技术特征：
1.一种豌豆根瘤菌rl3841菌株突变株，其特征在于：通过将质粒pjqemrrωspe导入豌豆根瘤菌rl3841菌株中得到。2.根据权利要求1所述豌豆根瘤菌rl3841菌株突变株的构建方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1.根据种豌豆根瘤菌rl3841菌株的emrr基因序列设计引物，扩增得到目的片段；步骤2.将质粒pmd
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19t与目的片段连接后转化导入感受态细胞dh5α，抗性筛选，挑取单菌落转化子酶切后，测序验证得到阳性克隆质粒pmdemrr；步骤3.将质粒pph45ωspe用sma i单酶切后获得的ωspe片段与经过fsp i单酶切后的pmdemrr进行连接，转化导入感受态细胞dh5α，抗性筛选，挑取单菌落转化子酶切，验证筛选得到阳性克隆质粒pmdemrrωspe；步骤4.将pmdemrrωspe质粒用xba i和xho i进行双酶切后获得的emrrωspe片段与经过xba i和xho i双酶切后pjq200sk质粒酶连并转化感受态细胞dh5α抗性筛选，挑取单菌落转化子酶切，测序验证获得阳性克隆质粒pjqemrrωspe；步骤5.通过三亲本接合，将供体菌pjqemrrωspe导入豌豆根瘤菌rl3841菌株中，经过抗性初筛、蔗糖致死复筛及庆大霉素抗性排除假阳性，挑取单菌落重组子，进行菌落pcr验证，构建豌豆根瘤菌rl3841菌株突变株即豌豆根瘤菌rlemrr。3.根据权利要求2所述豌豆根瘤菌rl3841菌株突变株的构建方法，其特征在于，步骤1中引物为：5’aaaaagcttctattacggccatgattact3’以及5’aaatctagattgcataggaaaggttgagc3’。4.根据权利要求2所述豌豆根瘤菌rl3841菌株突变株的构建方法，其特征在于，步骤5中进行菌落pcr验证所用引物为：ωspe特异引物5’cggtttacaagcataaagc3’以及豌豆根瘤菌rl3841基因组引物5’cctagatgccggcaagacgc3’。5.根据权利要求2
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4中任一项所述构建方法在提高豌豆根瘤菌环境适应能力和/或结瘤效率中的应用。6.根据权利要求5中所述的应用，其特征在于：所述提高环境适应能力为提高对十二烷基硫酸钠、过氧化氢、过氧化氢异丙苯和结晶紫的抗性。7.根据权利要求5中所述的应用，其特征在于：所述提高结瘤效率为提高共生结瘤和竞争结瘤能力。
技术总结
本发明涉及基因工程技术领域，尤其是一种豌豆根瘤菌RL3841菌株突变株的构建方法及应用，该突变株通过将质粒pJQemrRΩSpe导入豌豆根瘤菌RL3841菌株中得到。本技术方案提供了一株具有较强环境适应能力和结瘤效率的突变菌株豌豆根瘤菌RLemrR。该菌株具有很强的根际和植株根部共生生存能力，能接种豌豆植株形成更多具有固氮能力的根瘤。而且其产生的菌株适用范围广，具有抗氧化物和药物，耐高温、耐酸和高盐的特性，具有广泛的应用前景。具有广泛的应用前景。具有广泛的应用前景。
技术研发人员：程国军 罗莎 邹倩 胡爱奇 陈晓红 龙松华 李晓华 何冬兰 阎春兰
受保护的技术使用者：中南民族大学
技术研发日：2021.07.26
技术公布日：2021/11/8