烯酸、马来酸/丙烯酸共聚物和其他经修饰的聚合物)以通过防止洗涤过程中服装上的粒子沉积来解决此问题。
6.ep 3 476 935 a1(宝洁公司(procter&gamble))披露了包含dna酶变体的洗涤剂组合物，所述组合物适用于在清洁过程中使用。
7.wo 2014/087011(诺维信公司(novozymes))披露了包含dna酶的洗涤剂组合物以及dna酶用于减少衣物的恶臭、抗再沉积和维持或改善纺织品的白度的用途。
8.wo 2015/155350 a1(诺维信公司)披露了包含dna酶的洗涤剂和药物组合物，其中该dna酶获得自真菌来源。
9.wo 2017/001472 a1(诺维信公司)披露了用于洗涤纺织品的方法，dna酶的用途和包含dna酶的洗涤剂组合物。
10.wo 2018/011277 a1(诺维信公司)披露了适用于在清洁过程中使用的dna酶变体和洗涤剂组合物。


技术实现要素：

11.本发明涉及在洗涤剂中具有dna酶活性的多肽在洗涤周期期间在以下不存在的情况下用于维持或改善物品白度的用途：聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合，其中该物品是纺织品。本发明进一步涉及在洗涤剂中具有dna酶活性的多肽在在洗涤周期期间在如下情况下用于维持或改善物品白度的用途：减少或甚至替代聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合。本发明涉及在洗涤剂中具有dna酶活性的多肽在洗涤周期期间在以下不存在的情况下用于防止、减少或去除污垢再沉积到物品上的用途：聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、
纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合，其中该物品是纺织品。
12.本发明还涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含具有脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性的多肽和洗涤剂辅助剂成分，条件是该组合物包含按质量计少于1％，例如少于0.8％、少于0.7％、少于0.6％、少于0.5％、少于0.4％、少于0.3％、少于0.2％、少于0.1％、少于0.05％、少于0.025％的聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合。
13.本发明涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：在不存在共聚(丙烯酸/马来酸)聚合物、聚丙烯酸酯聚合物、丙烯酸的同聚物、羧甲基纤维素、甲基纤维素、及其组合的情况下，将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含具有dna酶活性的多肽或含有该多肽的洗涤剂组合物；完成至少一个洗涤周期；任选地添加另外的污垢；和任选地冲洗该物品，其中该物品是纺织品。在实施例中，与用包括聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素及其组合的洗涤剂组合物进行的洗涤方法相比，用具有dna酶活性的多肽的洗涤方法提供了相同或更好的物品白度。
14.定义
15.等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
16.细菌的：术语关于多肽(如酶，例如，dna酶)的“细菌的”是指由细菌基因组编码并且因此可直接从细菌基因组衍生的多肽，其中这种细菌未经过遗传修饰来编码所述多肽，例如，通过重组dna技术将编码序列引入基因组中。因此，在本发明的上下文中，术语“细菌dna酶”或“获得自细菌来源的具有dna酶活性的多肽”或“细菌来源的多肽”是指由细菌物种的基因组编码并且因此可直接从细菌物种的基因组衍生的dna酶，其中该细菌物种未经受遗传修饰引入编码所述dna酶的重组dna。因此，编码具有dna酶活性的细菌多肽的核苷酸序列是天然在细菌物种遗传背景中的序列。编码具有dna酶活性的细菌多肽的序列也可以称为野生型dna酶(或亲本dna酶)。具有dna酶活性的细菌多肽包括重组产生的野生型。在另一个方面，本发明提供了具有dna酶活性的多肽，其中所述多肽与细菌dna酶基本上同源。在本发明的上下文中，术语“基本上同源”表示具有dna酶活性的多肽与所选择的细菌dna酶的氨基酸序列具有至少80％，优选地至少85％，更优选地至少90％，更优选地至少95％，甚至更优选地至少96％、97％、98％，以及最优选地至少99％的同一性。
17.纤维素分解酶或纤维素酶：术语“纤维素分解酶”或“纤维素酶”意指水解纤维素材料的一种或多种(例如，几种)酶。此类酶包括一种或多种内切葡聚糖酶(例如，ec 3.2.1.4)、一种或多种纤维二糖水解酶、一种或多种β-葡糖苷酶、或其组合。用于测量纤维素分解酶活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解酶活性，以及(2)测量个体纤维素分解酶活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶)，如在zhang等人,2006,biotechnology advances[生物技术进展]24:452-481中所述的。可使用不溶性底物，包括沃特曼(whatman)
№
1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉花、预处理的木质纤维素等，测量总纤维素分解酶活性。最常见的总纤维素分解活性测定是将沃特曼
№
1滤纸用作
底物的滤纸测定。该测定是由国际纯粹与应用化学联合会(iupac)建立的(ghose,1987,pure appl.chem.[纯粹与应用化学]59:257-68)。
[0018]
色差(l值)：lab色彩空间是针对明度具有尺寸l的色彩对立空间。l值，l*代表在l*＝0下的最暗的黑色，并且为在l*＝100下的最亮的白色。在本发明的上下文中，l值还称为色差。
[0019]
洗涤剂辅助剂成分：洗涤剂辅助剂成分不同于本发明的dna酶。这些另外的辅助剂组分的精确性质及其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。适合的辅料包括但不限于以下描述的组分，如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、s、s、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物软化剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、溶剂、和/或颜料。
[0020]
洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(如纺织品)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、条状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物软化剂；洗衣增效剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了含有本发明的酶之外，该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物)，和/或洗涤剂辅助剂成分，如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物(如本文所列)、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
[0021]
dna酶(脱氧核糖核酸酶)：术语“dna酶”意指具有dna酶活性的多肽，该多肽催化dna主链中的磷酸二酯键的水解切割，从而降解dna。出于本发明的目的，根据测定i中所述的程序确定dna酶活性。在一方面，本发明的多肽具有seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、或seq id no:14的多肽的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的dna酶活性。在一个实施例中，本发明的多肽具有改善的dna酶活性，例如以seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、或seq id no:14的成熟多肽的dna酶活性为参比，使得该多肽的dna酶活性是至少105％，例如至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少160％、至少170％、至少180％、或至少200％。
[0022]
酶洗涤益处：术语“酶洗涤益处”在本文中定义为将酶添加至洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(也被称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(也被称作变白的效果)，该纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。还包括维持白度，例如，防止灰化或暗沉。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护
理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，使织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
[0023]
片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失的一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽；其中片段具有dna酶活性。
[0024]
真菌的：在本发明的上下文中，术语关于多肽(如酶，例如，dna酶)的“真菌的”是指由真菌基因组编码并且因此可直接从真菌基因组衍生的多肽，其中这种真菌未经过遗传修饰来编码所述多肽，例如，通过重组dna技术将编码序列引入基因组中。因此，在本发明的上下文中，术语“真菌dna酶”或“获得自真菌来源的具有dna酶活性的多肽”是指由真菌基因组编码并且因此直接从真菌物种基因组衍生的dna酶，其中该真菌物种未经受通过引入编码所述dna酶的重组dna进行的遗传修饰。因此，编码具有dna酶活性的真菌多肽的核苷酸序列是真菌物种遗传背景中的天然序列。由这种序列编码的具有dna酶活性的真菌多肽还可以是指野生型dna酶(或亲本dna酶)。在另一个方面，本发明提供了具有dna酶活性的多肽，其中所述多肽与真菌dna酶基本上同源。在本发明的上下文中，术语“基本上同源”表示具有dna酶活性的多肽与所选择的真菌dna酶的氨基酸序列具有至少80％，优选地至少85％，更优选地至少90％，更优选地至少95％，甚至更优选地至少96％、97％、98％，以及最优选地至少99％的同一性。与真菌dna酶基本上同源的多肽可以被包括于本发明的洗涤剂中，和/或在本发明的方法中使用。
[0025]
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。
[0026]
改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文定义为相对于没有酶的相同洗涤剂组合物的洗涤性能，酶展示出在洗涤剂组合物中增加的洗涤性能，例如，通过增加去污或较少的再沉积。术语“改善的洗涤性能”包括在衣物中的洗涤性能。
[0027]
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中；例如宿主细胞可以经遗传修饰以表达本发明的多肽。来自该宿主细胞的发酵液将包含分离的多肽。
[0028]
衣物洗涤：术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗涤机进行或可以手动进行。
[0029]
恶臭：术语“恶臭”意指清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干
净，而没有粘附在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物，这些化合物可以是微生物产生的。另一个实例是令人不愉快的气味可以是粘附于已经与人类或动物接触的物品的汗味或体味。恶臭的另一个实例可以是来自香味料的气味，其粘附于物品，例如气味强烈的咖喱或其他异国香味料。测量物品附着恶臭的能力的一种方式是通过使用在此披露的测定ii。
[0030]
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如n-末端加工、c-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。
[0031]
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有dna酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
[0032]
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以原本不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
[0033]
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
[0034]
反射值：洗涤性能被表达为染污的小块布样的反射值。在洗涤并冲洗之后，将小块布样摊开铺平并且允许在室温下风干过夜。在洗涤的次日评估所有洗涤小块布样。使用具有非常小孔径的macbeth color eye 7000反射分光光度计进行小块布样的光反射评估。在入射光中没有uv的条件下进行测量，并提取460nm下的反射率。
[0035]
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用如在emboss包(emboss：欧洲分子生物学开放软件套件(emboss:the european molecular biology open software suite)，rice等人,2000,trends genet.[遗传学趋势]16:276-277，优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和eblosum62(blosum62的emboss版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：
[0036]
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
[0037]
出于本发明的目的，使用如在emboss包(emboss：欧洲分子生物学开放软件套件(emboss:the european molecular biology open software suite)，rice等人.,2000,同上)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(needleman和wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和ednafull(ncbi nuc4.4的emboss版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：
[0038]
(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
[0039]
纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。这些纺织品可以是纤维素基的，如天
然纤维素，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝，或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸酯、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物以及基于纤维素的纤维和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污渍的家用衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。在本发明的上下文中，术语“纺织品”还包括织物。
[0040]
变体：术语“变体”意指在一个或多个(例如，几个)位置处包含改变(即，取代、插入和/或缺失)的与亲本酶具有相同活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；而插入意指在邻接并且紧随占据某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。在本发明的上下文中，所鉴别的dna酶的变体具有亲本的酶活性，即，催化dna主链中的磷酸二酯键水解断裂的能力(脱氧核糖核酸酶活性)。在一个实施例中，以亲本dna酶(例如，seq id no:2的成熟多肽)为参比，变体的脱氧核糖核酸酶活性是增加的。
[0041]
洗涤周期：术语“洗涤周期”在本文定义为如下洗涤操作，其中将纺织品浸泡在洗涤液中，将某种机械作用应用于该纺织品，以释放污渍，并且协助洗涤液流进和流出该纺织品，并且最终去除多余的洗涤液。在一个或多个洗涤周期后，总体上对该纺织品进行漂洗和干燥。
[0042]
洗涤液：术语“洗涤液”在本文定义为任选地包括本发明的酶的水和洗涤剂组分的溶液或混合物。
[0043]
洗涤时间：术语“洗涤时间”在本文定义为完整洗涤过程所花费的时间；即一个或多个洗涤周期和一个或多个漂洗周期在一起的时间。
[0044]
白度：术语“白度”在本文定义为在不同领域并且针对不同顾客具有不同含义的广义术语。白度的损失可以例如归因于灰化、黄化、或光学增亮剂/调色剂的去除。灰化和黄化可归因于污垢再沉积、身体污垢、来自例如铁和铜离子或染料转移的着色。白度可包括来自以下列表的一个或几个问题：着色剂或染料作用；不完全污渍去除(例如身体污垢、皮脂等)；再沉积(物体的灰化、黄化或其他变色)(去除的污垢与纺织品的其他部分(弄脏的或未弄脏的)再关联)；在应用过程中纺织品的化学变化；以及颜色的澄清或淡色化。
[0045]
序列综述
[0046]
seq id no:1是获得自米曲霉(aspergillus oryzae)的dna酶。
[0047]
seq id no:2是获得自地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)的dna酶。
[0048]
seq id no:3是获得自枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)的dna酶。
[0049]
seq id no:4是获得自粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)的dna酶。
[0050]
seq id no:5是获得自病研所芽孢杆菌(bacillus idriensis)的dna酶。
[0051]
seq id no:6是分离自食物芽孢杆菌(bacillus cibi)的dna酶。
[0052]
seq id no:7是获得自堀越氏芽孢杆菌(bacillus horikoshii)的dna酶。
[0053]
seq id no:8是获得自芽孢杆菌属物种(bacillus sp.)的dna酶。
[0054]
seq id no:9是获得自芽孢杆菌属物种的dna酶。
[0055]
seq id no:10是获得自特异腐质霉(humicola insolens)的纤维素酶。
[0056]
seq id no:11是获得自秋叶氏芽孢杆菌(bacillus akibai)的纤维素酶。
[0057]
seq id no:12是获得自多黏类芽孢杆菌(paenibacillus polymyxa)的纤维素酶。
[0058]
seq id no:13是获得自热白丝菌(melanocarpus albomyces)的纤维素酶。
[0059]
seq id no:14是获得自米曲霉的dna酶。
具体实施方式
[0060]
本发明人已经发现，具有脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性的多肽可用于防止洗涤期间粒子在衣服上沉积，即使在液体和粉末洗涤剂系统中未发现典型聚合物的情况下也是如此。令人惊讶的是，本发明人已经发现，即使在常规抗再沉积聚合物不存在的情况下，dna酶也能发挥作用，例如，通过有效去除穿过衣服上的身体污垢，以及通过使洗涤中的粒子粘附较少，从而达到优异的抗灰化性能。本发明人已经发现，具有dna酶活性的多肽可以替代聚合物，认为该聚合物在洗涤剂配制品中具有抗再沉积的益处。
[0061]
如实例1所证实，虽然常规抗再沉积聚合物在洗涤中对纺织品有益处，但具有dna酶活性的多肽可以显示出竞争性或甚至更好的效果。
[0062]
因此，在实施例中，本发明涉及具有dna酶活性的多肽在以下不存在的情况下用于维持或改善物品白度的用途：聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合。
[0063]
在实施例中，本发明涉及具有dna酶活性的多肽在洗涤周期期间在以下不存在的情况下用于防止、减少或去除污垢再沉积到物品上的用途：聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合，其中该物品是纺织品。当该污垢没有粘附到该物品时，该物品显得更干净。
[0064]
在一个实施例中，本发明涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含具有dna酶活性的多肽和洗涤剂辅助剂成分，其中该组合物包含按质量计少于1％，例如少于0.8％、少于0.7％、少于0.6％、少于0.5％、少于0.4％、少于0.3％、少于0.2％、少于0.1％、少于0.05％、少于0.025％的聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合。
[0065]
本发明进一步涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
[0066]
a)在聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合不存在的情况下，将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含具有dna酶活性的多肽或含有该多肽的洗涤剂组合物；
[0067]
b)完成至少一个洗涤周期；
[0068]
c)任选地添加另外的污垢；以及
[0069]
d)任选地冲洗该物品，
[0070]
其中该物品是纺织品。
[0071]
在实施例中，与用包括聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合的洗涤剂组合物进行的洗涤方法相比，用具有dna酶活性的多肽的洗涤方法提供了相同或更好的物品白度。
[0072]
在25℃下，液体溶液的ph在1至11的范围内，如在5.5至11的范围内、如在7至9的范围内、在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。脱矿质水中粉末洗涤剂的ph测量为1g/l，并且优选地在1-12；如5.5-11.5；如7.5-11.5；如8-11的范围内。
[0073]
洗涤液可以具有在5℃至95℃范围内、或在10℃至80℃范围内、在10℃至70℃范围内、在10℃至60℃范围内、在10℃至50℃范围内、在15℃至40℃范围内或在20℃至30℃范围内的温度。在一个实施例中，洗涤液的温度是30℃。
[0074]
在本发明的一个实施例中，用于洗涤物品的方法进一步包括在完成洗涤周期后排掉洗涤液或部分洗涤液。然后可以将洗涤液在后续洗涤周期中或在后续漂洗循环中重复使用。在第一个和任选地第二个或第三个洗涤周期过程中，可以将该物品暴露于洗涤液。在一个实施例中，在暴露于洗涤液后，冲洗该物品。可以将该物品用水或用包括柔顺剂的水进行冲洗。
[0075]
具有dna酶活性的多肽或脱氧核糖核酸酶(dna酶)是催化dna主链中的磷酸二酯键的水解切割从而降解dna的任何酶。可互换使用两个术语：具有dna酶活性的多肽和dna酶。
[0076]
适用于本发明方法和组合物的dna酶优选地是微生物dna酶，例如，如芽孢杆菌属dna酶或真菌dna酶。优选地，该芽孢杆菌属dna酶选自由以下组成的组：包含seq id no:2、3、5、6、7、8、9和14所示的氨基酸序列的多肽，或与其具有至少60％同一性，如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。
[0077]
优选地，该真菌dna酶是包含seq id no:1所示的氨基酸序列的多肽，或与其具有至少60％同一性，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
[0078]
在另一个优选的实施例中，该真菌dna酶是包含seq id no:14所示的氨基酸序列的多肽，或与其具有至少60％同一性，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
[0079]
适合的dna酶还可以是wo 201198579中所述的并且seq id no:4所示的粘质沙雷氏菌dna酶，或者与其具有至少60％同一性，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。
[0080]
根据本发明有用的dna酶可以存在于洗涤剂组合物中，该洗涤剂组合物可以包含按洗涤剂组合物的重量百分比计至少0.00002％的dna酶蛋白，优选地至少0.000005％、0.000001％、0.00005％、0.00001％、0.0005％、0.0001％、0.005％、0.001％、0.002％、
0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.008％、0.01％、0.02％、0.03％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％的dna酶蛋白。
[0081]
根据本发明有用的dna酶可以作为经配制的酶以按洗涤剂组合物的重量百分比计0.000002％至10％之间的量添加。dna酶可以作为经配制的酶以按洗涤剂组合物的重量百分比计0.00002％至10％，如0.0002％至5％、如0.002％至5％、如0.002％至3％、如0.02％至3％之间，或甚至0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、或3％的量添加。
[0082]
适用于本发明的dna酶可以获得自曲霉属(aspergillus)，例如获得自米曲霉。适用于本发明的dna酶也可以获得自芽孢杆菌属，例如获得自地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、堀越氏芽孢杆菌、病研所芽孢杆菌、食物芽孢杆菌和芽孢杆菌属物种。
[0083]
在实施例中，本发明涉及获得自曲霉属、特别是米曲霉的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:1或seq id no:14的氨基酸序列，或包含与seq id no::1或seq id no:14的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:1或seq id no:14的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0084]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属、特别是地衣芽孢杆菌的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:2的氨基酸序列，或包含与seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:2的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0085]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属、特别是枯草芽孢杆菌的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:3的氨基酸序列，或包含与seq id no:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:3的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0086]
在实施例中，本发明涉及获得自沙雷氏菌属、特别是粘质沙雷氏菌的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:4的氨基酸序列，或包含与seq id no:4的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:4的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0087]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属、特别是病研所芽孢杆菌的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:5的氨基酸序列，或包含与seq id no:5的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、
至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:5的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0088]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属、特别是食物芽孢杆菌的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:6的氨基酸序列，或包含与seq id no:6的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:6的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0089]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属、特别是堀越氏芽孢杆菌的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:7的氨基酸序列，或包含与seq id no:7的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:7的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0090]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属物种的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:8的氨基酸序列，或包含与seq id no::8的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:8的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0091]
在实施例中，本发明涉及获得自芽孢杆菌属物种的dna酶。在实施例中，本发明涉及dna酶多肽，该dna酶多肽包含seq id no:9的氨基酸序列，或包含与seq id no:9的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:9的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0092]
在另一个实施例中，seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、或seq id no:14的dna酶在一个或多个(例如，几个)位置处包含取代、缺失和/或插入。在另一个实施例中，seq id no:9的dna酶在一个或多个(例如，几个)位置包含取代、缺失和/或插入。在实施例中，引入到seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9或seq id no:14多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目不超过10个，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个。氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1至30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
[0093]
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮
氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由h.neurath和r.l.hill,1979,于the proteins[蛋白质],academic press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为ala/ser、val/ile、asp/glu、thr/ser、ala/gly、ala/thr、ser/asn、ala/val、ser/gly、tyr/phe、ala/pro、lys/arg、asp/asn、leu/ile、leu/val、ala/glu和asp/gly。
[0094]
可替代地，这些氨基酸改变具有使多肽的物理化学性质改变的这样一种性质。例如，氨基酸改变可以改善多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适ph等。
[0095]
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(cunningham和wells,1989,science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的dna酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，hilton等人,1996,j.biol.chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de vos等人,1992,science[科学]255:306-312；smith等人,1992,j.mol.biol.[分子生物学杂志]224:899-904；wlodaver等人,1992,febs lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
[0096]
使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，所述相关的筛选程序例如由reidhaar-olson和sauer,1988,science[科学]241:53-57；bowie和sauer,1989,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；wo 95/17413；或wo 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错pcr、噬菌体展示(例如lowman等人,1991,biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；wo 92/06204)以及区域定向诱变(derbyshire等人,1986,gene[基因]46:145；ner等人,1988,dna 7:127)。
[0097]
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(ness等人,1999,nature biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的dna分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
[0098]
多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的n-末端或c-末端处融合。
[0099]
多肽可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明多肽的n-末端或c-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(cooper等人,1993,embo j.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；dawson等人,1994,science[科学]266:776-779)。
[0100]
融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被
切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：martin等人,2003,j.ind.microbiol.biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；svetina等人,2000,j.biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；rasmussen-wilson等人,1997,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；ward等人,1995,biotechnology[生物技术]13:498-503；和contreras等人,1991,biotechnology[生物技术]9:378-381；eaton等人,1986,biochemistry[生物化学]25:505-512；collins-racie等人,1995,biotechnology[生物技术]13:982-987；carter等人,1989,proteins:structure,function,and genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及stevens,2003,drug discovery world[药物发现世界]4:35-48。
[0101]
洗涤液中dna酶的浓度典型地为在0.00004-100ppm酶蛋白范围内，如在0.00008-100范围内、在0.0001-100范围内、在0.0002-100范围内、在0.0004-100范围内、在0.0008-100范围内、在0.001-100ppm酶蛋白的范围内，0.01-100ppm酶蛋白、优选地0.05-50ppm酶蛋白、更优选地0.1-50ppm酶蛋白、更优选地0.1-30ppm酶蛋白、更优选地0.5-20ppm酶蛋白、并且最优选地0.5-10ppm酶蛋白。
[0102]
可以使用常规稳定剂稳定本发明的洗涤剂组合物的dna酶，这些常规稳定剂例如是多元醇，例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳香族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物，例如4-甲酰苯基硼酸，并且可以如在例如wo 92/19709和wo 92/19708中所述的配置该组合物。
[0103]
本发明的多肽还可以结合到wo 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，将其通过引用而特此并入。
[0104]
液体酶配制品
[0105]
dna酶可配制成液体酶配制品，该液体酶配制品通常是可倾注的组合物，不过它也可能具有高粘度。液体酶配制品的物理外观和性质可能有很大变化——例如它们可能具有不同的粘度(凝胶状到水状)，着色的、没有着色的、透明的、模糊的以及甚至具有固体粒子(如在浆液和悬浮液中)。这些最小成分是使其成为液体的dna酶和溶剂系统。除了dna酶，液体酶配制品也可以包含其他酶活性，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶和/或另外的核酸酶(例如rna酶)活性。
[0106]
该溶剂系统可以包含水、多元醇(如甘油、(一元、二元或三元)丙二醇、(一元、二元或三元)乙二醇、糖醇(例如山梨醇、甘露糖醇、赤藓糖醇、半乳糖醇、肌醇、木糖醇或核糖醇)、聚丙二醇、和/或聚乙二醇)、乙醇、糖和盐。通常该溶剂系统还包括防腐剂和/或其他稳定剂。
[0107]
可以通过将溶剂系统和具有所希望纯度的酶浓缩物(或酶粒子以获得浆液/悬浮液)混合来制备液体酶配制品。
[0108]
在实施例中，该液体酶组合物包含：
[0109]
(a)至少0.01％w/w活性酶蛋白，
[0110]
(b)至少0.5％w/w多元醇，
[0111]
(c)水，以及
[0112]
(d)任选地防腐剂。
[0113]
可以使用常规稳定剂使本发明的液体组合物中的dna酶稳定。稳定剂的实例包括
但不限于糖，如葡萄糖、果糖、蔗糖、或海藻糖；多元醇(如甘油、丙二醇)；添加盐以提高离子强度；二价阳离子(例如，ca
2+
或mg
2+
)；以及酶抑制剂、酶底物、或多种聚合物(例如，pvp)。为配制品选择最佳ph可能对酶稳定性非常重要。最佳ph取决于特定的酶，但通常在ph 4-9的范围内。在一些情况下，表面活性剂，如非离子表面活性剂(例如，醇乙氧基化物)可以改进酶配制品的物理稳定性。
[0114]
本发明的一个实施例涉及包含dna酶的组合物，其中该组合物进一步包含：
[0115]
(i)多元醇，优选地选自甘油、(一元、二元或三元)丙二醇、(一元、二元或三元)乙二醇、聚乙二醇、糖醇、山梨醇、甘露糖醇、赤藓糖醇、半乳糖醇、肌醇、木糖醇和核糖醇；
[0116]
(ii)任选地另外的酶，优选地选自蛋白酶、淀粉酶或脂肪酶；
[0117]
(iii)任选地表面活性剂，优选地选自阴离子和非离子表面活性剂；
[0118]
(iv)任选地二价阳离子、聚合物、或酶抑制剂；
[0119]
(v)任选地具有ph 4-9范围内的ph；和
[0120]
(vi)水。
[0121]
酶的浆液或分散剂通常通过将酶的小粒子(例如，喷雾干燥粒子)分散在酶略微可溶的液体介质(例如，液体非离子表面活性剂或液体聚乙二醇)中制备。粉末也能以一定量添加到水性系统中，因此并非全部进入溶液中(高于溶解极限)。另一种形式为晶体悬浮液，该晶体悬浮液也可以是水性液体(参见例如wo 2019/002356)。另一种制备此类分散剂的方法是通过制备油包水乳液，其中酶处于水相中，并从液滴中蒸发水分。可通过添加流变改性剂(如气相二氧化硅或黄原胶)使此类浆液/悬浮液在物理上稳定(以减少或避免沉降)，通常以实现剪切稀化流变学。
[0122]
颗粒酶配制品
[0123]
dna酶也可以配制成固体/颗粒酶配制品。无粉尘颗粒可以例如如在us4,106,991和us 4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，peg)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在gb 1483591中给出。
[0124]
dna酶可以配制为颗粒，例如配制为结合一种或多种酶的共颗粒或有益剂(如mntacn或其他漂白组分)。此类另外的酶的实例包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、和/或核酸酶(例如dna酶、rna酶)。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于ip.com披露ipcom000200739d中。
[0125]
本发明的一个实施例涉及包含dna酶的酶颗粒/粒子。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)构成。典型地，该颗粒/粒子的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
[0126]
该核心可以包括另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。该核心可以包括粘合剂，如
合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。该核心可以由惰性粒子组成，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。该核心的直径可以是20-2000μm，特别地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。用于制备核心的方法可见于handbook of powder technology[粉末技术手册]；c.e.capes的particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；elsevier[爱思唯尔]中。这些方法是本领域所熟知的并且也已经描述于国际专利申请wo 2015/028567，第3-5页中，将其通过引用并入。
[0127]
该酶颗粒/粒子的核心可以被至少一个包衣包围，例如，以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他适合的包衣材料，如聚乙二醇(peg)、甲基羟基-丙基纤维素(mhpc)以及聚乙烯醇(pva)。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于wo 93/07263和wo 97/23606中。
[0128]
此类包衣是本领域所熟知的，并且早前已经描述于例如wo 00/01793、wo 2001/025412和wo 2015/028567中，将其通过引用并入。
[0129]
在一方面，本发明提供了颗粒，该颗粒包含：
[0130]
(a)含有根据本发明的dna酶的核心；和
[0131]
(b)任选地由包围该核心的一个或多个层组成的(盐)包衣。
[0132]
本发明的另一个方面涉及分层的颗粒，该分层的颗粒包含：
[0133]
(a)(非酶)核心；
[0134]
(b)包围该核心的包衣，其中该包衣包含dna酶；和
[0135]
(c)任选地由包围该含有包衣的酶的一个或多个层组成的(盐)包衣。
[0136]
包封的酶配制品
[0137]
dna酶也可以配制成包封的酶配制品(
‘
包封物’)。当将酶添加到例如(液体)清洁组合物(如下文描述的洗涤剂组合物)中时，这对于将酶与其他成分分离特别有用。
[0138]
物理分离可以用于解决一种或多种酶与其他组分之间的不相容性。如果其他组分对酶有反应，或者如果其他组分是酶的底物，则可能出现不相容性。其他酶可以是蛋白酶的底物。
[0139]
酶可以包封在基质中，优选水溶性或水分散基质(例如水溶性聚合物粒子)，例如wo 2016/023685中所述。水溶性聚合物基质的实例是包含聚乙烯醇的基质组合物。此类组合物也用于以单位剂量规格包封洗涤剂组合物。
[0140]
酶也可以包封在核壳微囊中，例如描述于wo 2015/144784，或描述于ip.com披露ipcom000239419d中。
[0141]
可以使用本领域已知的多种技术制备此类核壳胶囊，例如，使用油包水型或水包油乳液进行界面聚合，其中聚合物在乳液中的液滴表面(水和油之间的界面)交联，因此，在每个液滴/囊周围形成壁/膜。
[0142]
共颗粒中酶的配制品
[0143]
该dna酶可以被配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于ip.com披露内容ipcom000200739d中。
[0144]
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于wo 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)小于10wt沸石(无水的基础上)；和(c)少于10wt磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分(sink component)，并且所述组合物另外还包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。wo2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选地织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)使所述表面在水性洗涤液中与如在本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥该表面。
[0145]
多酶共颗粒可以包含dna酶和(a)选自由以下组成的组的一种或多种酶：首次洗涤脂肪酶、清洁纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶及其混合物；和(b)选自由以下组成的组一种或多种酶：半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、玻璃酸酶、软骨素酶、淀粉酶、及其混合物。
[0146]
配制品中酶的纯化
[0147]
可以将上述酶配制品中使用的dna酶纯化至任何希望的纯度。这包括高水平的纯化，例如通过使用结晶方法实现，但也包括无纯化或低水平的纯化，例如通过使用粗发酵液实现，如wo 2001/025411或wo 2009/152176中所述。
[0148]
微生物
[0149]
酶配制品以及以下所述的洗涤剂配制品可包含一种或多种微生物或微生物体。通常，在酶/洗涤剂配制品中可以使用任何合适的量/浓度的任何一种或多种微生物。微生物可以作为唯一的生物活性成分使用，但它们也可以与上述一种或多种酶结合使用。
[0150]
添加一种或多种微生物的目的可以是例如在wo 2012/112718中所述的减少恶臭。其他目的可包括原位产生合意的生物化合物，或者用一种或多种微生物接种/占据位置，以竞争地预防其他非希望的微生物形式占据相同位置(竞争排斥)。
[0151]
术语“微生物”通常意指通过显微镜可见的小的生物。微生物通常以单细胞或细胞集落的形式存在。一些微生物可能是多细胞的。微生物包括原核生物(例如，细菌和古生菌)和真核生物(例如，一些真菌、藻类、原生动物)。细菌的实例可以是革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。细菌的实例形式包括营养细胞和芽孢。真菌的实例可以是酵母、霉菌和蕈类。真菌的实例形式包括菌丝和孢子。在本文中，病毒可以被认为是微生物。
[0152]
微生物可以是重组或非重组的。在一些实例中，微生物可以产生可用于包含在洗涤剂组合物中的各种物质(例如，酶)。来自微生物的提取物或提取物的级分可用于洗涤剂中。在洗涤剂中也可以使用培养微生物的培养基或来自培养基的提取物或分离物。在微生物的一些具体实例中，由微生物，其提取物、培养基和级分产生的物质可以特别排除在洗涤剂之外。在一些实例中，微生物或由微生物产生或提取的物质可以激活、增强、保存、延长洗涤剂活性或洗涤剂所含的组分的活性等。
[0153]
通常，可以使用本领域已知的方法培养微生物。然后可以以各种方式处理或配制微生物。在一些实例中，微生物可以是干的(例如，冻干的)。在一些实例中，微生物可以是被包封的(例如，喷雾干燥)。许多其他处理或配制也是可能的。这些处理或制备有利于随时间和/或在洗涤剂组分存在下保留微生物活力。然而，在一些实例中，洗涤剂中的微生物可能是无活力的。可以在使用之前或在使用洗涤剂时将经处理/配制的微生物添加到洗涤剂中。
[0154]
在一个实施例中，微生物是芽孢杆菌属物种，例如选自由以下组成的组的至少一种芽孢杆菌属物种：枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌(bacillus atrophaeus)、短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)、巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)或其组合。在优选的实施例中，上述芽孢杆菌属物种均处于芽孢形式，这显著提高了储存稳定性。
[0155]
洗涤剂组合物
[0156]
在一个实施例中，本发明涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含与一种或多种另外的清洁组合物组分组合的本发明的酶。在一个实施例中，该洗涤剂组合物包含具有dna酶活性的多肽，该多肽包含seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、或seq id no:9中列出的氨基酸序列。该洗涤剂组合物可以额外地包含纤维素酶，该纤维素酶具有seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、或seq id no:14中列出的氨基酸序列。在一个实施例中，该洗涤剂组合物处于固体形式。在另一个实施例中，该洗涤剂组合物处于液体或凝胶形式。在另一个实施例中，该洗涤剂组合物处于条状形式。在一个实施例中，该洗涤剂可以包裹于水溶性pvoh膜中。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所阐述的示例性非限制性组分。
[0157]
液体洗涤剂组合物
[0158]
该液体洗涤剂组合物可以包含本发明的微囊，并且由此形成处于任何形式的任何洗涤剂组合物的一部分，如液体和粉末洗涤剂，以及皂和洗涤剂条。
[0159]
在一个实施例中，本发明涉及液体洗涤剂组合物，这些组合物包含微囊(如上所述)与一种或多种另外的清洁组合物组分组合。
[0160]
可以将微囊(如上所述)按对应于从0.0001％至5％(w/w)活性酶蛋白(aep)的量添加至该液体洗涤剂组合物中；优选地从0.001％至5％，更优选地从0.005％至5％，更优选地从0.005％至4％，更优选地从0.005％至3％，更优选地从0.005％至2％，甚至更优选地从0.01％至2％，并且最优选地从0.01％至1％(w/w)活性酶蛋白。
[0161]
液体洗涤剂组合物具有物理形式，它不是固体(或气体)。它可以是可倾流的液体、糊剂、可倾流的凝胶或不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的或结构性的，优选各向同性的。它可以是用于在自动洗涤机中洗涤或用于手洗的配制品。它还可以是个人护理产品，例如个人护理产品洗发水、牙膏、或洗手皂。
[0162]
液体洗涤剂组合物可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、或高达20％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以包含于水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以含有从0％-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的，其中水含量低于10％，优选低于5％。
[0163]
洗涤剂成分可以通过水可溶的袋中的室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
[0164]
洗涤剂组合物可以采用单位剂量产品的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它越来越多地用于针对衣物的洗涤剂中。洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂量值的包装(例如，在由水溶性膜制得的袋中)。
[0165]
袋可以具有适合保存组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物、或其衍生物是经选择的聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物、以及羟丙基甲基纤维素(hpmc)。优选地，聚合物在膜例如pva中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是混合组合物，其包含可通过水解可降解的以及水溶性的聚合物混合物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商标名称(trade reference)m8630下，由美国克里斯克拉夫特工业产品公司(chris craft in.prod.of gary，ind.,us)销售)，以及增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中，液体组分的室可以与含固体的室不同(参见例如，us 2009/0011970)。
[0166]
洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据特定的功能性以通用标题对以下提及的组分进行了分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
[0167]
另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所阐述的示例性非限制性组分。
[0168]
表面活性剂
[0169]
清洁组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的，或其混合物。在特定的实施例中，洗涤剂组合物包括表面活性剂体系(包含多于一种表面活性剂)，例如一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。在一个实施例中，洗涤剂包含至少一种阴离子表面活性剂比至少一种非离子表面活性剂，阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比可以为10:1至1:10。在一个实施例中，阴离子表面活性剂的量高于非离子表面活性剂的量，例如阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比可以为10:1至1.1:1或5:1至1.5:1。阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的量也可以相等并且重量比为1:1。在一个实施例中，非离子表面活性剂的量高于阴离子表面活性剂的量，并且重量比可以为1:10至1:1.1。阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比优选为10:1至1:10，如5:1至1:5，或5:1至1:1.2。优选地，非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的重量分数为0至0.5或0至0.2，因此如果重量分数为0，则可以存在或不存在非离子表面活性剂，但是如果存在非离子表面活性剂，则非离子表面活性剂的重量分数优选为阴离子表面活性剂和非离子表面活性
剂总重量的至多50％或至多20％。轻垢洗涤剂通常包含比阴离子表面活性剂更多的非离子表面活性剂，并且其中非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的分数优选为0.5至0.9。一种或多种表面活性剂的总重量通常以按重量计约0.1％至约60％，例如约1％至约40％，或约3％至约20％，或约3％至约10％的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阴离子表面活性剂，如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，通常以钠盐或钾盐可用，或单乙醇胺(mea，2-氨基乙-1-醇)或三乙醇胺(tea，2,2',2
”‑
次氮基三乙-1-醇)；特别是直链烷基苯磺酸盐(las)、las的异构体，如支链烷基苯磺酸盐(babs)和苯基链烷磺酸盐；烯烃磺酸盐，特别是α-烯烃磺酸盐(aos)；烷基硫酸盐(as)，特别是脂肪醇硫酸盐(fas)，即伯醇硫酸盐(pas)，例如十二烷基硫酸盐；醇醚硫酸盐(aes或aeos或fes，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)；石蜡磺酸盐(ps)，包括链烷-1-磺酸盐和仲链烷磺酸盐(sas)；酯磺酸盐，包括磺化脂肪酸甘油酯和α-磺基脂肪酸甲酯(α-sfme或ses或mes)；烷基琥珀酸或烯基琥珀酸，如十二碳烯基/十四碳烯基琥珀酸(dtsa)；磺基琥珀酸的二酯和单酯；氨基酸的脂肪酸衍生物。此外，可以包括脂肪酸盐(皂)。
[0170]
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阳离子型表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(admeaq)、十六烷基三甲基溴化铵(ctab)、二甲基二硬脂酰氯化铵(dsdmac)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(aqa)化合物、酯季铵及其组合。
[0171]
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(ae或aeo)(例如aeo系列如aeo-7)、醇丙氧基化物(特别是丙氧基化脂肪醇(pfa)、乙氧基化醇和丙氧基化醇)、烷氧基化脂肪酸烷基酯(如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯(尤其是乙氧基甲酯，mee))、烷基多糖苷(apg)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(fam)、脂肪酸二乙醇酰胺(fada)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(efam)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(pfam)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的n-酰基n-烷基衍生物(葡糖酰胺(ga)、或脂肪酸葡糖酰胺(faga))，以及可以商品名span和tween获得的产品、及其组合。
[0172]
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.01％至约10％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(ao)，如烷基二甲基氧化胺，特别是n-(椰油酰烷基)-n,n-二甲基氧化胺和n-(牛脂烷基)-n,n-双(2-羟乙基)氧化胺及其组合。
[0173]
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计约0.01％至约10％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
[0174]
可以使用另外的生物基表面活性剂，例如其中表面活性剂是基于糖的非离子表面
活性剂，其可以是己基-β-d-麦芽吡喃糖苷、硫代麦芽吡喃糖苷或环状麦芽吡喃糖苷，例如ep 2516606 b1中所述。
[0175]
水溶助剂
[0176]
水溶助剂是如下化合物，该化合物在水溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)。典型地，水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲性质，如由表面活性剂已知的)；然而，水溶助剂的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如通过hodgdon和kaler(2007),current opinion in colloid&interface science[胶体和界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。相反，许多水溶助剂显示连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。水溶助剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，例如相分离或高粘度。
[0177]
洗涤剂可以含有按重量计0％-10％，例如按重量计0％-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(sts)、二甲苯磺酸钠(sxs)、枯烯磺酸钠(scs)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
[0178]
助洗剂和共助洗剂
[0179]
洗涤剂组合物可以含有按重量计约0％-65％(如约5％至约50％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地在40％-65％的范围内，特别是50％-65％的范围内。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与ca和mg形成水溶性复合物的螯合试剂。可以利用本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。
[0180]
助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(stp或stpp)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自科莱恩特公司(clariant)的sks-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(mea)、二乙醇胺(dea，也称为2,2
’‑
亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(tea，也称为2,2',2
”‑
次氮基三乙-1-醇)以及(羧甲基)菊粉(cmi)、及其组合。
[0181]
该洗涤剂组合物还可以含有按重量计从约0％-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂，或与助洗剂(例如沸石助洗剂)组合。共助洗剂的非限制性实例包括或其共聚物，如聚(丙烯酸)(paa)或共聚(丙烯酸/马来酸)(paa/pma)。根据本发明，这些组分可以以低于目前可用的洗涤剂组合物中的水平包含在内。进一步的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐、和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2',2
”‑
次氨基三乙酸(nta)、乙二胺四乙酸(edta)、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)、亚氨基二琥珀酸(ids)、乙二胺-n,n'-二丁二酸(edds)、甲基甘氨酸二乙酸(mgda)、谷氨酸-n,n-二乙酸(glda)、1-羟基乙烷-1,1-二
基双(膦酸(hedp)、乙二胺四亚甲基四(膦酸)(edtmpa)、二亚乙基三胺五亚甲基(膦酸)(dtmpa或dtpmpa)、n-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(edg)、天冬氨酸-n-单乙酸(asma)、天冬氨酸-n,n-二乙酸(asda)、天冬氨酸-n-单丙酸(asmp)、亚氨基二琥珀酸(ida)、n-(2-磺甲基)天冬氨酸(smas)、n-(2-磺乙基)天冬氨酸(seas)、n-(2-磺甲基)谷氨酸(smgl)、n-(2-磺乙基)谷氨酸(segl)、n-甲基亚氨基二乙酸(mida)、α-丙氨酸-n,n-二乙酸(α-alda)、丝氨酸-n,n-二乙酸(seda)、异丝氨酸-n,n-二乙酸(isda)、苯丙氨酸-n,n-二乙酸(phda)、邻氨基苯甲酸-n,n-二乙酸(anda)、磺胺酸-n,n-二乙酸(slda)、牛磺酸-n,n-二乙酸(tuda)以及磺甲基-n,n-二乙酸(smda)、n-(2-羟乙基)亚乙基二胺-n,n',n
”‑
三乙酸(hedta)、二乙醇甘氨酸(deg)、氨基三亚甲基(膦酸)(atmp)、及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如wo 09/102854、us 5977053中。
[0182]
漂白系统
[0183]
该清洁组合物按重量计可以含有0％-50％(如1％-40％、如1％-30％、如约1％至约20％)的漂白系统。可以利用包含本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的组分的任何氧基漂白系统。适合的漂白系统组分包括过氧化氢源；过酸和过酸源(漂白活化剂)；和漂白催化剂或增效剂。
[0184]
过氧化氢源：
[0185]
合适的过氧化氢源是无机过酸盐，包括碱金属盐(如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水合物或四水合物))，以及过氧化氢―尿素(1/1)。
[0186]
过酸源：
[0187]
过酸可以是(a)直接作为预形成过酸掺入，或(b)从过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成，或(c)从过氧化氢和过水解酶和后者适合的底物(例如酯)在洗涤液中原位形成。
[0188]
a)合适的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸(如过氧苯甲酸)及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(pap)]、和邻-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸，如二过氧十二烷二酸，二过氧壬二酸，二过氧癸二酸，二过氧巴西基酸，2-癸基二过氧丁二酸，以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及所述化合物的混合物。应理解的是，在一些情况下，所提到的过酸可能最好是作为适合的盐添加，如碱金属盐(例如)或碱土金属盐。
[0189]
b)合适的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈类或酸酐类别的那些，以及适用时，其盐。适合的实例是四乙酰基乙二胺(taed)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(isonobs)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(lobs)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(doba)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(nobs)和/或披露于wo 98/17767中的那些。目的漂白活化剂的特定家族披露于ep 624154中并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(atc)。atc或短链甘油三酯(像三醋精)具有它们是环境友好的优点。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，atc是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。
[0190]
漂白催化剂和增效剂
[0191]
该漂白系统还可以包括漂白催化剂或增效剂。
[0192]
可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂、和锰三氮杂环壬烷(mntacn)催化剂；特别优选的是锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me3-tacn)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me4-tacn)的络合物，特别是me3-tacn，如双核锰络合物[(me3-tacn)mn(o)3mn(me3-tacn)](pf6)2、和[2,2',2
”‑
次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κn-甲基亚基)三酚并-κ3o]锰(iii)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物，如铁或钴络合物。
[0193]
在其中过酸源包括在内的一些实施例中，可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂：
[0194](i)[0195]
(ii)
[0196]
(iii)及其混合物；其中每个r1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基基团或含有从11至24个碳的直链烷基基团，优选地每个r1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基基团或含有从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地每个r1独立地选自由以下组成的组：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。
[0197]
其他示例性漂白系统描述于例如wo 2007/087258、wo 2007/087244、wo 2007/087259、ep 1867708(维生素k)以及wo 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
[0198]
聚合物
[0199]
通常，洗涤剂组合物可以含有按重量计0％-10％，如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁、和/或消泡性质。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的性质和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括聚(乙烯醇)(pva)、聚(乙烯吡咯烷酮)(pvp)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(peg)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(cmi)、和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(pet-poet)、pvp、聚(乙烯基咪唑)(pvi)、聚(乙烯吡啶-n-氧化物)(pvpo或pvpno)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(pvpvi)。更多示例性聚合物包括聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(peo-ppo)、乙氧基硫酸双季铵盐、苯乙烯/丙烯酸共聚物和香料胶囊。其他示例性聚合物披露于例如wo 2006/130575中。还设想到了上文提到的聚合物的盐。
[0200]
然而，根据本发明，上述聚合物中的某些(即聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合)可以以低于目前可用的洗涤剂组合物中的水平包含在内，或甚至更优选地完
全不包含，因为其可以被dna酶替代或部分替代。
[0201]
织物调色剂
[0202]
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如染料或颜料，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包含所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括颜料。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由落入颜色索引(colour index)(c.i.)分类的以下染料组成的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如描述于wo 2005/03274、wo 2005/03275、wo 2005/03276和ep 1876226中(将其通过引用而特此并入)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如wo 2007/087257和wo 2007/087243中。
[0203]
另外的酶
[0204]
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。
[0205]
通常，一种或多种所选酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即，最适ph、与其他酶和非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
[0206]
纤维素酶
[0207]
适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的酶的单组分和混合物。也设想到了化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。纤维素酶可以例如是单组分内切-1,4-β-葡聚糖酶(又称为内切葡聚糖酶)、或单组分内切-1,4-β-葡聚糖酶的混合物。
[0208]
适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属(pseudomonas)、腐质霉属(humicola)、毁丝霉属(myceliophthora)、镰孢属(fusarium)、梭孢壳属(thielavia)、木霉属(trichoderma)、和枝顶孢属(acremonium)的那些。示例性纤维素酶包括来自特异腐质霉(us 4,435,307)或来自木霉属(例如里氏木霉(t.reesei)或绿色木霉(t.viride))的真菌纤维素酶。其他适合的纤维素酶来自梭孢壳属，例如在wo 96/29397中描述的土生梭孢壳霉(thielavia terrestris)或在us 5,648,263、us 5,691,178、us 5,776,757、wo 89/09259、和wo 91/17244中披露的由嗜热毁丝霉(myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢(fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。如wo 02/099091和jp 2000210081中所述，来自芽孢杆菌属的纤维素酶也是相关的。适合的纤维素酶是具有护理益处的碱性或中性纤维素酶。纤维素酶的实例在ep 0 495 257、ep 0 531 372、wo 96/11262、wo 96/29397、wo 98/08940中描述。其他实例是如描述于wo 94/07998、ep 0 531 315、us 5,457,046、us 5,686,593、us 5,763,254、wo 95/24471、wo 98/12307中的那些纤维素酶变体。
[0209]
其他纤维素酶是具有如下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与wo 2002/099091的seq id no:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性；或具有如下
序列的家族44木葡聚糖酶，该序列与wo 2001/062903的seq id no:2的位置40-559具有至少60％同一性。
[0210]
可商购的纤维素酶包括premium、premium、classic、(诺维信公司(novozymes a/s))、puradax ha、和puradax eg(可从杰能科国际公司(genencor international inc.)获得)、以及kac-500(b)
tm
(花王株式会社(kao corporation))。
[0211]
在实施例中，纤维素酶获得自腐质霉、特别是特异腐质霉。在实施例中，纤维素酶包含seq id no:10的氨基酸序列，或包含与seq id no:10的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:10的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0212]
在实施例中，纤维素酶获得自芽孢杆菌属、特别是秋叶氏芽孢杆菌。在实施例中，纤维素酶包含seq id no:11的氨基酸序列，或包含与seq id no:11的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:11的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0213]
在实施例中，纤维素酶获得自类芽孢杆菌属(paenibacillus)、特别是多黏类芽孢杆菌。在实施例中，纤维素酶包含seq id no:12的氨基酸序列，或包含与seq id no:12的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:12的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0214]
在实施例中，纤维素酶获得自黑果菌属(melanocarpus)、特别是热白丝菌。在实施例中，纤维素酶包含seq id no:13的氨基酸序列，或包含与seq id no:13的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含seq id no:13的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
[0215]
甘露聚糖酶
[0216]
适合的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是来自粘琼脂芽孢杆菌(b.agaradhaerens)、地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)、嗜碱芽孢杆菌(b.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(b.clausii)、或特异腐质霉。适合的甘露聚糖酶描述于wo 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是mannaway(诺维信公司)。
[0217]
蛋白酶
[0218]
适合的蛋白酶可以是任何来源的，但优选地是细菌或真菌来源的，任选地呈蛋白质工程化的或化学修饰的突变体的形式。蛋白酶可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是s1家族的(如胰蛋白酶)或s8家族的(如枯草杆菌蛋白酶(subtilisin))。金属蛋白酶可以例如是嗜热菌蛋白酶，例如来自m4家族的嗜热菌蛋白酶，或另一种金属蛋白酶，如来自m5、m7或m8家族的那些。
[0219]
术语“枯草杆菌酶(subtilase)”是指根据siezen等人,protein eng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和siezen等人,protein sci.[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶的亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为六个亚类：枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶k家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、kexin家族和pyrolysin家族。
[0220]
尽管适于洗涤剂用途的蛋白酶可以获得自多种生物(包括如曲霉属等真菌)，但洗涤剂蛋白酶通常已获得自细菌(特别是从芽孢杆菌属)。来源于枯草杆菌酶的芽孢杆菌属物种的实例包括迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(bacillus alkalophilus)、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌(bacillus gibsonii)。特定的枯草杆菌蛋白酶包括迟缓枯草杆菌蛋白酶(subtilisin lentus)、枯草杆菌蛋白酶novo、枯草杆菌蛋白酶carlsberg、枯草杆菌蛋白酶bpn'、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168、以及例如蛋白酶pd138(在wo 93/18140中描述)。其他有用的蛋白酶是例如在wo 01/16285和wo 02/16547中描述的那些。
[0221]
胰蛋白酶样蛋白酶的实例包括镰孢属蛋白酶(在wo 94/25583和wo 2005/040372中描述)，以及来源于纤维单胞菌(cellumonas)的糜蛋白酶(在wo 2005/052161和wo 2005/052146中描述)。
[0222]
金属蛋白酶的实例包括在wo 2007/044993中描述的中性金属蛋白酶(如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些)，以及例如在wo 2015/158723和wo 2016/075078中描述的金属蛋白酶。
[0223]
有用的蛋白酶的实例是在wo 89/06279、wo 92/19729、wo 96/34946、wo 98/20115、wo 98/20116、wo 99/11768、wo 01/44452、wo 03/006602、wo 2004/003186、wo 2004/041979、wo 2007/006305、wo 2011/036263、wo 2014/207227、wo 2016/087617和wo 2016/174234中描述的蛋白酶变体。优选的蛋白酶变体可以例如包含选自由以下组成的组的一个或多个突变：s3t、v4i、s9r、s9e、a15t、s24g、s24r、k27r、n42r、s55p、g59e、g59d、n60d、n60e、v66a、n74d、s85r、a96s、s97g、s97d、s97a、s97sd、s99e、s99d、s99g、s99m、s99n、s99r、s99h、s101a、v102i、v102y、v102n、s104a、g116v、g116r、h118d、h118n、a120s、s126l、p127q、s128a、s154d、a156e、g157d、g157p、s158e、y161a、r164s、q176e、n179e、s182e、q185n、a188p、g189e、v193m、n198d、v199i、q200l、y203w、s206g、l211q、l211d、n212d、n212s、m216s、a226v、k229l、q230h、q239r、n246k、s253d、n255w、n255d、n255e、l256e、l256d t268a和r269h，其中位置编号对应于wo 2016/001449的seq id no:1所示的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置。具有这些突变中的一个或多个的蛋白酶变体优选是wo 2016/001449的seq id no:1所示的迟缓芽孢杆菌蛋白酶(也称为枯草杆菌蛋白酶309)的变体或wo 2016/001449的seq id no:2所示的解淀粉芽孢杆菌蛋白酶(bpn')的变体。此类蛋白酶变体
与wo 2016/001449的seq id no:1或seq id no:2优选地具有至少80％序列同一性。
[0224]
另一种目的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌dsm 5483的碱性蛋白酶(如例如在wo 91/02792中所述)及其变体(这些变体例如在wo 92/21760、wo 95/23221、ep 1921147、ep 1921148和wo 2016/096711中描述)。
[0225]
可替代地，蛋白酶可以是具有wo 2004/067737的seq id no:1的ty145蛋白酶的变体，例如在与wo 2004/067737的seq id no:1的位置27、109、111、171、173、174、175、180、182、184、198、199和297对应的一个或多个位置处包含取代的变体，其中所述蛋白酶变体与wo 2004/067737的seq id no:1具有至少75％但少于100％的序列同一性。目的ty145变体描述于例如wo 2015/014790、wo 2015/014803、wo 2015/014804、wo 2016/097350、wo 2016/097352、wo 2016/097357和wo 2016/097354中。
[0226]
优选的蛋白酶的实例包括：
[0227]
(a)包含选自由以下组成的组的两个或更多个取代的wo 2016/001449的seq id no:1的变体：s9e、n43r、n76d、q206l、y209w、s259d和l262e，例如具有取代s9e、n43r、n76d、v205i、q206l、y209w、s259d、n261w和l262e，或具有取代s9e、n43r、n76d、n185e、s188e、q191n、a194p、q206l、y209w、s259d和l262e的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0228]
(b)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有突变s99se的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0229]
(c)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有突变s99ad的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0230]
(d)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有取代y167a+r170s+a194p的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0231]
(e)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有取代s9r+a15t+v68a+n218d+q245r的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0232]
(f)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有取代s9r+a15t+g61e+v68a+a194p+v205i+q245r+n261d的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0233]
(g)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有取代s99d+s101r/e+s103a+v104i+g160s的变体；例如，wo 2016/001449的seq id no:1的具有取代s3t+v4i+s99d+s101e+s103a+v104i+g160s+v205i的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0234]
(h)wo 2016/001449的seq id no:2的多肽的具有取代s24g+s53g+s78n+s101n+g128a/s+y217q的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0235]
(i)以登录号ber84782披露于geneseqp中的多肽，其对应于wo 2017/210295中的seq id no:302；
[0236]
(j)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有取代s99d+s101e+s103a+v104i+s156d+g160s+l262e的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
[0237]
(k)wo 2016/001449的seq id no:1的多肽的具有取代s9r+a15t+g61e+v68a+n76d+s99g+n218d+q245r的变体，其中位置编号基于wo 2016/001449的seq id no:2的编号；
no:1具有90％序列同一性的变体。seq id no:1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：n21、d97、v128、k177、r179、s180、i181、g182、m200、l204、e242、g477和g478。seq id no:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：n21d、d97n、v128i、k177l、m200l、l204yf、e242qa、g477k、以及g478k，和/或在位置r179和/或s180或i181和/或g182中具有缺失的那些。seq id no:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
[0267]
n21d+d97n+v128i
[0268]
其中这些变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
[0269]
其他适合的淀粉酶是具有wo 01/66712中的seq id no:12的α-淀粉酶或与seq id no:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在wo 01/66712中的seq id no:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：r28、r118、n174；r181、g182、d183、g184、g186、w189、n195、m202、y298、n299、k302、s303、n306、r310、n314；r320、h324、e345、y396、r400、w439、r444、n445、k446、q449、r458、n471、n484。特别优选的淀粉酶包括具有d183和g184的缺失并且具有取代r118k、n195f、r320k和r458k的变体，以及另外在选自下组的一个或多个位置处具有取代的变体：m9、g149、g182、g186、m202、t257、y295、n299、m323、e345、和a339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
[0270]
其他实例是淀粉酶变体，如在wo 2011/098531、wo 2013/001078和wo 2013/001087中描述的那些。
[0271]
可商购的淀粉酶是duramyl
tm
、termamyl
tm
、fungamyl
tm
、stainzyme
tm
、stainzyme plus
tm
、natalase
tm
、liquozyme x和ban
tm
(来自诺维信公司)、以及rapidase
tm
、purastar
tm
/effectenz
tm
、powerase、preferenz s1000、preferenz s100和preferenz s110(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。
[0272]
过氧化物酶/氧化酶
[0273]
适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌、或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(coprinus)，例如来自灰盖鬼伞(c.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如在wo 93/24618、wo 95/10602、以及wo 98/15257中描述的那些。可商购的过氧化物酶包括guardzyme
tm
(诺维信公司(novozymes a/s))。
[0274]
适合的过氧化物酶优选是由国际生物化学与分子生物学联合会(iubmb)命名委员会(nomenclature committee of the international union of biochemistry and molecular biology)陈述的酶分类ec 1.11.1.7，或源自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段构成的过氧化物酶。
[0275]
适合的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(e.c.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。卤代过氧化物酶可以是氯过氧化物酶。优选地，卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在优选方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。
[0276]
已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中
分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(c.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(c.verruculosa)和不等弯孢(c.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
[0277]
还已从细菌如假单胞菌属(例如吡咯假单胞菌(p.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(s.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
[0278]
卤代过氧化物酶可来源于弯孢属物种，特别是疣枝弯孢或不等弯孢，如描述于wo 95/27046中的不等弯孢cbs 102.42；或如描述于wo 97/04102中的疣枝弯孢cbs 147.63或疣枝弯孢cbs 444.70；或来源于如描述于wo 01/79459中的drechslera hartlebii、如描述于wo 01/79458中的盐沼小树状霉(dendryphiella salina)、如描述于wo 01/79461中的phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于wo 01/79460中的棉丝菌属物种(geniculosporium sp.)。
[0279]
适合的氧化酶特别地包括由酶分类ec 1.10.3.2所构成的任何漆酶或源自其的展现出漆酶活性的任何片段、或展现出类似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(ec 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(ec 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(ec 1.3.3.5)。
[0280]
优选的漆酶是微生物来源的酶。酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
[0281]
来自真菌的合适实例包括可来源于以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(collybia)，层孔菌属(fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(r.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(c.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(c.friesii)及褶纹鬼伞(c.plicatilis))，小脆柄菇属(psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(p.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(p.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，柱顶孢霉属(schytalidium)(例如，嗜热柱顶孢霉(s.thermophilum))，多孔菌属(例如，p.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(p.radiata))(wo 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(c.hirsutus))(jp 2238885)。
[0282]
来自细菌的合适的实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
[0283]
优选的是来源于拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是来源于灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于wo 97/08325中；或来源于嗜热毁丝霉，如披露于wo 95/33836中。
[0284]
其他材料
[0285]
还可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂/崩解试剂、染料、酶稳定剂(包括原硼酸、硼酸盐、和/或多元醇，如丙二醇)、织物柔顺剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
[0286]
分散剂
[0287]
本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。特别地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚的或共聚的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。适合的分散剂例如描述于powdered detergents[粉末洗涤
剂],surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,马塞尔德克尔公司(marcel dekker,inc.)中。
[0288]
然而，根据本发明，上述聚合物中的某些(即聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合)可以以低于目前可用的洗涤剂组合物中的水平包含在内，或甚至更优选地完全不包含。
[0289]
染料转移抑制剂
[0290]
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺n-氧化物聚合物、n-乙烯吡咯烷酮和n-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
[0291]
荧光增白剂
[0292]
本发明的洗涤剂组合物将优选地还含有另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，增亮剂的水平优选地为约0.01％至约0.5％。在本发明的组合物中可以使用适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(n-甲基-n-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2h-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(e)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴
–
嘉基股份有限公司(ciba-geigy ag)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(tinopal)dms和天来宝cbs。天来宝dms是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝cbs是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的parawhite kx，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(paramount minerals and chemicals)供应。天来宝cbs-x是4.4'-双-(磺基苯乙烯基)-联苯基二钠盐，也称作二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠盐。适用于在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
[0293]
适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
[0294]
污垢释放聚合物
[0295]
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和基于聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如powdered detergents[粉末洗涤剂],surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,第7章，马塞尔
·
德克尔公司。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核芯结构和附接至该核芯结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核芯结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺
结构，如在wo 2009/087523中详细描述的(将其通过引用而特此并入)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于wo 2007/138054、wo 2006/108856以及wo 2006/113314中(将其通过引用而特此并入)。
[0296]
抗再沉积剂
[0297]
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(cmc)、聚乙烯醇(pva)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(peg)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
[0298]
然而，根据本发明，上述聚合物中的某些(即聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合)可以以低于目前可用的洗涤剂组合物中的水平包含在内，或甚至更优选地完全不包含，因为其可以被dna酶替代或部分替代。
[0299]
流变改性剂
[0300]
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自由以下组成的组：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在ep 2169040中所示。
[0301]
其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
[0302]
洗涤剂产品的配制
[0303]
本发明的洗涤剂组合物可以呈任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
[0304]
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(hpmc)。优选地，聚合物在膜例如pva中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，这些共混组合物包含可水解降解并且可水溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号m8630下，如由美国印第安纳州的monosol有限责任公司(monosol llc)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。可用于液体组分的室在组成上可以与含有固体的室不同：us 2009/0011970 a1。
[0305]
可以由水溶性袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤液中，每个室的不同溶解曲线还可以引
起选择的组分的延迟溶解。
[0306]
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且最高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚、以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0％-30％的有机溶剂。
[0307]
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
[0308]
洗衣皂条
[0309]
本发明的dna酶可以被添加至洗衣皂条中并且用于手洗洗衣、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条、以及洗涤剂条。条的类型的通常区别在于他们含有的表面活性剂的类型，并且术语洗衣皂条包括含有来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶、或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间显著变化的物理形式，即如果固体物体(例如洗衣皂条)被放置在容器里，该固体物体不会为了填充其被放置的容器而发生改变。该条是固体时典型地是条的形式但也可以是其他的固体形状诸如圆形或椭圆。
[0310]
该洗衣皂条可以包含一个或多个另外的酶、蛋白酶抑制剂如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物如4-甲酸基苯硼酸、一个或多个皂或合成的表面活性剂、多元醇如甘油、ph控制化合物如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或一价阳离子和有机阴离子的盐，其中该一价阳离子可以是例如na
+
、k
+
或nh
4+
并且该有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐，这样使得一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。
[0311]
洗衣皂条还可以包含复合剂像edta和hedp、香料和/或不同类型的填料、表面活性剂例如阴离子合成表面活性剂、助洗剂、聚合的污垢释放剂、洗涤剂螯合剂、稳定剂、填料、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化的聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、浸出剂、漂白活化剂、粘土去污剂、抗再沉积剂、聚合分散剂、增亮剂、织物柔软剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。
[0312]
洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，该设备例如但不限于：混合器、压条机(例如两级真空压条机)、挤出机、切割机、标识压模、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在过程的不同阶段向皂中添加本发明的预混料。例如，可以制备含有皂、dna酶、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料并且然后将该混合物压条。可以同时添加作为例如处于液态的蛋白酶抑制剂的dna酶以及任选的另外的酶。除了混合步骤和压条步骤以外，该过程还可以进一步包含研磨、挤出、切割、压模、冷却和/或包装的步骤。
[0313]
在以下段落中进一步总结了本发明：
[0314]
段落1.在洗涤剂中具有dna酶活性的多肽在洗涤周期期间在以下不存在的情况下用于维持或改善物品白度的用途：聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合，其中该物品是纺织品。
[0315]
段落2.在洗涤剂中具有dna酶活性的多肽在洗涤周期期间在如下情况下用于维持或改善物品白度的用途：减少或甚至替代聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚
丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合。
[0316]
段落3.在洗涤剂中具有dna酶活性的多肽在洗涤周期期间在以下不存在的情况下用于防止、减少或去除污垢再沉积到物品上的用途：聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合，其中该物品是纺织品。
[0317]
段落4.如任一前述段落所述的用途，其中该具有dna酶活性的多肽获得自真菌来源。
[0318]
段落5.如任一前述段落所述的用途，其中该具有dna酶活性的多肽获得自曲霉属，例如米曲霉。
[0319]
段落6.如任一前述段落所述的用途，其中该具有dna酶活性的多肽获得自细菌来源。
[0320]
段落7.如任一前述段落所述的用途，其中该具有dna酶活性的多肽获得自芽孢杆菌属，例如食物芽孢杆菌。
[0321]
段落8.如任一前述段落所述的用途，其中该具有dna酶活性的多肽具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:1，seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:14，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或甚至100％序列同一性的多肽。
[0322]
段落9.如任一前述段落所述的用途，该用途与在聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合存在下的用途相比提供了改善的白度和/或改善的抗再沉积。
[0323]
段落10.如任一前述段落所述的用途，其中该洗涤剂是不存在聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、和/或其组合的液体洗涤剂。
[0324]
段落11.如段落1-9中任一项所述的用途，其中该洗涤剂是不存在羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素、及其组合的粉末洗涤剂。
[0325]
段落12.如任一前述段落所述的用途，进一步包含具有纤维素酶活性的多肽的用途。
[0326]
段落13.如段落12所述的用途，其中该具有纤维素酶活性的多肽具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或甚至100％序列同一性的多肽。
[0327]
段落14.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含具有脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性的多肽和洗涤剂辅助剂成分，条件是该组合物包含按质量计少于1％，例如少于0.8％、少于0.7％、少于0.6％、少于0.5％、少于0.4％、少于0.3％、少于0.2％、少于0.1％、少于0.05％、少于0.025％的聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合。
[0328]
段落15.如任一前述组合物段落所述的洗涤剂组合物，其中该多肽获得自真菌来源。
[0329]
段落16.如任一前述组合物段落所述的洗涤剂组合物，其中该多肽获得自曲霉属，例如米曲霉。
[0330]
段落17.如任一前述组合物段落所述的洗涤剂组合物，其中该多肽获得自细菌来源。
[0331]
段落18.如任一前述组合物段落所述的洗涤剂组合物，其中该多肽获得自芽孢杆菌属，例如食物芽孢杆菌。
[0332]
段落19.如任一前述组合物段落所述的洗涤剂组合物，其中该多肽具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:1，seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:14，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或甚至100％序列同一性的多肽。
[0333]
段落20.如任一前述组合物段落所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物是液体洗涤剂。
[0334]
段落21.如段落14-19中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物是粉末洗涤剂。
[0335]
段落22.如任一前述洗涤剂组合物段落所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含具有纤维素酶活性的多肽。
[0336]
段落23.如段落22所述的洗涤剂组合物，其中该具有纤维素酶活性的多肽具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或甚至100％序列同一性的多肽。
[0337]
段落24.一种用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
[0338]
a)在聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合不存在的情况下，将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含具有dna酶活性的多肽或含有该多肽的洗涤剂组合物；
[0339]
b)完成至少一个洗涤周期；
[0340]
c)任选地添加另外的污垢；以及
[0341]
d)任选地冲洗该物品，其中该物品是纺织品。
[0342]
段落25.如段落24所述的方法，其中与用具有聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合的洗涤剂组合物进行的洗涤方法相比，具有dna酶活性的多肽提供了相同或更好的物品白度。
[0343]
段落26.如任一前述方法段落所述的方法，其中该多肽获得自真菌来源。
[0344]
段落27.如任一前述方法段落所述的方法，其中该多肽获得自曲霉属，例如米曲霉。
[0345]
段落28.如任一前述方法段落所述的方法，其中该多肽获得自细菌来源。
[0346]
段落29.如任一前述方法段落所述的方法，其中该多肽获得自芽孢杆菌属，例如食物芽孢杆菌。
[0347]
段落30.如任一前述方法段落所述的方法，其中该多肽具有选自由以下组成的组
的氨基酸序列：seq id no:1，seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:14，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或甚至100％序列同一性的多肽。
[0348]
段落31.如任一前述方法段落所述的方法，该方法与在聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合存在下的方法相比提供了改善的白度和/或改善的抗再沉积。
[0349]
段落32.如任一前述方法段落所述的方法，其中该洗涤剂是不存在聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物和/或其组合的液体。
[0350]
段落33.如段落24-31中任一项所述的方法，其中该洗涤剂是不存在羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合的粉末洗涤剂。
[0351]
段落34.如任一前述方法段落所述的方法，进一步包含具有纤维素酶活性的多肽。
[0352]
段落35.如段落34所述的方法，其中该具有纤维素酶活性的多肽具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或甚至100％序列同一性的多肽。
[0353]
测定和洗涤剂组合物
[0354]
％。(所有百分比均为w/w活性)
[0355]
标准粉末洗涤剂-含有cmc的标准x
[0356]
成分：las((c10-c13)烷基苯-磺酸，钠盐)15％，
[0357]
非离子(aeo)(具有平均7eo的c12-c14醇乙氧基化物)2％，
[0358]
苏打灰(碳酸钠)20.1％，
[0359]
含水硅酸钠(“二硅酸盐”)9.9％，
[0360]
沸石4a 12.1％，
[0361]
共聚(丙烯酸/马来酸)，钠盐1.3％，
[0362]
硫酸钠31.4％，
[0363]
cmc 2％。
[0364]
标准粉末洗涤剂-不含cmc的标准x
[0365]
成分：las((c10-c13)烷基苯-磺酸，钠盐)15％，
[0366]
非离子(aeo)(具有平均7eo的c12-c14醇乙氧基化物)2％，
[0367]
苏打灰(碳酸钠)20.1％，
[0368]
含水硅酸钠(“二硅酸盐”)9.9％，
[0369]
沸石4a 12.1％，
[0370]
共聚(丙烯酸/马来酸)，钠盐1.3％，
[0371]
硫酸钠31.4％。
[0372]
标准洗涤剂a(液体)-含有聚合物(比较型)
[0373]
成分：12％las(c10-c13)烷基苯-磺酸，钠盐、11％非离子(aeo)(具有平均7eo的c12-c14醇乙氧基化物)、7％具有平均3 eo的aeos(sles)、6％mpg(丙二醇)、3％乙醇、3％
tea、2.75％可可脂肪酸、2.75％大豆脂肪酸、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％dtmpa和0.2％多元羧酸(sokalan cp5)。加水至100％。
[0374]
不含聚合物的标准洗涤剂
[0375]
成分：12％las(c10-c13)烷基苯-磺酸，钠盐、11％非离子(aeo)(具有平均7eo的c12-c14醇乙氧基化物)、7％具有平均3 eo的aeos(sles)、6％mpg(丙二醇)、3％乙醇、3％tea、2.75％可可脂肪酸、2.75％大豆脂肪酸、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、和0.2％dtmpa。加水至100％。
[0376]
洗涤剂组合物
[0377]
下述洗涤剂组分的范围通常可用于本发明的低聚合物洗涤剂组合物的上下文中。
[0378]
表：
[0379]
组合物1：液体洗涤剂
[0380]
[0381]
[0382][0383]
组合物2：单位剂量
[0384]
[0385]
[0386][0387]
组合物3粉末洗涤剂
[0388]
[0389]
[0390][0391]
表面活性剂成分可以获得自巴斯夫公司(basf)、路德维希港、德国(lutensol(r))；壳牌化学公司(shell chemicals)，伦敦，英国；斯泰潘公司(stepan)，诺思菲尔德，iii，美国；亨斯曼公司(huntsman)，盐湖城，犹他州，美国；科莱恩公司，苏尔茨巴赫市，德国(praepagen(r))。
[0392]
三聚磷酸钠可以获得自罗地亚公司(rhodia)、巴黎、法国。沸石可以获得自工业沸石(英国)有限公司，格雷士，艾塞克斯，英国。柠檬酸和柠檬酸钠可以获得自永本兹劳尔公司(jungbunzlauer)，巴塞尔，瑞士。nobs是壬酰基羟苯磺酸钠，由伊士曼公司(eastman)，贝茨维尔，阿肯色州，美国提供。
[0393]
taed是四乙酰乙二胺，在科莱恩有限公司(clariant gmbh)，祖尔茨巴赫，德国的peractive(r)品牌下提供。
[0394]
碳酸钠和碳酸氢钠可以获得自索尔维公司，布鲁塞尔，比利时。
[0395]
聚丙烯酸酯、聚丙烯酸酯/马来酸酯共聚物可以获得自巴斯夫公司、路德维希港、德国。
[0396]
repel-o-tex(r)可以获得自罗地亚公司(rhodia)、巴黎、法国。
[0397]
texcare(r)可以获得自科莱恩公司，祖尔茨巴赫，德国。过碳酸钠和碳酸钠可以获得自索尔维公司，休斯顿，德克萨斯州，美国。
[0398]
乙二胺-n,n
’‑
二琥珀酸的na盐，(s,s)异构体(edds)是通过联合奥泰公司(octel)，埃尔斯米尔港，英国提供。
[0399]
羟基乙醇二磷酸盐(hedp)是由美国陶氏化学公司(dow chemical)，米德兰，密歇根州，美国提供。
[0400]
酶savinase(r)、savinase(r)ultra、stainzyme(r)plus、lipex(r)、lipolex(r)、lipoclean(r)、celluclean(r)、carezyme(r)、natalase(r)、stainzyme(r)、stainzyme(r)plus、termamyl(r)、termamyl(r)ultra、和mannaway(r)可以获得自诺维信公司，巴格斯瓦德，丹麦。
[0401]
酶purafect(r)、fn3、fn4和optisize可以获得自杰能科国际公司
[0402]
帕洛阿尔托，加利福尼亚州，美国。
[0403]
直接紫9和99可以获得自巴斯夫公司、路德维希港、德国。溶剂紫13可以获得自宁波立兴化工有限公司(ningbo lixing chemical co.,ltd.)，宁波，浙江，中国。增亮剂可以获得自汽巴精化有限公司，巴塞尔，瑞士。
[0404]
除非另外指明，否则所有百分比和比率都是按重量计算。除非另外指明，否则所有百分比和比率都是基于总组合物计算。应当理解的是贯穿本说明书给出的每一最大数值限度包括每一较低的数值限度，如同此类较低数值限度在此被明确写出。贯穿本说明书给出的每一最小数值限度将包括每一较高的数值限度，如同此类较高数值限度本文被明确写出。本说明书中所给出的每个数值范围将包括落入在这样更宽泛数值范围内的每一狭小的范围，如同此类狭小的数值范围都在本文被明确写出。
[0405]
洗涤测定
[0406]
launder-o-meter(lom)模式洗涤系统
[0407]
launder-o-meter(lom)是中等规模模式洗涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。lom基本上是大型温控水浴，具有20个封闭金属烧杯在其中旋转。每个烧杯构成一个小的洗涤机并且在一次实验过程中，每一个将含有待测试的特定洗涤剂/酶系统的溶液和关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
[0408]
lom模式洗涤系统主要用于在欧洲洗涤条件下洗涤剂和酶的中等规模测试。在lom实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，lom提供了在小规模实验与在前装式洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。
[0409]
迷你launder-o-meter(迷你lom)模式洗涤系统
[0410]
迷你lom是launder-o-meter(lom)的修饰的迷你洗涤系统，其是中等规模模式洗
涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。lom基本上是大型温控水浴，具有20个封闭金属烧杯在其中旋转。每个烧杯构成一个小的洗涤机并且在一次实验过程中，每一个将含有待测试的特定洗涤剂/酶系统的溶液和关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
[0411]
lom模式洗涤系统主要用于在欧洲洗涤条件下洗涤剂和酶的中等规模测试。在lom实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，lom提供了在小规模实验(如amsa和微型洗涤)与在前装式洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。
[0412]
在迷你lom中，洗涤是在置于斯图尔特(stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。
[0413]
terg-o-tometer(tom)洗涤测定
[0414]
tergo-to-meter(tom)是中等规模模式洗涤系统，它可以应用于同时测试16种不同洗涤条件。tom基本上是一个大型温控水浴，最多可浸入16个开口金属烧杯。每个烧杯构成一个小的顶装式洗涤机并且在实验期间，它们中的每一者将含有特定洗涤剂/酶/聚合物系统的溶液并且对弄脏的和未弄脏的织物测试其性能。通过旋转搅拌臂获得机械应力，该旋转搅拌臂搅拌在每个烧杯内的液体。
[0415]
tom标准洗涤系统主要用于在例如eu或ap洗涤条件下进行洗涤剂、酶和聚合物的中等规模测试。在tom实验中，因素(如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率)可以变化。因此，tom提供了小规模实验与更费时的全规模实验之间的联系。
[0416]
设备：水浴具有16个钢制烧杯并且每个烧杯具有1个旋转臂，每个烧杯的容量是1l的洗涤剂溶液。温度范围从5℃至80℃。水浴必须用去离子水充满。转速可以设定为70至120rpm/min。
[0417]
设定terg-0-tometer中的温度并且启动在水浴中旋转。等待温度调整(公差是+/-0.5℃)。应该对所有烧杯进行清洁并且使得烧杯不含先前测试物质的痕迹。
[0418]
在一个桶中制备具有所希望的量的洗涤剂、温度和水硬度的洗涤溶液。允许将该洗涤剂在磁搅拌10min期间进行溶解。洗涤溶液应该在制备之后30至60min之内使用。
[0419]
将1l洗液添加到tom烧杯中。将洗涤液在120rpm下进行搅拌，并且任选地将一种或多种酶或聚合物添加到该烧杯中。将小块布样撒到烧杯中并且然后是压载加载物。当小块布样和压载物添加到烧杯中时开始时间测量。将小块布样洗涤20或30分钟，此后，停止搅拌。
[0420]
随后，将洗涤加载物从tom烧杯转移到筛，并且用冷自来水冲洗。将污垢小块布样从压载加载物中分离。在流动的水下，将污垢小块布样转移到含冷自来水的5l烧杯，持续5分钟。针对即将到来的灭活，分开存放压载加载物。用手轻轻压出小块布样中的水，并且置于铺有纸的托盘上。允许小块布样干燥过夜，然后对其进行分析，例如，如本文描述的使用digi-eye测量颜色强度。
[0421]
全规模洗涤(fsw)测定
[0422]
fsw用于在科学设计条件下评价洗涤机中的洗涤性能。
[0423]
洗涤条件：标准eu洗涤条件如下所述
[0424][0425]
洗涤步骤
[0426]
a.制备压载物并测试小块布样。
[0427]
b.选择用于洗涤的参数：程序和水位。请注意，使用自动注水时，已知的水位不是真正的水位。对于32l程序，实际取水量为33l。添加的酶和洗涤剂的量应该调整至反映此水位。
[0428]
c.设置并开始自动水表系统。
[0429]
d.按开始/暂停按钮开始充水并且在取水期间调整水温。在此期间自动登记用水消耗。
[0430]
e.根据水消耗添加ca/mg。
[0431]
a.按按钮搅拌水。
[0432]
b.停下来并且检查水硬度。
[0433]
f.将洗涤剂和粉末nahco3添加至机器中-短混合(10秒)。
[0434]
g.添加酶溶液或颗粒-短混合(10秒)。
[0435]
h.将压载物和小块布样添加至洗涤机中。
[0436]
i.快速重新启动洗涤机，选择洗涤程序和水位，通过按开始/暂停按钮开始洗涤。如果浸泡，搅拌30s，然后保持浸泡时间。如果检测到低水位，机器将在主要洗涤期间自动注水(0.2-1l)。
[0437]
j.在洗涤8或10min后测量ph。
[0438]
k.洗涤机默认漂洗2次。用具有相同硬度的水漂洗。如果检测到过度发泡，机器将自动添加1次漂洗。在此期间自动登记用水消耗。
[0439]
l.洗涤完成后，将该测试小块布样从茶巾中取出并置于托盘上进行干燥-确保小块布样在完全黑暗中干燥，因为许多污渍对光敏感。将小块布样干燥过夜，并且在测量前必须完全干燥。
[0440]
digi-eye测量测定(颜色测量)
[0441]
digi-eye是一种用于测量色差和捕获可重复图像的可控数字成像系统。
[0442]
它能从样品中获得反射率或比色数据。
[0443]
本文件中描述的程序是我们的标准程序。
[0444]
digi-eye具有其他功能，例如：
[0445]-一键测量多个样品(使用定制模板)
[0446]-测量光泽样品(使用“有角度的”照明(“angled”illumination))
[0447]-测量例如在测量中不包括标签的污渍
[0448]-计算某一颜色的面积(例如有污渍面积％)
[0449]
测量样品前，检查是否在过去一周内进行了白色校准，并在过去四小时内进行了颜色校准。将digi-eye设置为d65而不含uv。将样品放于白色测量板上，点击发布图标，然后使用菜单“digipix”打开“颜色测量”窗口，测量所有选定区域，然后获得结果色差r460。
[0450]
酶测定
[0451]
测定i：dna酶活性的测试
[0452]
在具有甲基绿(bd公司，富兰克林湖，新泽西州，美国)的dna酶测试琼脂上确定dna酶活性，其根据供应商的手册制备。简言之，将21g琼脂溶解于500ml水中，并且然后在121℃高压灭菌15min。将高压蒸汽处理的琼脂在水浴中温和至48℃，并且将20ml的琼脂倒入皮氏培养皿并且允许在室温通过孵育来固化。在固化的琼脂平板上，添加5μl的酶溶液，并且dna酶活性被观察为斑点酶溶液周围的无色区域。
[0453]
方法
[0454]
pcr、克隆、连接核苷酸等的通用方法是本领域普通技术人员熟知的并且可以例如发现于“molecular cloning:a laboratory manual[分子克隆：实验室手册]”,sambrook等人(1989),cold spring harbor lab.[冷泉港实验室],冷泉港,纽约州；ausubel,f.m.等人(编辑)；“current protocols in molecular biology[分子生物学实验指南]”,john wiley and sons[约翰威立父子公司],(1995)；harwood,c.r.和cutting,s.m.(编辑)；“dna cloning:a practical approach[dna克隆：实用方法],第i和ii卷”，d.n.glover编辑(1985)；“oligonucleotide synthesis[寡核苷酸合成]”，m.j.gait编辑(1984)；“nucleic acid hybridization[核酸杂交]”，b.d.hames和s.j.higgins编辑(1985)；“a practical guide to molecular cloning[分子克隆实用指南]”,b.perbal,(1984)。
[0455]
实例
[0456]
实例1
[0457]
小块布样的制备：
[0458]
新毛巾是从宜家(ikea)购买，产品名称为“haren”，这些新毛巾由100％白色棉花制成，尺寸为40*70cm。志愿者在日常生活中在洗脸或淋浴后使用毛巾持续2周，并且应将这些毛巾悬挂在浴室无阳光直射的环境中。从志愿者处收集毛巾，并选择同质的毛巾进行测试。
[0459]
将毛巾中心切为10x 10cm大小的6块然后缝合边缘。
[0460]
洗涤实验：
[0461]
在tom洗涤中进行洗涤实验。特别地，在tom洗涤中实施以下各项：在eu条件下，水硬度为15dh(ca:mg:hco3＝4:1:7.5)，而在ap条件下，水硬度为14dh(ca:mg＝3:2)，温度为30℃，主清洗时间为20min，3.33g/l标准a洗涤剂(eu)或2g/l标准x洗涤剂(ap)。以下列出了典型的洗涤条件，其中洗涤中使用了0.7g/l的污垢(pigmentschmutz，09v，wfk公司，克雷费尔德，德国)以达到抗再沉积效果，并添加不同的酶和聚合物以进行比较。对于以下六个条件中的每一个，使用了来自四种不同毛巾的两块毛巾，即每个洗涤条件含有八块毛巾。
[0462][0463][0464]
a)对应于1ppm的seq id no:14的活性酶蛋白
[0465]
b)对应于0.5ppm的seq id no:14的活性酶蛋白
[0466]
上述结果表明，该聚合物可以被dna酶替代，同时保持相同的白度水平。