从藏药细果角茴香中提取分离四种或五种生物碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及从藏药细果角茴香中提取分离四种或五种生物碱的方法。
【背景技术】
[0002] 藏药角茴香（HypecoumleptocarpumHook.f.etThoms)为罂粟科角茴香属植物， 别名咽喉草、山黄连或野茴香等，藏药名为巴尔哇打、巴尔巴达。生长于海拔4300m以下的 草原、草甸、砂砾地上，味苦性凉，清血热、温热和毒热。《西藏常用中草药》称其有解热镇痛、 消炎解毒之功效，可治伤风感冒、头痛、四肢关节疼痛、胆囊炎，并解食物中毒。《陕甘宁青中 草药选》中称：细果角茴香能治流感、咽喉肿痛、目赤等症。现代分析化学和天然产物化学 研宄发现：细果角茴香中含有多种生物碱成分，如：原阿片碱、隐品碱、血根碱等。
[0003] 细果角茴香生物碱是从细果角茴香全草中提取得到的生物碱。通过查阅文献，发 现还没有对其活性成分进行系统研宄。根据同属植物的研宄发现，该属植物的活性成分主 要为生物碱。到目前为止只报道了使用传统的柱色谱法对细果角茴香中生物碱分离的报 道。
[0004]高速逆流色谱（High-speedcounter-currentchromatography，简称HSCCC)分离 技术是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体，利用 两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，其中一相 作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量的固定相，物质的分离依 据其在两相中分配系数的不同而实现，特别适合于天然产物活性成分的分离。
[0005]目前还未见有人使用HSCCC技术对细果角茴香中的生物碱进行分离纯化。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种利用HSCCC技术从藏药细果角茴香中提取分离四种 或五种生物碱的方法。
[0007] 具体地，本发明提供了从藏药细果角茴香中提取分离四种生物碱的方法，它包括 如下操作步骤：
[0008] (1)粗提物的制备：
[0009] 取细果角茴香，用70% -95% v/v乙醇为溶剂提取，提取液浓缩除去乙醇后，所得 浸膏加盐酸，除去不溶物，溶液脱脂后，加碱调节pH至9~10,再用氯仿萃取，收集氯仿层， 除去溶剂后，干燥得到生物碱粗提物；
[0010] (2)采用高速逆流色谱法分离：
[0011] 取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=3 : 5 : 2 : 5,置于分液漏斗中配制两相溶剂系 统，取下相加盐酸至其浓度为5~10mM/L时作为固定相，上相加三乙胺至其浓度为10mM时 作为流动相；将固定相充满逆流色谱的色谱柱，在25-28°C下，主机正转，转速为800-900r/ min，然后以1. 5-1. 8mL/min的流速泵入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态；步骤 (1)制备的粗提物，以固定相为溶剂溶解，制备样品溶液；将样品溶液进样，在280nm下监 测，分别接收各目标成分，即可分别得到组分a、（-)-N-methylanadine、oxohydrastinine、hydroprotopine；
[0012] (3)取组分a，上半制备色谱，即可分离得到1印topidine，其中，半制备色谱条件 如下：
[0013]C18柱，甲醇-水为流动相，梯度条件为甲醇：0-10min，40-42 % ;10-30min， 42-42% ;检测波长 280nm。
[0014] 进一步地，步骤（1)中，乙醇浓度为95%v/v，提取温度为50-70°C，优选为60°C。
[0015] 进一步地，步骤（1)中，盐酸的加入量为浸膏体积的4倍，盐酸体积分数为2%。
[0016] 进一步地，步骤（1)中，脱脂处理是采用石油醚或氯仿萃取实现；优选使用石油 醚。
[0017] 进一步地，步骤（1)中，所述碱为氨水。
[0018] 进一步地，步骤（2)中，粗提物用量为200mg。
[0019] 进一步地，步骤（2)中，接收出峰时间为49-57min的目标成分，即可得到组分a; 接收出峰时间为7〇-75min的目标成分，S卩可得到（-)-N-methylanadine;接收出峰时间为 102_106min的目标成分，即可得到oxohydrastinine;接收出峰时间为126_133min的目标 成分，即可得到hydroprotopine。
[0020] 本发明还提供了从藏药细果角茴香中提取分离五种生物碱的方法，它包括如下操 作：
[0021] A、按照上述方法制备组分a、（_)-N-methylanadine、oxohydrastinine、 hydroprotopine；
[0022] B、取组分a，上半制备色谱，依次可分离得到式a_l和leptopidine，其中，半制备 色谱条件如下：C18柱，甲醇-水为流动相，梯度条件为甲醇：0-10min，40-42% ;10-30min， 42-42% ;检测波长 280nm。
[0023]
【主权项】
1. 从藏药细果角茴香中提取分离四种生物碱的方法，其特征在于：它包括如下操作步 骤： (1) 粗提物的制备： 取细果角茴香，用70% -95% v/v乙醇为溶剂提取，提取液浓缩除去乙醇后，所得浸膏 加盐酸，除去不溶物，溶液脱脂后，加碱调节PH至9~10,再用氯仿萃取，收集氯仿层，除去 溶剂后，干燥得到生物碱粗提物； (2) 采用高速逆流色谱法分离： 取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=3 : 5 : 2 : 5,置于分液漏斗中配制两相溶剂系统， 取下相加盐酸至其浓度为5~10mM/L时作为固定相，上相加三乙胺至其浓度为10mM/L时 作为流动相；将固定相充满逆流色谱的色谱柱，在25-28°C下，主机正转，转速为800-900r/ min，然后以I. 5-1. 8mL/min的流速泵入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态；步骤 (1)制备的粗提物，以固定相为溶剂溶解，制备样品溶液；将样品溶液进样，在280nm下监 测，分别接收各目标成分，即可分别得到组分a、（-)-N-methylanadine、oxohydrastinine、 hydroprotopine ； (3) 取组分a，上半制备色谱，接收出峰时间为24. 8-25. 4min的目标成分，即可得到 leptopidine，其中，半制备色谱条件如下： C18柱，检测波长280nm，甲醇-水为流动相，梯度条件为甲醇：0-10min，40-42% ; 10-30min，42-42%。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，乙醇浓度为95% v/v，提取 温度为50-70 °C，优选为60 °C。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，盐酸的加入量为浸膏体积的 4倍，盐酸体积分数为2 %。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，脱脂处理是采用石油醚或氯 仿萃取实现；优选使用石油醚。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，所述碱为氨水。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤⑵中，粗提物用量为200mg。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中，接收出峰时间为 49-57min的目标成分，即可得到组分a、；接收出峰时间为70-75min的目标成分，即 可得到（-)-N-methylanadine ;接收出峰时间为102_106min的目标成分，即可得到 oxohydrastinine ;接收出峰时间为126_133min的目标成分，即可得到hydroprotopine。
8. 从藏药细果角茴香中提取分离五种生物碱的方法，其特征在于：，其特征在于：它包 括如下操作： A、 按照权利要求 1 制备组分 a、（-)-N-methylanadine、oxohydrastinine、 hydroprotopine ； B、 取组分a，上半制备色谱，接收出峰时间为22. 7-23. 2min的目标成分，即可得到组 分a-Ι ;接收出峰时间为24. 8-25. 4min的目标成分，即可得到leptopidine，其中，半制备 色谱条件如下：C18柱，检测波长是280nm，甲醇-水为流动相，梯度条件为甲醇：0-10min， 40-42% ；10-30min,42-42%
9. 式a-1所示的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或晶型：
10. 式a-Ι所示的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或晶型在制备抗氧 化的药物中的用途。
【专利摘要】本发明提供了从藏药细果角茴香中提取分离四种或五种生物碱的方法。本发明中，用高速逆流色谱法从细果角茴香中提取分离四种或五种生物碱类化合物，相对传统的柱色谱法操作简单，分离时间明显缩短，得到的化合物纯度也相对较高。同时，本发明研究过程中分离得到了新化合物——式a-1，该化合物具有一定的抗氧化作用，为临床用药提供了新的选择。
【IPC分类】A61P39-06, C07C235-34, C07C231-24, C07D455-03, C07D491-056, C07D217-20
【公开号】CN104761562
【申请号】CN201410578856
【发明人】丁晨旭, 张秋龙, 胡娜, 马涛, 李文聪, 索有瑞
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2014年10月17日