技术特征：
1.一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：包括青链霉素双抗原液、胰蛋白酶／edta消化液、iv型胶原酶、α-mem培养基和胎牛血清。2.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述青链霉素双抗原液的浓度为10000u／ml。3.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述青链霉素双抗的使用终浓度为1%。4.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述胰蛋白酶／edta消化液为含有0.25%胰蛋白酶、0.04%edta的pbs溶液，ph=7.2。5.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述iv型胶原酶的使用终浓度为1mg/ml。6.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：胎牛血清的使用终浓度为20%。7.一种提取人原代肝癌成纤维细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：s1. 将肝癌组织放入含1%青链霉素双抗的培养基中，并用含1%青链霉素双抗的培养基洗涤组织，静置1-2min后，用含1%青链霉素双抗的培养基重复洗涤组织2-3遍；s2. 弃去洗涤液，加入胰蛋白酶／edta消化液，37℃水浴中消化5-10min；s3. 吸弃胰蛋白酶，加入含1%青链霉素双抗的培养基终止消化，并重复加入1%青链霉素双抗的培养基2-3次进行洗涤；s4. 吸弃洗涤液，加入胶原酶，37℃水浴消化20-30min，加含1%青链霉素双抗的培养基终止消化；s5. 3500-4000r／min离心2-3min，弃上清，用含1%青链霉素双抗的培养基洗涤胶原酶2-3遍，重复离心，弃上清；s6.加入含20%胎牛血清、1%青链霉素双抗的α-mem培养基，吹打均匀，在37℃、5%co2条件下进行培养。8.根据权利要求7所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的方法，其特征在于：步骤s1中，切取1-3cm3的肝癌组织。
技术总结
本发明公开了一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒和提取方法。所述试剂盒包括青链霉素双抗原液、胰蛋白酶／EDTA消化液、IV型胶原酶、α-MEM培养基和胎牛血清。提取人肝癌成纤维细胞的方法包括以下步骤：将肝癌组织修剪后采用1%青链霉素双抗的培养基洗涤，弃洗液后加入胰蛋白酶／EDTA消化液消化5-10min；加培养基洗液终止消化、弃洗液后加入IV型胶原酶消化20-30min，终止消化后离心、洗涤胶原酶；最后沉淀中加入含20%胎牛血清、1%青链霉素双抗的α-MEM培养基，在37℃、5%CO2条件下进行培养。本申请的试剂盒能够有效提高人原代肝癌成纤维细胞的提取成功率，节省成本并提高工作效率。节省成本并提高工作效率。节省成本并提高工作效率。
技术研发人员：唐世磊 李航宇 张成宏 何帅
受保护的技术使用者：中国医科大学附属第四医院
技术研发日：2021.11.09
技术公布日：2022/3/25