一株球毛壳菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一株球毛壳菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 人参（PanaxginsengC.A.Mey)为五加科人参属多年生宿根阴性双子叶药用植 物，是我国的名贵药材，有"百草之王"的美誉。人参在中国、韩国、朝鲜、俄罗斯等国家有大 面积种植，其中，中国东北特别吉林省是人参的主产区，已成为当地的重要支柱产业之一。 人参的长期人工种植和品种选育难度大导致人参种质退化、病害严重、质量差、产量低。化 学农药的大量使用，导致农药残留和环境污染，降低了人参药材的安全性和商品价值。病害 防控问题已成为制约人参产业可持续发展的重大问题之一。
[0003] 人参病害约有20~40种，其中，以下7类病原菌是导致人参常见病害并限制人参产 业发展的主要病原菌：由腐皮镰孢菌（Fusariumsolani)导致的人参根腐病一般发病率在 30%左右，严重时六年生人参根腐病造成的死亡率可达50%~80%，主要危害春季幼苗根部和 根茎部（地表以下茎部），腐烂的参根呈黑褐色湿腐状，后期糟朽状，仅存中空的根皮；恶疫 霉菌（Phytophthoracactorum)导致的人参疫病严重时发病率可达70%，其症状为发病轻 时叶片上产生不规则的暗绿色斑，重者茎叶枯萎，根部腐烂，植株成片枯死，减产严重；人参 核盘菌（Sclerotiniaschinseng)导致的人参菌核病主要危害3年生以上参根，发病部位 为芽苞、根和根茎，参根被害后，初期在表面生少许白色绒状菌丝体，以后，内部迅速腐败、 软化，细胞全部被消解殆尽，只留下坏死的外表皮，表皮内外形成许多鼠粪状的菌核；人参 链格孢菌（Alternariapanax)导致的人参黑斑病一般发病率20%-30%，严重时达到100%， 造成早期落叶，植株枯萎，不结实，参根和参籽减产；立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani)导 致的人参立枯病是人参苗期主要病害之一，在低温湿度大的条件下，发展蔓延极为迅速，一 般发病率为8~30%，严重者可达40%左右，病菌使幼苗在地面3~5厘米干湿土交界面的茎 部嫌缩、腐烂，切断输导组织，致使幼苗倒伏；毁灭柱孢菌（Cylindrocarpondestructans) 导致的人参锈腐病严重时发病率达70%以上，该病发生于根的各部位，病斑呈铁锈色，由 点至面扩散至全根，土壤湿度大、透气不好、腐殖质层厚，发病重；灰葡萄孢菌（Botrytis cinereaPers.)引起的人参灰霉病发病初期在参根的芽胞上出现褐色斑点，从参根主根的 外表上看不出异常现象，但用手掐时，参根内部的组织已变软。发病后期上述两者都表现为 软腐症状，并在病部产生灰色的绒毛状霉层，有时可在病根上形成黑色的菌核。
[0004] 长期以来通过使用化学农药等化学防治措施防治人参病害并未达到预期效果，而 且化学农药过量使用不仅会破坏土壤微生态环境，加重环境污染，也使有毒物质在参根内 大量积累，降低人参的使用安全性和商品价值。因此，病害防治重点逐步转向生物防治和农 业防治措施上。在农作物植物保护领域，利用作物的健株根际土壤筛选对病原菌具有显著 生防效果的土壤微生物，并制成微生物菌剂是生物防控研宄的重要手段之一，也是有益微 生物资源开发利用的重要途径。
[0005] 生物防治是以生态学原理为基础，利用生物物种间的相互作用，以一种或一类生 物抑制另一种或另一类生物。生物防治最大的优点是不污染环境，没有农药残留，这是农药 等非生物方法防治病虫害所无法比拟的。利用生防微生物防治病原微生物是生物防治技术 的重要组成部分。它避免了大量使用化学农药带来的一系列植保、环境和能源方面的问题， 避免了农药残留对人畜的危害，更重要的是促进了农业可持续发展。毛壳菌属（Chaetomium sp.)真菌广泛分布于土壤及植物体内。该类微生物能产生毛壳素、球毛壳素等多种抗生素， 作为植物病原菌的生物防治菌被广泛研宄。目前研宄的拮抗毛壳菌种类较少，一株球毛壳 菌（Chaetomiumglobosum)已从植物体内分离获得并被用于防治植物病害，而利用球毛壳 菌防治人参真菌性病害未见报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于：针对人参生产中的主要真菌性病害，尤其是人参土传病害发 生面积日益扩大，化学药剂防治除易造成环境污染和农药残留外，防效也不理想的实际情 况，提出一株从人参根际土壤中分离获得的球毛壳菌（Chaetomiumglobosum)FSR-74菌 株及其在分别引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病、菌核病和灰霉病的腐皮镰孢 菌（F.solani)、毁灭柱孢菌（C.destructans)、人参链格孢菌（A.panax)、立枯丝核菌 (Rh.solani)、恶疫霉菌（Ph.cactorum)、人参核盘菌（S.schinseng)和灰葡萄抱菌（B. cinerea) 7种病原菌防控上的应用。
[0007] 本发明提供了一种对上述引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病、菌核 病和灰霉病的7种病原真菌均具有良好防控作用的球毛壳菌 FSR-74,该菌株的保藏名称为球毛壳FSR-74,分类命名为球毛壳aadoffiiws 保 藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年9月19日， 保藏编号：CGMCCNo. 9690,保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生 物研宄所。
[0008] 本发明提出的球毛壳菌FSR-74菌株鉴定采用传统形态鉴定技术及现代rDNA-ITS 序列分析技术。FSR-74在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)平板上25 °C培养时生长较慢， 菌落浅褐，橄褐或棕褐色，具灰白色或橄褐色气生菌丝，背面棕褐色，常具橄褐色渗出物， 菌落边缘常呈不整齐的波裂状。FSR-74的显微结构在10X50光学显微镜下观察，子囊 果表生，以褐色假根固着于基质表面，在反射光下为橄绿色至橄褐色，倒卵形至近球形，直 径160~240ym，高约220~300ym;子囊果壁由暗褐色交错丝组织构成；顶生毛大量而密 集，曲折状、波浪状或稍呈螺旋状卷曲，褐色，具隔，基部隔膜较明显，不分枝，表面具密集疣 点，基部宽约2. 5~4ym;侧生毛曲折状，分隔明显；子囊棍棒状，27~36X11~15ym，内有 8个子囊孢子，子囊壁容易消解；子囊孢子柠檬形，两侧扁，两端各具一细尖，成熟时褐色， 8. 5~11X7~8. 5ym，具单个顶生芽孔。所述的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)配方为：土 豆 200g/L，葡萄糖 10g/L，琼脂 15g/L，蒸馏水 1000mL，2yg/mL青霉素，pH为 6.8~7.2。
[0009] 本发明提出的球毛壳菌FSR-74菌株的rDNA-ITS序列长度为604bp，具体如SEQ IDNo: 1所示。应用BLAST和DNAMAN等软件进行分析，将FSR-74菌株的ITS序列通过BLAST 比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。与菌株FSR-74相似性最高的是 Chaetomiumglobosum，同源性达到99%。根据MEGA5.10Beta2软件以UPGMA法构建系统发 育树发现，FSR-74与Chaetomiumglobosum同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近，亲源性 达到了99%。结合形态学分类和分子生物学鉴定结果，可以确认本发明的菌株FSR-74为球 毛壳菌（Chaetomiumglobosum)。
[0010] 本发明涉及球毛壳菌FSR-74在防治植物真菌病害中的应用，所述植物优选为人 参，所述真菌优选为引起人参根腐病的腐皮镰孢菌（F.solani)、引起人参锈腐病的毁灭柱 孢菌（C.destructans)、引起人参黑斑病的人参链格孢菌（A.panax)、引起人参立枯病的 立枯丝核菌（R.solani)、引起人参疫病的恶疫霉菌（P.cactorum)、引起人参菌核病的人 参核盘菌（S.schinseng)和引起人参灰霉病的灰葡萄孢菌（B.cinerea)这7种病原