技术特征：
1.一种epha3结合剂，任选地，一种分离的epha3结合剂，其包含至少一个互补决定区(cdr)，所述互补决定区具有seq id no：13-72和/或表4-7中所示的氨基酸序列，或与其至少70％同一性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的epha3结合剂，其包含(a)重链免疫球蛋白可变区(vh)多肽，其包含cdr1、cdr和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：13-17中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr具有与seq id no：18-22中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：23-27中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)轻链免疫球蛋白可变区(vl)多肽，其包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：28-32中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr2具有与seq id no：33-37中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：38-42中任一者至少70％同一性的氨基酸序列。3.如权利要求2所述的epha3结合剂，其中：(a)vh多肽包含seq id no：153所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)vl多肽包含seq id no：154所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的epha3结合剂，其包含(a)vh多肽，其包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：43-47中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr2具有与seq id no：48-52中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：53-57中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)vl多肽，其包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：58-62中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr2具有与seq id no：63-67中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：68-72中任一者至少70％同一性的氨基酸序列。5.如权利要求4所述的epha3结合剂，其中：(a)vh多肽包含seq id no：155所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)vl多肽包含seq id no：156所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。6.如前述权利要求中任一项所述的epha3结合剂，其中所述epha3结合剂是抗体或抗体片段。7.如权利要求6所述的epha3结合剂，其中所述抗体或抗体片段是3c3-1或2d4-1单克隆抗体或其片段。8.如权利要求6或7所述的epha3结合剂，其中所述epha3结合剂是重组的、人的或人源化的抗体或抗体片段。9.一种能够结合epha3的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：(i)并入以下cdr的重链可变(vh)区：
具有seq id no：16的氨基酸序列的hc-cdr1；具有seq id no：22的氨基酸序列的hc-cdr2；具有seq id no：27的氨基酸序列的hc-cdr3；和(ii)并入以下cdr的轻链可变(vl)区：具有seq id no：32的氨基酸序列的lc-cdr1；和具有seq id no：37的氨基酸序列的lc-cdr2；具有seq id no：42的氨基酸序列的lc-cdr3。10.一种能够结合epha3的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：(i)并入以下cdr的重链可变(vh)区：具有seq id no：47的氨基酸序列的hc-cdr1；具有seq id no：52的氨基酸序列的hc-cdr2；具有seq id no：57的氨基酸序列的hc-cdr3；(ii)并入以下cdr的轻链可变(vl)区：具有seq id no：62的氨基酸序列的lc-cdr1；具有seq id no：67的氨基酸序列的lc-cdr2；具有seq id no：72的氨基酸序列的lc-cdr3。11.如权利要求9中任一所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含与seq id no：153的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和vl区，其包含与seq id no：154的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。12.如权利要求10中任一所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含与seq id no：155的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和vl区，其包含与seq id no：156的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。13.一种抗原结合分子，其包含(i)权利要求9-12中任一项所述的抗原结合分子，和(ii)能够与epha3以外的抗原结合的抗原结合分子。14.一种嵌合抗原受体(car)，其包含权利要求9-13中任一项所述的抗原结合分子。15.一种嵌合抗原受体(car)，其包含抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内t细胞信号传导结构域，所述抗原结合结构域包括至少一个cdr，所述cdr具有seq id no：1-12所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。16.如权利要求15所述的car，其中所述抗原结合结构域包含、由或基本上由以下组成：(a)重链免疫球蛋白可变区(vh)多肽，其包含cdr1、cdr和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：13-17中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr具有与seq id no：18-22中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：23-27中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)轻链免疫球蛋白可变区(vl)多肽，其包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：28-32中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr2具有与seq id no：33-37中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：38-42中任一者至少70％同一性的氨基酸序列。
17.如权利要求16所述的car，其中：(a)vh多肽包含seq id no：153所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)vl多肽包含seq id no：154所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。18.如权利要求15所述的car，其中所述抗原结合结构域包含、由或基本上由以下组成：(a)vh多肽，其包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：43-47中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr2具有与seq id no：48-52中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：53-57中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)vl多肽，其包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有与seq id no：58-62中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；所述cdr2具有与seq id no：63-67中任一者至少70％同一性的氨基酸序列；并且所述cdr3具有与seq id no：68-72中任一者至少70％同一性的氨基酸序列。19.如权利要求18所述的car，其中：(a)vh多肽包含seq id no：155所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)vl多肽包含seq id no：156所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。20.如权利要求15至19中任一项所述的car，其中所述抗原结合结构域包含接头，例如具有seq id no:158所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列的接头。21.如权利要求14至20中任一项所述的car，其还包含前导序列。22.如权利要求21所述的car，其中所述前导序列包含、由或基本上由seq id no:157所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列组成。23.如权利要求14至22中任一项所述的car，其中所述跨膜结构域包括cd8跨膜结构域。24.如权利要求23所述的car，其中所述cd8跨膜结构域包含seq id no：159所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。25.如权利要求14至24中任一项所述的car，其中所述细胞内信号传导结构域包括cd3 zeta细胞内信号传导结构域。26.如权利要求25所述的car，其中所述细胞内信号传导结构域包含seq id no：162所示的cd3 zeta氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。27.如权利要求14-26中任一项所述的car，其进一步包含一个或多个共刺激结构域，例如，cd28共刺激结构域和/或cd137共刺激结构域，所述cd28共刺激结构域具有seq id no：161所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列，所述cd137共刺激结构域具有seq id no:160所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列。28.如权利要求1至8中任一项所述的epha3结合剂，或如权利要求9至13中任一项所述的抗原结合分子，或如权利要求14至27中任一项所述的car，用于治疗或预防受试者的癌症。29.一种分离的核酸，其编码如权利要求1至8和28中任一项所述的epha3结合剂，或如
权利要求15至27中任一项所述的car。30.一种遗传构建体，其包含权利要求29所述的分离的核酸。31.一种核酸或多种核酸，任选地分离的一种或多种核酸，其编码如权利要求9至13中任一项所述的抗原结合分子，或如权利要求14所述的car。32.一种表达载体或多种表达载体，其包含如权利要求31所述的一种核酸或多种核酸。33.一种细胞，其包含如权利要求9至13中任一项所述的抗原结合分子、如权利要求14所述的car、如权利要求31所述的一种核酸或多种核酸、或如权利要求32所述的一种表达载体或多种表达载体。34.一种宿主细胞，其包含权利要求29的核酸和/或权利要求30的遗传构建体。35.如权利要求34所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是或包含t细胞。36.一种生产分离的epha3结合剂或car的方法，所述方法包括：(i)培养权利要求34或35的宿主细胞；和(ii)从步骤(i)中培养的所述宿主细胞中分离所述epha3结合剂或car。37.一种方法，其包括在适合从一种或多种核酸或一种或多种表达载体表达抗原结合分子或car的条件下培养细胞，所述细胞包含权利要求31所述的一种核酸或多种核酸、或权利要求32所述的一种表达载体或多种表达载体。38.抗体或抗体片段，其结合和/或针对：(i)如权利要求1至8和28中任一项所述的epha3结合剂；和/或(ii)如权利要求15至27中任一项所述的car。39.一种组合物，其包含如权利要求1至8和28中任一项所述的epha3结合剂、如权利要求15至27中任一项所述的car、如权利要求29所述的分离的核酸、如权利要求30所述的遗传构建体和/或如权利要求34或35所述的宿主细胞和药学上可接受的载体稀释剂或赋形剂。40.一种组合物，其包含如权利要求9至13中任一项所述的抗原结合分子、如权利要求14所述的car、如权利要求31所述的一种核酸或多种核酸、或如权利要求32所述的一种表达载体或多种表达载体、或如权利要求33所述的细胞。41.如权利要求40所述的组合物，其另外包含药剂(例如，免疫治疗剂，例如检查点抑制剂)。42.一种治疗或预防受试者癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如权利要求1至8和28中任一项所述的epha3结合剂、如权利要求15至27中任一项所述的car、如权利要求29所述的分离的核酸、如权利要求30所述的遗传构建体、如权利要求34或权利要求35所述的宿主细胞和/或如权利要求39所述的组合物的步骤，从而治疗或预防受试者的癌症。43.如权利要求1至8和28中任一项所述的epha3结合剂、如权利要求15至27中任一项所述的car、如权利要求29所述的分离的核酸、如权利要求30所述的遗传构建体、和/或如权利要求34或权利要求35所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗受试者癌症的药物中的用途。44.如权利要求28所述的epha3结合剂或car、如权利要求42所述的方法或如权利要求43所述的用途，其中所述癌症是或包括多形性胶质母细胞瘤。45.一种检测epha3或表达epha3的细胞的方法，所述方法包括在如权利要求1至8和28中任一项所述的epha3结合剂、或如权利要求15至28中任一项所述的car、和epha3之间形成
复合物的步骤，从而检测epha3或表达epha3的细胞。46.如权利要求45所述的方法，其中所述细胞是或包含癌细胞。47.一种分离的蛋白，其包含seq id no：13至156和/或表2-5中任一者所示的氨基酸序列或与其至少70％同一性的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。48.一种分离的核酸，其包含如seq id no：1至12和/或表1中任一者所示的核酸序列、或与其至少70％同一性的核酸序列、由其组成或基本上由其组成。49.人t细胞，其表达：(a)通过与cmv抗原结合而激活的t细胞受体(tcr)；和(b)嵌合抗原受体(car)，其包含与epha3上的表位结合的抗原结合结构域。51.如权利要求49所述的t细胞，其中所述抗原结合结构域是scfv，其包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区。52.一种t细胞，其包含(a)t细胞受体(tcr)，其表达cmv抗原特异性的tcr；和(b)与epha3结合的抗原结合分子。53.如权利要求52所述的t细胞，其中所述抗原结合分子是scfv，其包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区。54.如权利要求52或53所述的t细胞，其中所述抗原结合分子是car。55.如权利要求51、53或54中任一项所述的t细胞，其中所述vh区具有seq id no：153所示的氨基酸序列，并且其中vl区具有seq id no:154所示的氨基酸序列。56.如权利要求51、53或54中任一项所述的t细胞，其中所述vh区具有seq id no：155所示的氨基酸序列，并且其中vl区具有seq id no:156所示的氨基酸序列。57.如权利要求49至56中任一项所述的t细胞，其中所述car包含选自cd4、cd8或cd28跨膜结构域的跨膜结构域。58.如权利要求49至57中任一项所述的t细胞，其中所述car包含选自4-1bb或cd28共刺激结构域的共刺激结构域。59.如权利要求49至58中任一项所述的t细胞，其中所述cmv抗原包含源自pp50、pp65、ie-1、gb和gh中的一个或多个的肽。60.如权利要求49至58中任一项所述的t细胞，其中所述cmv抗原包含选自seq id no:181-211所示的氨基酸序列的肽。61.一种制备用于治疗癌症的双特异性t细胞群的方法，所述方法包括：(a)从受试者获得包含pbmc的细胞群，处理细胞以获得表达结合cmv抗原的tcr的t细胞亚群；(b)处理细胞亚群以引入编码与epha3表位结合的car的载体，从而产生表达与cmv抗原结合的tcr和与epha3上的表位结合的car的双特异性t细胞群；和(c)扩增双特异性t细胞群。62.如权利要求61所述的方法，其中所述car包含与epha3上的表位结合的抗原结合结构域、间隔、跨膜结构域、共刺激结构域和cd3 zeta信号传导结构域。63.如权利要求62所述的方法，其中所述抗原结合结构域是scfv，其包含重链可变区和轻链可变区。64.如权利要求63所述的方法，其中所述重链可变(vh)区具有seq id no:153所示的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变(vl)区具有seq id no：154所示的氨基酸序列。
65.如权利要求63所述的方法，其中所述重链可变(vh)区具有seq id no:155所示的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变(vl)区具有seq id no：156所示的氨基酸序列。66.如权利要求62至65中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是cd4、cd8或cd28跨膜结构域。67.如权利要求62至66中任一项所述的方法，其中所述共刺激结构域是4-1bb或cd28共刺激结构域。68.如权利要求62至67中任一项所述的方法，其中在步骤(a)中处理细胞包括将所述t细胞暴露于免疫原性肽的库，所述肽的库包含能够诱导肽特异性t细胞增殖的hla i类和ii类限制性cmv肽表位。69.如权利要求62至68中任一项所述的方法，其中所述t细胞表达cmv抗原特异性的tcr，并且施用于受试者之前，在t细胞抗原的存在下扩增。70.如权利要求68所述的方法，其中所述cmv抗原包含一种或多种cmv肽，或cmv疫苗。71.如权利要求70所述的方法，其中至少一种cmv肽选自pp50、p65、ie-1、gb和gh。72.如权利要求70或71所述的方法，其中至少一种cmv肽选自seq id no：181-211所示的氨基酸序列。73.如权利要求68所述的方法，其中所述肽库包含至少一个肽表位，所述肽表位源自cmv抗原pp50、pp65、ie-1、gb和gh中的每一个。74.如权利要求73所述的方法，其中所述肽库中的至少一个cmv肽表位氨基酸序列如seq id no:181-211或其组合所示。75.如权利要求74所述的方法，其中所述肽库包含seq id no:181-211中所示的cmv肽表位氨基酸序列的每一个。
技术总结
公开了至少可以特异性识别或结合EphA3的抗原结合分子和嵌合抗原受体(CAR)。还公开了医学治疗和预防方法。医学治疗和预防方法。医学治疗和预防方法。
技术研发人员：R
受保护的技术使用者：昆士兰医学研究所理事会
技术研发日：2020.10.09
技术公布日：2022/7/22