一种RNA文库的构建方法及试剂盒与流程

文档序号:26141786发布日期:2021-08-03 14:26阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种rna文库的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:

采用第一引物逆转录rna,得到第一链cdna,所述第一引物包括第一接头序列和随机序列;

纯化所述第一链cdna;

采用第二引物扩增所述第一链cdna,生成二链dna,所述第二引物包括第二接头序列和随机序列;

采用第三引物扩增所述二链dna得到rna文库。

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述第二引物扩增所述第一链cdna时采用的dna聚合酶为具有链置换功能的dna聚合酶。

3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述第一接头序列为acgctcttccgatct。

4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述第二接头序列为cgtatgccgtcttctgcttg。

5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述第三引物包括上游引物和下游引物,所述上游引物从5’端至3’端依次包括:上游测序平台序列、第一文库标签序列以及上游测序引物序列,所述下游引物从5’端至3’端依次包括:下游测序平台序列、第二文库标签序列以及下游测序引物序列,其中,所述下游测序引物序列与所述第一引物的5’端的至少部分序列相同,所述上游测序引物序列与所述第二引物的5’端的至少部分序列相同。

6.根据权利要求5所述的构建方法,其特征在于,所述第三引物序列为:

上游引物:

gatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacxxxxxxxxatctcgtatgccgtcttctgcttg;

下游引物:

aatgatacggcgaccaccgagatctacacxxxxxxxxacactctttccctacacgacgctcttccgatc,

其中xxxxxxxx为index序列。

7.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述纯化为磁珠纯化。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的构建方法,其特征在于,所述rna为总rna、mrna、lncrna或去除核糖体的rna。

9.一种试剂盒,其特征在于,包括根据权利要求1-8中任一项所述的第一引物、第二引物和第三引物。

10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括逆转录酶和dna聚合酶。


技术总结
本申请属于基因检测技术领域,具体公开一种RNA文库的构建方法,包括如下步骤:采用第一引物逆转录RNA,得到第一链cDNA,所述第一引物包括第一接头序列和随机序列;纯化所述第一链cDNA;采用第二引物扩增所述第一链cDNA,生成二链DNA,所述第二引物包括第二接头序列和随机序列;采用第三引物扩增所述二链DNA得到RNA文库。本申请至少具有以下有益效果之一:本申请提供的RNA文库的构建方法,以完整的RNA链为模板进行逆转录,无需将RNA进行片段化,引物上直接连接有接头序列,无需后期再进行双端接头连接,而且该方法仅需要带有双端接头的单链,因此无论是扩增效率还是建库速度都大幅提升。

技术研发人员:方圆;蔡青青;宋泽世
受保护的技术使用者:探因医学科技(浙江)有限公司
技术研发日:2021.05.06
技术公布日:2021.08.03
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