技术特征：
1.一种消融液，其特征在于：由0.3-0.4mm/l的kh2po4，0.14m/l的nacl，5.2-5.8mm/l的nahco3，4-4.5mm/l的kcl，浓度为0.4％的bsa，0.1-0.12g的na2hpo4·
h2o，3mm/l的cacl2，3mm/l的mgcl2和5-10ug/ml溴化乙锭组成。2.根据权利要求1所述的一种消融液，其特征在于：由0.3mm/l的kh2po4，0.14m/l的nacl，5.2mm/l的nahco3，4mm/l的kcl，浓度为0.4％的bsa，0.1g的na2hpo4·
h2o，3mm/l的cacl2，3mm/l的mgcl2和9.2ug/ml溴化乙锭组成。3.一种试剂盒，其特征在于：由松解液、细胞保护液和权利要求1或2中所述的消融液组成；所述细胞保护液由pbs，10％fbs和浓度为0.1％的nan3组成。4.根据权利要求3所述的一种试剂盒，其特征在于：所述松解液由下述组分及含量组成：dispasei i：20mg/ml；col lagenase：1000u/ml；kana：20mg/ml；kh2po4:0.45mm/l；nacl:0.14m/l；nahco3:4.2mm/l；kcl5.4mm/l；葡萄糖1.0g；na2hpo4
·
h2o0.06g；cacl2：3mm/l；mgcl 2：3mm/l。5.一种消融方法，其特征在于：通过权利要求4所述的试剂盒处理后的组织，配合超声消融装置进行消融获得细胞内线粒体转录水平、功能和活性不受损伤的高存活化单细胞，具体通过以下步骤实现：步骤st100，在无菌条件下将获取待消融组织；步骤st200，将步骤st100获取的组织转移至含有已经进行预冷处理的消融液的平皿中进行细化处理至2mm3的组织块，并利用消融液进行1-3次清洗，直到组织无血液渗出为止；步骤st300，使用无菌眼科剪剔除目视可见非目标物；所述非目标物包括血管、结缔组织和纤维；步骤st400，将步骤st300剔除非目标物后的组织置于盛装有消融液和松解液的ep管中，无菌环境下静止松解15分钟；其中，消融液和松解液体积比为4:1；步骤st500，将经步骤st400松解后的组织利用超声消融装置进行消融6-8秒，消融频率为20khz，功率3-8w；步骤st600，将消融后的细胞悬液进行常规过滤、离心处理后用细胞保护液重悬。6.根据权利要求5所述的一种消融方法，其特征在于：消融获得的单细胞悬液在细胞异质性研究中的应用。7.一种提取线粒体的方法，其特征在于：包括消融的步骤和提取分离线粒体的步骤；所述消融的步骤采用权利要求5所述的消融方法实现；所述提取分离线粒体通过下述实现：步骤st700，将步骤st600获得的单细胞悬液进行4℃，1000g离心10min，去上清将细胞重悬于1.5ml预冷的buffer中，进行破碎；步骤st800，在4℃，1000g离心10min，转移上清至干净的1.5mlep管中，4℃，6000g离心10min，去上清，沉淀重悬到750ul的线粒体钝化buffer中；步骤st900，吸取线粒体钝化buffer顶部的线粒体悬液，4℃，14000g离心15min；去上清，吸取底部的线粒体层转移到新ep管中，以1.5ml的线粒体储存液重悬，4℃，8000g离心10min；步骤st1000，去上清，5ml线粒体储存液重悬，4℃，8000g离心10min，重复洗涤直至线粒体在管底部呈颗粒，重悬颗粒完成线粒体提取。
8.根据权利要求7所述的一种提取线粒体的方法，其特征在于：提取的线粒体在线粒体rna异质性研究中的应用。
技术总结
本申请公开了一种消融液、试剂盒、消融方法、提取线粒体的方法及其应用，本发明提供的组织消融方法旨在获得能够保持细胞原有功能和活性的单细胞；同时进一步提供了针对单细胞进行线粒体的提取方法，旨在获得具有与活体细胞中的线粒体相当或者相同包括转录水平、功能和活性在内的主要功能的线粒体，从而使得针对线粒体异质性方面的后续研究具有多一种获取途径。本发明提供的消融方法获取的单细胞能够完整的保留细胞及其细胞器的功能，尤其是在线粒体的膜通透性和基因转录方面保留完好。粒体的膜通透性和基因转录方面保留完好。粒体的膜通透性和基因转录方面保留完好。
技术研发人员：赵伟 余嘉莹 廖东升
受保护的技术使用者：成都导胜生物技术有限公司
技术研发日：2021.03.05
技术公布日：2022/9/8