技术特征：
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括假单胞杆菌外毒素a结构域区段、猪圆环病毒2型cap蛋白优势抗原表位区段、猪圆环病毒3型cap蛋白优势抗原表位区段和羧基末端部分；其中，所述猪圆环病毒2型cap蛋白优势抗原表位区段由seq id no.2所示的核苷酸序列表达，所述猪圆环病毒3型cap蛋白优势抗原表位区段由seq id no.3所示的核苷酸序列表达。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括假单胞杆菌外毒素a结构域包括假单胞杆菌外毒素a结构域ⅰ和假单胞杆菌外毒素a结构域ⅱ；优选地，所述假单胞杆菌外毒素a结构域区段由seq id no.1所示的核苷酸序列表达。3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述羧基末端部分由包括seq id no.4所示的核苷酸序列的核苷酸序列表达；优选地，所述羧基末端部分由seq id no.4、seq id no.5或seq id no.6所示的核苷酸序列表达。4.根据权利要求1
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3任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述假单胞杆菌外毒素a结构域区段、猪圆环病毒2型cap蛋白优势抗原表位区段、猪圆环病毒3型cap蛋白优势抗原表位区段和羧基末端部分的排列顺序为pea
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pcv2 cap
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pcv3 cap
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羧基末端，通过柔性氨基酸连接；优选地，所述柔性氨基酸具有如seq id no.7所示的氨基酸序列。更优选地，在所述假单胞杆菌外毒素a结构域区段和所述猪圆环病毒2型cap蛋白优势抗原表位区段之间还包括补体蛋白c3d；进一步优选地，所述补体蛋白c3d由seq id no.8所示的核苷酸序列表达。5.一种权利要求1
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4任一项所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，将编码所述融合蛋白的基因在宿主中表达。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，使用哺乳动物表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；优选地，使用cho细胞表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；优选地，提供包含编码所述融合蛋白的基因的表达载体，将所述表达载体导入cho细胞中，然后对cho细胞进行筛选，得到稳定表达所述融合蛋白的cho细胞株，所述cho细胞株表达得到所述融合蛋白；优选地，所述制备方法中还包括将稳定表达所述融合蛋白的cho细胞驯化为悬浮培养的步骤。7.一种能够表达权利要求1
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4任一项所述融合蛋白的蛋白表达系统。8.如权利要求1
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4任一项所述的融合蛋白或权利要求5或6所述的制备方法制备得到的融合蛋白在如下(a)
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(d)任一项中的应用：a)制备猪圆环病毒疫苗；b)制备猪圆环病毒的抗体；c)制备检测猪圆环病毒的试剂盒；d)制备猪圆环病毒诊断抗原。9.一种含有权利要求1
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4任一项所述的融合蛋白的疫苗。
10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中的融合蛋白的浓度为10
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100μg/ml，优选为20
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80μg/ml，更优选为50μg/ml；优选地，所述疫苗还包括辅料，所述辅料包括疫苗佐剂、稳定剂和抗生素中的至少一种；优选地，所述疫苗佐剂包括氢氧化铝胶、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、白油佐剂、mf59佐剂或isa201r vg，优选使用isa201r vg。
技术总结
本发明提供了一种融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗，涉及生物技术领域，本发明提供的融合蛋白，包括假单胞杆菌外毒素A结构域区段、猪圆环病毒2型Cap蛋白优势抗原表位区段、猪圆环病毒3型Cap蛋白优势抗原表位区段和羧基末端部分。本发明通过筛选出PCV2和PCV3Cap蛋白的优势抗原表位，其抗原性好，易高表达，然后将各优势表位与PEA部分功能性片段融合，同时在融合蛋白C端加入了羧基末端序列以及增强免疫原性，增加了融合蛋白的可溶性。得到的融合蛋白具有靶向定位，抗原性好，表达量高的优点。将该融合蛋白作为抗原制备疫苗具有安全性好，效价稳定，无毒副作用，激活细胞免疫应答的优势。疫应答的优势。
技术研发人员：贺笋 张伟 李俊辉 李延涛 程兰玲 高窦 潘晓梅 徐龙飞 师小潇
受保护的技术使用者：天康生物股份有限公司
技术研发日：2018.09.19
技术公布日：2021/10/23