联合治疗iii的制作方法
【专利说明】联合治疗I I I 发明领域
[0001] 本发明涉及组合癌症治疗领域。
[0002] 发明背景 HDAC4属于组蛋白脱乙酰酶的第IIa类家族，所述组蛋白脱乙酰酶传统地以它们对细 胞核组蛋白蛋白质上的赖氨酸残基脱乙酰基和表观遗传地抑制基因表达的能力命名。然 而，近几十年已经发现这些HDAC在细胞核，以及在细胞质中调控很多非组蛋白蛋白质（由 Yao 和 Yang 在 J Biomed Biotechnol. (2011) 2011 ;146493 中综述）。第 IIa 类 HDAC 的特征特性包括（i)存在保守的N-端调节结构域，含有用于细胞核-细胞质间穿梭的NLS (核定位信号)，以及用于转录因子和辅阻遏物的结合基序（ii)组织特异性表达和；（iii)对 磷酸化作用介导的外部/内部刺激的反应性（Parra和Verdin, Curr Opin Pharmacol. (2010) 10 (4) ;454-60)。
[0003] 在心肌和平滑肌，心脏和大脑中观察到高HDAC4表达。HDAC4可以与辅阻遏物(例 如N-CoR和SMRT)和其它HDAC (HDAC3和5)联合，通过结合组织特异性转录因子(例如 MEF2、Runx2、p53和SRF)抑制很多基因的表达（Parra和Verdin，2010，食_上)。数个研 究涉及异常的HDAC4表达和对发育缺陷和神经退行性疾病的亚细胞定位（Majdzadeh等， Front Biosci. (2008) 13 ;1072-82)。对特异的细胞刺激应答，多种激酶(主要地为CAMK) 可以在保守的丝氨酸残基(在人中为Ser-246、Ser-467和Ser-632)使HDAC4磷酸化，产生 对14-3-3蛋白质的停泊位点，所述14-3-3蛋白质在细胞质中诱捕HDAC，因此解除对靶启动 子的HDAC介导的抑制。在另一方面，已经显示PP2A和PPl磷酸酶介导的脱磷酸化使HDAC4 NLS暴露并且促进其核输入（Parra和Verdin，2010，力71)。
[0004] Wilson 等在 Mol Biol Cell. (2008) 19 (10);4062-75 中报导，在增殖的小鼠结 肠隐窝中有强的HDAC4表达。已经证明HDAC4或其它数种HDAC的沉默，以及使用pan-HDAC 抑制剂处理，在DNA损伤条件下通过p53直接地或间接地上调p21抑制癌细胞增殖（Basile 等，J Biol Chem. (2006) 281(4);2347-57; Wilson 等，2008，力7」：)。在高通量研究中， 人乳腺肿瘤样品显示出显著的HDAC4过表达，暗示了 HDAC4在人癌症中的潜在作用（Witt 等，Cancer Lett. (2009) 277 (1);8-21)。
[0005] 近期的更多发现已经鉴定了数种细胞质靶，它们突出了 HDAC4在发育、血管生成、 细胞凋亡和化学抗性的调控中的作用。显示在细胞质中HDAC4和它与HIFl α结合的活性对 视网膜神经生存是需要的（Chen 和 C^pko，Science. (2009) 323 (5911);256-9)。HDAC4 介导的HIFl a N-端赖氨酸的脱乙酰作用稳定了 HIFl α，并且促进其靶基因，即VEGF和糖 酵解基因 （LDHA 和 Glutl)的转录（Geng 等，J Biol Chem. (2011) 286(44);38095-102)。 因此，HDAC4似乎使细胞准备适应低含氧量的/应激条件，并且同样有助于肿瘤血管生成。 重要地，在该报导中，对HDAC4沉默的前列腺癌细胞在低含氧量条件下对多西他赛治疗更 加有响应。
[0006] 还显示在卵巢癌中，HDAC4过表达通过STATl的激活和核转位(脱乙酰基随后磷酸 化)，增强顺钼抗性。相反，更特异的HDAC4抑制剂，APHA4a，诱导半胱天冬酶活性并且恢复 顺钼敏感性（Stronach 等，Cancer Res. (2011) 71 (13);4412_22)。
[0007] 最近，显示了细胞核HDAC4和细胞质HDAC4两者在神经元生存和毛细血管扩张性 失调（AT)发病机理中的重要性（Li等，Nat Med. (2012) 18 (5); 783 - 790)。显示由于 ATM的丢失，增强的PP2A活性促进HDAC4的细胞核积累和多种启动子的表观遗传抑制。相 反地，细胞质HDAC4抑制细胞周期的再进入和半胱天冬酶-3激活。重要地，这些发现在癌 症领域同样非常重要，因为可以证明PP2A激活通过将促存活细胞质HDAC4转移至抗存活细 胞核HDAC4对改善在大脑中的癌细胞杀死有用的。
[0008] 考虑到癌症是影响全世界所有社区的毁灭性疾病，并且固有的和获得的抗性是涉 及目前使用的化学治疗的主要问题，在本领域中对于诱导细胞凋亡的新的癌症治疗方案存 在确定的需求。
[0009] 发明简述 在一个方面，本发明提供了至少一种类型的HDAC4沉默剂和式（I)的化合物的组合，用 于作为药物使用。式（T)的化合物县有以下一般结构： 其中
【主权项】
1. 至少一种类型的HDAC4沉默剂和式（I)的组合产品：
其中 R'是H或烷基； R' '是H或烷氧基； R1和R2是H或一同形成氧代； R3和R4单独地是H、0H或一同形成氧代； R5、R6、R6'、R7和R8单独地选自H、烷基、烷氧基、羟基、羟基烷基、烷氧基羰基或单-和 -烧基氣基； X是〇12或0 ;并且 n是0或1 用于作为药物使用。
2. 根据权利要求1的组合产品，其中HDAC4沉默剂选自siRNA分子、DsiRNA分子、人工 miRNA前体、shRNA分子、反义寡核苷酸和核糖核酸酶。
3. 根据权利要求1的所述组合产品，其中所述HDAC4沉默剂包含选自SEQ ID NO :1至 170的核酸序列。
4. 根据权利要求1的所述组合产品，其中所述式（I)的化合物选自
5. 根据权利要求1的所述组合产品，用于选自脑癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成胶质 细胞瘤的过度增生疾病的治疗。
6. 根据权利要求1至5任一项的所述组合产品，其中所述HDAC4沉默剂和所述式（I) 的化合物是同时地、循序地或分开地施用。
7. 包含根据权利要求1至6任一项的组合产品和至少一种药物可接受载体的药物组合 物。
8. 通过在需要这样的致敏作用的人或动物主体中沉默HDAC4基因使过度增生细胞对 化学治疗剂敏感的方法。
9. 在需要这样的治疗的人或动物主体中治疗过度增生疾病的方法，通过伴随地、同时 地、循序地对所述主体施用至少一种类型的HDAC4沉默剂和式（I)的化合物：
其中 R'是H或烷基； R' '是H或烷氧基； R1和R2是H或一同形成氧代； R3和R4单独地是H、0H或一同形成氧代； R5、R6、R6'、R7和R8单独地选自H、烷基、烷氧基、羟基、羟基烷基、烷氧基羰基或单-和 -烧基氣基； X是〇12或0 ;并且 n是0或1。
10. 根据权利要求8或9的所述方法，其中所述HDAC4沉默剂选自siRNA分子、DsiRNA 分子、人工miRNA前体、shRNA分子、反义寡核苷酸和核糖核酸酶。
11. 根据权利要求8或9的所述方法，其中所述HDAC4沉默剂包含选自SEQ ID NO :1至 170的核酸序列。
12. 根据权利要求8或9的所述方法，其用于选自脑癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成胶 质细胞瘤的过度增生疾病的治疗。
13. 根据权利要求8至12任一项的所述方法，其中所述HDAC4沉默剂和所述式（I)的 化合物是同时地、循序地或分开地施用。
【专利摘要】本发明基于发现沉默HDAC4基因使癌症细胞对某些小分子化学治疗剂的细胞凋亡诱导活性敏感。因此，本发明分别涉及联合治疗、致敏方法和药物组合物。
【IPC分类】C12N15-113, A61K31-553, A61K31-7088, A61P35-00
【公开号】CN104619845
【申请号】CN201380047501
【发明人】J.维斯特马克, A.考尔
【申请人】图尔库大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2013年7月11日
【公告号】CA2878873A1, EP2872631A1, US20150209369, WO2014009609A1