技术特征：
1.一种鉴定人肠道脆弱拟杆菌的引物对，包括正向引物和反向引物，其特征在于，所述正向引物和反向引物的序列分别如seq id no:1和2所示。2.一种荧光定量pcr反应体系，其特征在于，包括：10
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pcr buffer、sybr green i、dntp、模板、正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的序列分别如seq id no:1和2所示。3.根据权利要求2所述的反应体系，其特征在于，所述10
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pcr buffer的配方为：500mmol/l kcl，100mmol/l ph 8.3tris-hcl，5-50mmol/l mgcl2；优选的，所述mgcl2浓度为5mmol/l。4.一种鉴定人肠道脆弱拟杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对和/或权利要求2-3任一权利要求所述的反应体系。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括脆弱拟杆菌标准品溶液。6.一种鉴定人肠道脆弱拟杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将受试者粪便样本稀释制备成粪便稀释物；2)将步骤(1)中的粪便稀释物作为模板建立pcr反应体系，所述反应体系包括：10
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pcr buffer、sybr green i、dntp、模板、正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的序列分别如seq id no:1和2所示；3)pcr扩增；4)根据扩增结果判断样本中的脆弱拟杆菌是否存在，所述方法为非疾病诊断目的。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述10
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pcr buffer的配方为：500mmol/l kcl，100mmol/l ph 8.3tris-hcl，5-50mmol/l mgcl2；优选的，所述mgcl2浓度为5mmol/l。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的粪便样本稀释步骤为：取受试者粪便0.5g置于灭菌的1.5ml离心管，4℃存放，将所取样品溶于50ml生理盐水，从中吸取1ml悬浮液，用生理盐水稀释100倍，备用。9.根据权利要求6-8任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中的pcr扩增条件为：(1)预变性，98℃，10min；(2)变性，96℃，30s；(3)退火，60℃，30s；(4)延伸，72℃，40s；(5)重复步骤(2)～(4)1次；(6)变性，96℃，30s；(7)退火，58℃，30s；(8)延伸，72℃，40s；(9)重复步骤(6)～(8)1次；(10)变性，96℃，30s；(11)退火，56℃，30s；(12)延伸，72℃，40s；(13)重复步骤(10)～(12)35次；(14)继续延伸，72℃，7min。10.权利要求1所述的引物对和/或权利要求2-3任一项所述的反应体系在制备检测人肠道脆弱拟杆菌试剂盒中的用途。
技术总结
本发明公开了一种鉴定人肠道脆弱拟杆菌的引物对，包括正向引物和反向引物，采用所述引物对能够特异性地扩增人肠道中的脆弱拟杆菌。本发明公开了基于PCR技术的人肠道脆弱拟杆菌鉴定的方法，可直接以人类粪便为模板，检测其是否含有脆弱拟杆菌以及含有脆弱拟杆菌的相对丰度。本发明通过降低PCR缓冲液中MgCl2浓度，与配对脆弱拟杆菌16S rRNA的多对PCR引物组合试验，在调整PCR反应步骤的基础上，以获得最佳的实时定量PCR效果，并实现了对粪便稀释物的直接PCR鉴定。运用本发明的技术方案，可一次性、快速鉴定人类肠道中是否含有脆弱拟杆菌，无需对受试人粪便中肠道菌群的分离后再行鉴定。减少了试验步骤，节约检测时间。节约检测时间。节约检测时间。
技术研发人员：盛健 王昊炜 徐奚如
受保护的技术使用者：南京法迈特科技发展有限公司
技术研发日：2022.04.28
技术公布日：2022/8/30