技术特征：
1.一种支链dna的合成方法，其特征在于，包括dna合成单体，所述dna合成单体的氨基基团由乙酰丙氨基进行保护，所述乙酰丙通过还原剂硼氢化钠将基还原。2.根据权利要求1所述的一种支链dna的合成方法，其特征在于，所述dna合成单体为核苷亚磷酰胺，所述核苷亚磷酰胺3’位的磷酸根由二异丙氨基和腈乙基修饰，5’位的羟基由二甲氧基三苯甲基修饰，所述a、c、g三种核苷酸的杂环各存在一个氨基基团，且分别被苯甲酰基和异丙酰基保护形成lev-da、lev-dc、lev-dg三种核苷酸单体，所述5’位的二甲氧基三苯甲基由三氯乙酸进行脱除。3.根据权利要求1所述的一种支链dna的合成方法，其特征在于，所述a、c、g核苷酸位点进行分支结构合成时，可将经乙酰丙酰基(lev)保护的核苷酸单体合成到该位点上，合成上的lev-da(或lev-dc，或lev-dg)不影响整个dna主链后继缩合循环反应，待主链合成结束后，利用强还原剂硼氢化钠对乙酰丙酰基(lev)进行还原，从而形成一个裸露的羟基(-oh)，可以参与dna合成的聚合反应，形成一个带枝丫的dna结构，可在此枝丫的羟基上进行常规核苷酸的缩合。4.根据权利要求1所述的一种支链dna的合成方法，其特征在于，所述乙酰丙酰基(lev)保护的核苷酸单体合成到dna的主链上之后，被还原形成裸漏羟基的dna枝丫结构，然后通过亚磷酰胺三酯法将普通的核苷酸单体合成到上述提到lev-核苷酸的羟基上，然后得到更长的dna支链。5.根据权利要求1所述的一种支链dna的合成方法，其特征在于，所述羟基由活化脂(nhs ester)原料活化于荧光基团上，使其与-nh2基团之间化学反应，且将荧光标记的功能基团连接到一段带有-nh2活性基团的寡核苷酸序列上的原理。
技术总结
本发明公开了一种支链DNA的合成方法。本发明突破了分支DNA合成的关键技术，解决了现有合成工艺只能合成直链不能合成分支的问题，在应用上可以提高DNA探针的荧光强度8～10倍，从而克服了传统的realtimePCR技术中的缺陷与不确定因素，无需抽提纯化RNA，无需反转录，无需PCR扩增，只要将样本用特定裂解液裂解后，经探针杂交与信号放大后即可迅速得到基因定量结果。另外，由于分支结构DNA打破了传统直链DNA概念，而且本发明合成工序和成本更低，效率更高，为分子生物学开辟了新的技术路线，提供更多的技术方案。更多的技术方案。更多的技术方案。
技术研发人员：蒙文宝
受保护的技术使用者：南宁捷尼斯生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.10
技术公布日：2022/8/12