一株球毛壳菌及其应用_2

文档序号:8375830阅读:来源:国知局
菌中 的一种或多种。
[0011] 本发明还涉及球毛壳菌FSR-74在防治植物真菌病害中的防病机理,所述植物优 选为人参,所述真菌优选为引起人参根腐病的腐皮镰孢菌(F.solani)、引起人参锈腐病的 毁灭柱孢菌(C.destructans)、引起人参黑斑病的人参链格孢菌(A.panax)、引起人参立 枯病的立枯丝核菌(R.solani)、引起人参疫病的恶疫霉菌(P.cactorum)和引起人参灰霉 病的灰葡萄孢菌(B.cinerea)。球毛壳菌FSR-74通过竞争作用抢占空间位置和营养物质 有效抑制人参病原菌菌丝生长;通过重寄生作用并释放抑菌活性物质导致病原菌菌丝及分 生孢子畸形,抑制病原菌生长及孢子萌发。
[0012] 本发明还涉及一种球毛壳菌FSR-74的微生物制剂,其可通过以下方法制备得到: (1) 将球毛壳菌FSR-74试管斜面种活化,取2个5mm菌饼接种于用250mL三角瓶装 的100mL马铃薯葡萄糖(PDB)液体培养基中,在170r/min,25 °C下培养48h,获得种子液; (2) 将球毛壳菌FSR-74种子液以10% (体积比)接种于发酵培养液中培养,在170r/ min,25°C下培养96h,获得培养液; (3) 将培养液经2层无菌纱布过滤,滤液经血球计数板计数,将孢子悬浮液分散至6 g?L4羧甲基纤维素钠(CMC)溶液中,得孢子悬浮液,孢子含量为2X10 5cfu?ml/1; (4)将球毛壳菌FSR-74培养液在8000r/mim离心20min,过滤,上清即为发酵液。
[0013] 本发明的球毛壳菌FSR-74及其发酵液对人参具有田间防病和促生长的作用。
[0014] 本发明的优点在于,保藏号为CGMCCNo. 9690的球毛壳菌FSR-74对分别引起人参 根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病、菌核病和灰霉病的腐皮镰孢菌(Z7. so/afli)、毁灭柱 孢菌(C 人参链格孢菌(A 立枯丝核菌(TP. so/afli)、恶疫霉菌(/*. 人参核盘菌(51 和灰葡萄孢菌(汉ciflerea)等7种病原菌具有 不同程度的防治效果,对峙培养时对人参病原菌生长抑制率达46. 67%~73. 33%,发酵液培养 时对人参病原菌生长抑制率达41. 45%,FSR-74的发酵液对人参具有促生长作用, 无毒无致病性,对人畜安全,不污染环境;同时,生防菌株FSR-74孢子悬浮液直接施加到土 壤中对植物进行灌根或涂叶处理即可发挥其抑菌、杀菌作用,能显著改善人参根际微生物 群落结构,形成一个生物多样化的人参根际土壤微生态环境,从而有效持久地控制人参真 菌性病害的发生。
【附图说明】 图1 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对毁灭柱孢菌菌 丝的生长平板抑制作用。 图2 :本发明的球毛壳菌FSR-74株对腐皮镰孢菌如仏/^)菌丝的生长平板 抑制作用。 图3:本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对人参链格孢菌(J/teraaria 菌丝的生 长平板抑制作用。 图4:本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对人参核盘菌(5Wero(i/7iascA/aseflg)菌丝的 生长平板抑制作用。 图5:本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对立枯丝核菌so/a/ji)菌丝的生 长平板抑制作用。 图6 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对恶疫霉菌从ora 菌丝的生 长平板抑制作用。 图7 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对灰葡萄孢菌ci/7erea)菌丝的生长 平板抑制作用。 图8 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株抑制腐皮镰孢菌>so/a/7i)菌丝生长的 显微观察。 图9 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株抑制恶疫霉菌从oracacterws)菌丝生 长的显微观察。 图10 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株抑制立枯丝核菌so/a/ji)菌丝生 长的显微观察。 图11 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株抑制毁灭柱孢菌 菌丝生长的显微观察。 图12 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株抑制人参链格孢菌(J/teraaria/7a/?az)菌丝生 长的显微观察。 图13 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株抑制灰葡萄孢菌ci/7erea)菌丝生长 的显微观察。 图14:本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液对腐皮镰孢菌菌丝 生长的抑制作用。 图15 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液对恶疫霉菌从oracacter?)菌 丝生长的抑制作用。 图16 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液对人参链格孢菌(J/teraaria 菌 丝生长的抑制作用。 图17 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液对灰葡萄孢菌ci/7erea)菌丝 生长的抑制作用。 图18 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液抑制毁灭柱孢菌(Cj^i/^rocar/70/7 菌丝生长的显微观察。 图19 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液抑制腐皮镰孢菌sohfli)菌 丝生长的显微观察。 图20:本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液抑制人参链格孢菌(J/teraaria菌丝生长的显微观察。 图21 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液抑制恶疫霉菌从oracacter?) 菌丝生长的显微观察。 图22 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液对灰葡萄孢菌ci/7erea)菌丝 生长的显微观察。 图23:本发明的球毛壳菌FSR-74菌株发酵液抑制人参链格孢菌(J/teraaria孢子萌发的显微观察。 图24 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对人参的促生长作用(A:空白液体培养基,B:浇 注球毛壳菌FSR-74发酵液)。 图25 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对毁灭柱孢菌引起的人参锈腐病的防治效果(A: 无菌水灌根,B:球毛壳菌FSR-74孢子悬浮液灌根)。 图26 :本发明的球毛壳菌FSR-74菌株对人参链格孢菌引起的人参黑斑病的防治效果(A:无菌水涂抹叶片,B:球毛壳菌FSR-74孢子悬浮液涂抹叶片)。
【具体实施方式】
[0015] 实施例1 球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)FSR-74菌株的分离和保藏 该菌株自吉林省抚松县榆树人参栽培地多年生人参健株的根际土壤分离得到。采集 上述土壤样品,去除表面枯落物后过2mm筛。称取新鲜土壤样品10g,放入装有玻璃珠和 90mL无菌生理盐水的三角瓶中,充分振荡30min,使样品与无菌水混合均勾,制得土壤悬 浊液。在无菌条件下取1mL振荡液,加入9mL无菌生理盐水,按梯度依次制成10_2、10_3、 1〇_ 4的稀释液。分别吸取100UL各稀释液加入到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板上, 采用平板稀释法均匀涂布,每处理3次重复,25 °C培养箱培养7d。挑选单菌落转接到马铃 薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板培养长出菌落后,采用单孢分离法进行分离纯化,纯化菌株 于4 °C保存。
[0016] 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)配方为:土豆200g/L,葡萄糖10g/L,琼脂15g/ L,蒸馏水 1000mL,2yg/mL青霉素,pH为 6. 8~7. 2。
[0017] 该菌株在在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板上25 °C培养时生长较慢,菌落 浅褐,橄褐或棕褐色,具灰白色或橄褐色气生菌丝,背面棕褐色,常具橄褐色渗出物,菌落边 缘常呈不整齐的波裂状。FSR-74菌株的子囊果表生,以褐色假根固着于基质表面,在反射 光下为橄绿色至橄褐色,倒卵形至近球形,直径160~240ym,高约220~300ym;子囊果壁 由暗褐色交错丝组织构成;顶生毛大量而密集,曲折状、波浪状或稍呈螺旋状卷曲,褐色,具 隔,基部隔膜较明显,不分枝,表面具密集疣点,基部宽约2. 5~4ym;侧生毛曲折状,分隔 明显;子囊棍棒状,27~36X11~15ym,内有8个子囊孢子,子囊壁容易消解;子囊孢子柠檬 形,两侧扁,两端各具一细尖,成熟时褐色,8. 5~11X7~8. 5ym,具单个顶生芽孔。
[0018] 该菌株于2014年9月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心,保藏号为CGMCCNo.
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