一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒的制作方法

文档序号:29169277发布日期:2022-03-09 04:29阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种检测cyp2c19基因多态性的引物组,其特征在于,所述引物组包括以下中的一对或多对引物:1)第一引物对:包括核苷酸序列如seq id no.1所示的cyp2c19*2 681g上游引物和核苷酸序列如seq id no.2所示的cyp2c19*2 681g下游引物;2)第二引物对:包括核苷酸序列如seq id no.4所示的cyp2c19*2 681a上游引物和核苷酸序列如seq id no.5所示的cyp2c19*2 681a下游引物;3)第三引物对:包括核苷酸序列如seq id no.7所示的cyp2c19*3 636g上游引物和核苷酸序列如seq id no.8所示的cyp2c19*3 636g下游引物;4)第四引物对:包括核苷酸序列如seq id no.10所示的cyp2c19*3 636a上游引物和核苷酸序列如seq id no.11所示的cyp2c19*3 636a下游引物;5)第五引物对:包括核苷酸序列如seq id no.13所示的cyp2c19*17-806c上游引物和核苷酸序列如seq id no.14所示的cyp2c19*17-806c下游引物;6)第六引物对:包括核苷酸序列如seq id no.16所示的cyp2c19*17-806t上游引物和核苷酸序列如seq id no.17所示的cyp2c19*17-806t下游引物。2.一种检测cyp2c19基因多态性的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括pcr反应物和质控品,所述pcr反应物包括:第一反应物,包括权利要求1所述引物组中的第一引物对;第二反应物,包括权利要求1所述引物组中的第二引物对;第三反应物,包括权利要求1所述引物组中的第三引物对;第四反应物,包括权利要求1所述引物组中的第四引物对;第五反应物,包括权利要求1所述引物组中的第五引物对;第六反应物,包括权利要求1所述引物组中的第六引物对。3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,还包括以下特征中的任一项或多项:1)所述第一反应物还包括cyp2c19*2 681g探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种;2)所述第二反应物还包括cyp2c19*2 681a探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种;3)所述第三反应物还包括cyp2c19*3 636g探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种;4)所述第四反应物还包括cyp2c19*3 636a探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种;5)所述第五反应物还包括cyp2c19*17-806c探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种;6)所述第六反应物还包括cyp2c19*17-806t探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包括以下特征中的任一项或多项:1)所述cyp2c19*2 681g探针的核苷酸序列如seq id no.3所示;2)所述cyp2c19*2 681a探针的核苷酸序列如seq id no.6所示;3)所述cyp2c19*3 636g探针的核苷酸序列如seq id no.9所示;
4)所述cyp2c19*3 636a探针的核苷酸序列如seq id no.12所示;5)所述cyp2c19*17-806c探针的核苷酸序列如seq id no.15所示;6)所述cyp2c19*17-806t探针的核苷酸序列如seq id no.18所示;7)所述cyp2c19*2 681g探针、所述cyp2c19*2-c探针、所述cyp2c19*3 636g探针、cyp2c19*g-c探针、所述cyp2c19*17-806c探针和所述cyp2c19*17-806t探针的一端修饰有荧光基团,另一端修饰有淬灭基团。5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述第一反应物、第二反应物、第三反应物、第四反应物、第五反应物和第六反应物中的内参基因引物对的序列相同,所述内参基因引物对包括核苷酸序列如seq id no.19所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no.20所示的下游引物。6.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述第一反应物、第二反应物、第三反应物、第四反应物、第五反应物和第六反应物中的内参基因探针的序列相同,所述内参基因探针的核苷酸序列如seq id no.21所示;优选的,内参基因探针的一端修饰有荧光基团,另一端修饰有淬灭基团;更优选的,所述内参基因探针与cyp2c19*2 681g探针、cyp2c19*2 681a探针、cyp2c19*3 636g探针、cyp2c19*3 636a探针、cyp2c19*17-806c探针和cyp2c19*17-806t探针的荧光基团不同。7.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述第一反应物、第二反应物、第三反应物、第四反应物、第五反应物和第六反应物均还包括下述之一:a)dna聚合酶、pcr缓冲液、dntp混合物和水性介质的混合液;b)master mix。8.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述质控品包括阳性质控品和阴性质控品;优选的,所述阳性质控品包括:第一阳性质控品,包括cyp2c19*2 681g阳性质粒和内参基因阳性质粒;第二阳性质控品,包括cyp2c19*2 681a阳性质粒和内参基因阳性质粒;第三阳性质控品,包括cyp2c19*3 636g阳性质粒和内参基因阳性质粒;第四阳性质控品,包括cyp2c19*3 636a阳性质粒和内参基因阳性质粒;第五阳性质控品,包括cyp2c19*17-806c阳性质粒和内参基因阳性质粒;第六阳性质控品,包括cyp2c19*17-806t阳性质粒和内参基因阳性质粒。9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述内参基因阳性质粒中内参基因选自人β-actin、gapdh或18s-rrna基因;和/或,所述阴性质控品为无核酸酶水或te缓冲液。10.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括核酸释放剂;优选的,所述核酸释放剂选自十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚或氢氧化钠中的一种或多种。

技术总结
本发明涉及基因检测领域,特别是涉及一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒,所述引物组中包括能够分别检测CYP2C19*2 681G、CYP2C19*2 681A、CYP2C19*3 636G、CYP2C19*3 636A、CYP2C19*17-806C、CYP2C19*17-806T的上下游引物;所述试剂盒中包括PCR反应物和质控品,所述PCR反应物中包括所述引物组。本发明的试剂盒无需复杂的核酸提取纯化步骤,直接将血卡或全血样本中释放的核酸用于荧光PCR扩增,减少核酸提取纯化所增加的实验检测步骤、检测成本、检测周期和安全性等问题,满足临床对检测简单、快速和准确的需求。快速和准确的需求。


技术研发人员:张祥林 张劲松 胡秋萍 魏鹏
受保护的技术使用者:上海美吉逾华生物医药科技有限公司
技术研发日:2021.12.27
技术公布日:2022/3/8
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