技术特征：
1.一种表达环麦芽糊精酶的基因序列，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no:1所示。2.一种重组载体，其含有权利要求1所述的一种表达环麦芽糊精酶的基因序列。3.一种重组菌，其含有权利要求2所述的重组载体。4.一种环麦芽糊精酶，其特征在于：其蛋白序列如seq id no:2所示。5.如权利要求4所述的环麦芽糊精酶在麦芽寡糖制备中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的环麦芽糊精酶将α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精中的至少一种水解为麦芽寡糖。7.如权利要求4所述的环麦芽糊精酶在制备抗耐药性致病菌药物中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的耐药性致病菌包括金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌中的至少一种。9.重组菌突变体，其特征在于：其外源序列编码的蛋白序列与权利要求4所述的蛋白序列的相似性大于95％。10.一种环麦芽糊精酶的制备方法，包括如下步骤：(1)环麦芽糊精酶基因的设计及获得：利用喜热厌氧菌caloranaerobacter sp.mccc 1a00790基因组测序数据，设计并人工合成序列优化后的环麦芽糊精酶基因序列，并添加酶切位点saci和xhoi；(2)重组质粒的构建：将步骤(1)的带有saci和xhoi酶切位点的人工合成的环麦芽糊精酶基因的dna片段经限制性内切酶saci和xhoi酶切后，被连接到经同样限制性内切酶酶切的表达载体pet28a-sumo上，将连接产物转化大肠杆菌escherichia coli top10受体菌株，筛选含有环麦芽糊精酶基因的重组质粒，并进行双酶切和测序验证；(3)环麦芽糊精酶的表达与纯化：将含有环麦芽糊精酶基因的重组质粒转化入大肠杆菌e.coli rosette受体菌株，诱导环麦芽糊精酶蛋白表达并纯化，获得纯化后的环麦芽糊精酶。
技术总结
本发明公开了一种环麦芽糊精酶及其制备方法与应用。所述的酶序列见SEQ ID NO：2。本发明基于喜热厌氧菌基因组测序数据分析获得环麦芽糊精酶CtCD基因序列，并对CtCD基因序列进行优化，通过人工合成的方法获得优化后的环麦芽糊精酶基因序列，并添加酶切位点SacI和XhoI，将该优化后的基因克隆入pET28a-SUMO表达载体上，在大肠杆菌E.coli Rosette中进行诱导表达，纯化得到较高纯度的重组环麦芽糊精酶蛋白。该酶对三种环糊精(α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精)均有很强的水解作用，该酶可用于制备麦芽六糖、麦芽七糖或麦芽八糖；该酶对致病菌(金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌)的生物膜形成有明显抑制作用，在和抗生素联用治疗生物膜引起的耐药性致病菌感染方面具有良好的应用前景。应用前景。
技术研发人员：邵宗泽 周梅先 闫康路 董彬彬
受保护的技术使用者：自然资源部第三海洋研究所
技术研发日：2021.12.08
技术公布日：2022/4/29