一种固相合成dna的氨解预处理液及氨解方法
技术领域
1.本发明为固相dna合成领域，具体涉及一种固相合成dna的氨解预处理液及氨解方法。
背景技术：
2.固相亚磷酰胺三酯法为现在合成dna的常用方法，其反应的基本原理是溶液中的亚磷酰胺单体通过缩合反应形成3
’‑5’
磷酸二酯键，连接到固相载体上，并依次延伸，直到序列的最后一个5’碱基连接上合成结束。整个合成过程仪器自动完成，每个循环按脱保护、活化、偶合、盖帽及氧化五个步骤依次完成。
3.在dna合成仪完成了对dna的合成步骤后，其产物会连接在固相载体上。接下来会用氨解将产物从固相载体上进行脱离，纯化后得到产物。在现有的氨解方法中，有采用直接进行氨水氨解的，有采用氨气加水蒸气混合氨解的，但是其氨解的效率均不高，导致后续的dna合成产率受到影响。
技术实现要素：
4.为解决上述技术问题，本发明提供一种固相合成dna的氨解预处理液及氨解方法。
5.具体技术方案为：
6.一种dna氨解预处理液，其不同之处在于，所述dna氨解预处理液由水与有机溶剂构成；其中，所述有机溶剂的体积百分比为70％～80％，所述有机溶剂选自乙腈、乙醇或甲醇中的一种或多种。
7.进一步，所述有机溶剂为乙腈。
8.一种固相合成dna的氨解方法，其不同之处在于，包括如下步骤：
9.步骤s1:向用于装有合成dna片段的固相载体的合成柱内加入上述的dna氨解预处理液进行润湿；
10.步骤s2：采用氨气与水蒸气的混合气体进行氨解，然后采用洗脱液进行脱附，得到dna产物。
11.进一步，所述步骤s2中，氨解时间为90min，氨解温度为90℃。
12.进一步，所述步骤s2中，经过氨解处理后，再用洗涤液洗去无机盐，再用洗脱液进行脱附，所述洗脱液为水。
13.进一步，所述洗涤液为乙腈。
14.进一步，所述步骤s1中，加入所述氨解预处理液的体积大于所述合成柱的体积。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
16.(1)本发明提供了用于氨解的预处理液，通过配制水与有机溶剂的合理比例配制的dna氨解预处理液，在保证可以提高氨解效率的同时又能进一步提高产率。
17.(2)选取乙腈作为有机溶剂，乙腈无毒，极性大，性质稳定，不与粗产品中的不稳定的试剂发生反应，相较于其余有机溶剂，选其作为氨解预处理液的组分，有利于进一步提高
氨解效率与产物产率，且价格低廉，有利于进一步的降低成本。
18.(3)与现有技术相比，本发明的氨解方法采用dna氨解预处理液先进行润湿，然后再进行气相氨解，提高了氨解效率，提高了dna产物的收率。
19.(4)本发明氨解方法加入氨解柱时，不需要严格控制氨解预处理液的加入含量，操作简便。
具体实施方式
20.下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
21.以下各实施例，仅用于说明本发明，但不止用来限制本发明的范围。基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
22.在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
23.本发明实施例涉及原料说明如下：
24.固相合成dna的粗品由mermade192e dna合成仪进行合成：选择t10mers(tttt tttt tt(5
’‑3’
))做为寡核苷酸的序列，合成柱为50nmol通用合成柱(参数：合成柱载量78nmol；cv值：9.1％；气阻值18～22mmhg；cpg frits体积：50.20ul，品牌：深逗点生物技术有限公司)。
25.实施例1
26.本实施例提供一种固相合成dna的氨解预处理液，具体成分如下：
27.水：30％(v/v)；乙腈：70％(v/v)。
28.本实施例还提供一种利用上述dna氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
29.(1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积大于合成柱的体积即可；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
30.(2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
31.(3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
32.实施例2
33.本实施例提供一种固相合成dna的氨解预处理液，具体成分如下：
34.水：20％(v/v)；乙腈：80％(v/v)。
35.本实施例还提供一种利用上述dna氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
36.(1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积大于合成柱的体积即可；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
37.(2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
38.(3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭
菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
39.对比例1
40.本对比例提供一种固相合成dna的氨解预处理液，具体成分如下：
41.水：90％(v/v)；乙腈：10％(v/v)。
42.本对比例还提供一种利用上述dna氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
43.(1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积与实施例3加入的体积相同；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
44.(2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
45.(3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
46.对比例2
47.本对比例提供一种固相合成dna的氨解预处理液，具体成分如下：
48.水：50％(v/v)；乙腈：50％(v/v)。
49.本实施例还提供一种利用上述dna氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
50.(1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积大于合成柱的体积即可；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
51.(2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
52.(3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
53.对比例3
54.本对比例提供一种固相合成dna的氨解预处理液，具体成分如下：
55.水：100％(v/v)。
56.本对比例还提供一种利用上述dna氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
57.(1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积与实施例3加入的体积相同；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
58.(2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
59.(3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
60.对比例4
61.本对比例提供一种dna氨解方法，具体操作方法与实施例2大体相同，不同的是，无步骤(1)中的氨解预处理液润湿处理。
62.采用分光光度计来检测将实施例1～实施例2以及对比例1～4的寡核苷酸含量进行检测，加测结果如表1所示。
63.表1实施例1～2及对比例1～4的寡核苷酸含量测试结果
64.氨解方法寡核苷酸含量(a260)实施例116.795
实施例217.899对比例14.337对比例210.906对比例34.538对比例415.429
65.表1中，a260表示寡核苷酸在260nm紫外光的吸收值。
66.从表1看出，实施例1～2与对比例1～对比例2相比，有机溶剂的体积百分比为70％～80％，其寡核苷酸含量为在16以上；
67.实施例1～2与对比例3相比，加入了有机溶剂，相较于纯水进行润湿，其产量大幅提高。
68.实施例1～2与对比例4相比，在氨解前采用了氨解预处理液进行了润湿处理，其产量提高。
69.在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。