一种联合lncRNA和AR3检测试剂盒及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，是一种联合IncRNA如PCGEM1和 AR3 (AR-V7)检测试剂盒及用于诊断AR相关肿瘤的去势抵抗及复发。
【背景技术】
[0002] 癌症占人类死亡病因的近l/4(www.cancer,org)。在过去的几十年里肿瘤复发和 转移仍是改善整体存活率的主要障碍，这可能主要归因于人们对于癌症生物学仍然缺乏全 面的了解。例如，功能基因组学研宄的最新进展表明，参与人类基因转录的绝大多数是非编 码RNA。然而，对于IncRNAs在调控癌症基因表达及机制等方面人类仍然所知甚少[1]。
[0003] 近期我们通过对肿瘤表观遗传机制的研宄发现IncRNAs可以通过多种机制调控 肿瘤的进展。新近有研宄表明IncRNAPCGEM1可以与AR结合作用[2]。PCGEM1在前列腺 癌上调[3]，可促进细胞增殖[4]，而我们则通过临床标本研宄发现，PCGEM1的基因表达与 前列腺癌恶性程度及转移复发呈高度相关性，PCGEM1不但可以通过与AR直接作用，更重要 的是PCGEM1与AR异构体（如AR3)的表达呈高度正相关，我们进一步证明了PCGEM1通过 选择性转录修饰调控了AR的异构体如AR3的表达。由此发现IncRNAs如PCGEM1可能通过 调控AR基因转录的表观遗传机制参与AR相关肿瘤的增殖、恶性侵袭复发及转移驱动。因 为在一定程度上是由于AR的异构体如AR-V7 (AR3)介导了该类肿瘤的激素去势抵抗，而并 非野生型全长AR。而研宄已表明AR-V7在AR在很大程度上诱导形成了相关肿瘤如前列腺 癌的激素去势抵抗[5]。
[0004] 所以，联合检测PCGEM1或PCAT1及雄激素受体异构体AR3,是建立在 IncRNAs(PCGEM)通过本专利证明的表观遗传调控机制的基础上。即IncRNAs(PCGEM1)通过 调控AR-V7 (AR3)pre-mRNA的转录后修饰及共定位，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤如 前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。
[0005] 针对上述AR相关肿瘤的特异性调节IncRNAs如PCGEM1和该类肿瘤的激素去势抵 抗的高度相关AR异构体（如AR3)的表达呈高度，通过荧光原位杂交及免疫组织化学技术 联合检测临床组织标本的上述指标，可以高度有效的评估和预测诊断AR相关肿瘤的激素 去势抵抗和复发转移，并在激素去势抵抗和复发转移的早期做出诊断。该项申请的技术及 试剂盒是基于当前最新的研宄结果而建立。这是一种目前其他方法都无法替代的检测方 法，迄今为止尚未见相关报道。
【主权项】
1. 一种预测和评价雄激素受体的激素去势治疗后去势抵抗或复发的方法，其特征在 于，所述的方法联合检测PCGEM1或PCAT1及雄激素受体异构体AR3。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCGEM1通过原位杂交检测，扩大信 号后，经过酶反应或巧光显色，原位杂交检测的寡核巧酸探针用地高辛标记，所述的探针序 列 PCGEM1-1 ;T+T+T+TCCAAAGGG+T+CCGCTGTCCCTG+G+A+G、PCGEM1-2 ;A+T+T+CCCCTCAGA+A+A TCTCAGGGCTT+G+T+C，其中+选自e -D-氧-LNA核巧酸类似物中的任一种。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雄激素受体异构体AR3通过巧光免 疫组织化学检测，然后经过酶反应或巧光显色并扩大信号，巧光二抗为绿色巧光蛋白EGFP。
4. 一种预测和评价雄激素受体的激素去势治疗后去势抵抗或复发的试剂盒，其特征在 于，所述的试剂盒通过巧光原位杂交探针检测PCGEM1并通过巧光免疫组织化学检测雄激 素受体异构体AR3,所述的试剂盒包括PCGEM1的核酸原位杂交检测探针，所述核酸原位杂 交检测探针的序列为 PCGEM1-1 ;T+T+T+TCCAAAGGG+T+CCGCTGTCCCTG+G+A+G、PCGEM1-2 ;A+T +T+CCCCTCAGA+A+ATCTCAGGGCTT+G+T+C，其中 + 选自 e -D-氧-LNA 核巧酸类似物中的任一 种，所述的检测AR3的抗体及巧光二抗为绿色巧光蛋白EGFP。
5. 根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的核酸原位杂交检测探针和可药 用的稀释剂、载体或辅剂组合使用。
6. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的载体包含水性载体，所述水性载 体包含用于将pH维持在7. 35-7. 45范围内的缓冲剂。
7. 权利要求4-6任一所述的试剂盒制备诊断癌症的试剂中的应用。
8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的癌症为实体肿瘤形式。
9. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的癌症选自具有PCGEM1表达的肿瘤 及相关性疾病，所述的疾病包括前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睾丸癌、子宫颈癌和结肠癌。
10. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的癌症选自具有AR及AR3表达的肿 瘤及相关性疾病，所述的疾病包括前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睾丸癌、子宫颈癌和结肠癌。
【专利摘要】本发明涉及一种预测和评价雄激素受体(AR)的激素去势治疗后去势抵抗或复发的方法、试剂盒及应用，所述的方法联合检测PCGEM1或PCAT1及雄激素受体异构体AR3(AR-V7)。其优点表现在：一方面，直观地将目标检测基因与其病理变化结合起来；另一方面，能够高效、准确的检测该特异性目标检测基因，并放大该信号，较常规的染色检测更为灵敏和精确，并有利于保存显色后的组织切片。最重要的是联合检测PCGEM1及AR异构体AR3可以有效的预测和评价AR相关肿瘤的去势抵抗或复发转移情况。
【IPC分类】G01N33-68, G01N33-574, C12Q1-68
【公开号】CN104531878
【申请号】CN201510003148
【发明人】张子强, Y·莫, 邱忠民, 朱竹先, 吕寒静
【申请人】上海市同济医院
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月4日