与乳头状甲状腺瘤相关的基因的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，涉及与乳头状甲状腺瘤相关的基因 及其PCR检测方法。
【背景技术】
[0002] 甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤，近年来发病率增长迅速，已成为最常见的恶性 肿瘤之一，也是近年来发病率增长最快的一种实体肿瘤。其中，90%是乳头状甲状腺癌 (papillary thyroid cancer, PTC)。虽然乳头状甲状腺癌的死亡率和其他恶性肿瘤相比死 亡率比较低，但是乳头状甲状腺癌转移率很高，淋巴结转移率高达30% -50%，如果乳头状 甲状腺癌转移和复发，病人没能及时诊断，结果丧失最佳手术时机，死亡率则显著升高，是 预后不良的重要指标。
[0003] 流行病学证据表明，在中国很多地区，女性中乳头状甲状腺癌的发病率已超过乳 腺癌，位居第一位。乳头状甲状腺癌的发生是一个多基因、多步骤的病变过程，包括遗传学 等一系列改变。病因学研宄揭示，该恶性肿瘤为遗传因素贡献最大的一种恶性肿瘤。越来 越多的证据表明，体细胞的基因突变造成的癌基因激活与抑癌基因失活在肿瘤的发生发展 过程中扮演着至关重要的作用，因此，对于乳头状甲状腺癌体细胞突变筛查有助于发掘其 发病的驱动基因。
[0004] 对甲状腺癌的诊断目前主要依靠甲状腺超声以及穿刺活检病理，虽然穿刺活检病 理诊断甲状腺癌已经广泛应用于临床，但仍存在30%可疑或不确定是否为甲状腺癌的诊断 结果，并且穿刺是一项有创检查，给患者带来较大痛苦。甲状腺癌一般以手术治疗，早期发 现进行治疗的患者五年生存率能达95%，晚期发现的患者五年生存率降至59%，因此为 提高甲状腺癌诊断的准确性和早期诊断率，有必要寻找一种创伤性小，灵敏度和特异度均 较高的新的诊断方法。
[0005] 由于肿瘤遗传的复杂性，传统的体细胞突变筛查方法无法对肿瘤有一个整体的认 识。而作为一种高效和高灵敏度的技术，全基因外显子组测序能发现外显子区的绝大部分 的疾病相关变异，可检测常见变异和频率〈5%的低频突变，通过对外显子区域的基因突变 进行测定，一方面有助于确定乳头状甲状腺癌相关癌基因及抑癌基因，为其早期分子诊断 提供依据；另一方面有助于更好地定性肿瘤，揭示相似组织病理类型和不同临床特征的亚 临床分类，帮助确定不同亚型乳头状甲状腺癌的治疗敏感性和判断预后；更为关键的是，外 显子组测序技术有助于寻找乳头状甲状腺癌基因突变相关的最佳药物靶点，从而改变相应 分子调控网络和相关代谢途径，使乳头状甲状腺癌个体化治疗成为可能。
[0006] 本发明中所引述的文献、著作、专利和专利申请公开书，其中全部或局部都明确地 和独立地都在本专利申请书引用参考。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种基因，该基因命名为GAS8-AS1，其序列如序列表SEQ ID NO :1 所示。
[0008] 本发明的另一目的在于提供的GAS8-AS1基因在制备筛选、检测或辅助诊断乳头 状甲状腺癌的试剂的用途。
[0009] 本发明的另一目的在于提供与GAS8-AS1基因在严格条件下杂交的核酸分子，用 于制备检测GAS8-AS1基因的试剂。
[0010] 在本发明的一个优选实施方案中，所述核酸分子的序列如SEQ ID N0 :2或SEQ ID NO : 3所示。
[0011] 本发明的另一目的在于提供一种检测试剂盒，所述试剂盒包括与GAS8-AS1基因 在严格条件下杂交的核酸分子，可用于检测GAS8-AS1基因。
[0012] 在本发明的一个优选实施方案中，所述试剂盒为实时定量PCR检测试剂盒。
[0013] 在本发明的另一个优选实施方案中，所述试剂盒中包括的核酸分子的序列如SEQ ID N0 :2 或 SEQ ID N0 :3 所示。
【附图说明】
[0014] 参考随附的附图，本发明更多的目的、功能和优点将通过本发明实施方式的如下 描述得以阐明，其中：
[0015] 图1为IncRNA GAS8-AS1基因及相关基因突变示意图；
[0016] 图2为RNAfold软件预测IncRNA GAS8-AS1的RNA二级结构图；
[0017] 图3为浙江队列和淮安队列中检测乳头状甲状腺癌组织及癌旁正常组织中， IncRNA GAS8-AS1的表达水平示意图；
[0018] 图4为转染携带IncRNA GAS8-AS1基因质粒后，乳头状甲状腺癌细胞系GLAG66、 NPA和TPC-1的增殖情况示意图；
[0019] 图5为实时定量PCR检测转染携带IncRNA GAS8-AS1基因质粒后乳头状甲状腺癌 细胞系GLAG66、NPA和TPC-1中IncRNA GAS8-AS1的表达水平情况示意图；
[0020] 图6为转染针对IncRNA GAS8-AS1的siRNAs后，乳头状甲状腺癌细胞系GLAG66 和TPC-1的增殖情况示意图；
[0021] 图7为实时定量PCR检测转染针对IncRNA GAS8-AS1的siRNAs后乳头状甲状腺 癌细胞系GLAG66和TPC-1中IncRNA GAS8-AS1的表达水平情况示意图。
【具体实施方式】
[0022] 通过以下的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细解释及展述， 使本领域的普通技术人员能够更加容易地理解本发明，但不应该将此理解为本发明所述 主题的范围仅限于以下的实例及限制本发明的任何或所有权利，更不应该背离本发明的精 神。
[0023] 本发明的目的在于提供一种基因，该基因命名为GAS8-AS1，其序列如序列表SEQ ID N0 :1 所示。
[0024]GAS8-AS1基因（NCBI-GeneID:750)，又名C16orf3基因（16号染色体开放阅读框 3)，位于人类16号染色体GAS8基因2号内含子中。GAS8-AS1基因不含任何内含子序列， 与GAS8基因相反的方向转录产生一条长链非编码RNA (IncRNA)，该RNA不能翻译成蛋白质。 目前，对于该基因及其转录产物的生物学功能仍不清楚。
[0025] GAS8-AS1 的基因序列（NCBI Reference Sequence:NR_122031. 1)如下：
[0026] lacctgcagtc ccagctactg ggcagcctga agcagcagga tggtgtgaac ccaggaggtg
[0027] 61gagcttgcag tgagccgagg tcgcgccacc gcactccagc ctgggccaca cagcgagatt
[0028] 121ccgtcagaat cagttacttt tcgggcacag ccccaggcca cttactgtga gcctttttct
[0029] 181ttctcaacac cacattcccc acagggaaaa cacatttctc acctcaaaag aagacaagac
[0030] 241aacgagcaaa caagaaggag cagcaggagg ggttctgagc cgaggatgcc gggcagacat
[0031] 301gagggagaca cgcacccccg aatccaacca gtgcctcggc acaacgacaa atgtcttcac
[0032] 361gtcacagacc tttagaggct cctgggcaga gcctgaacca gggctcctga ctggtctgtt
[0033] 421tggctcacat ggtgttgaga ttttgccatc actcaatatt cagatttctt ataaatatcc
[0034] 481agatttccag cttctcttgg aaaatcagaa aaaaacagca ctgaactcct aggcccacaa
[0035] 541ggcactcccc agtgaacaga tgaaactgtc ctctgctgcg gggcaggagt ctccaggtca
[0036] 601cccccatccc tccccacctg cctggaccct gaagaagcct tctgagtctg tggctcaacg
[0037] 661tgcgatgtgc agtgcaaggg cctgccccgt agcctgcccc gtaggctgcc ccatagcctg
[0038] 721ccccgtaagc tgccccgtag cctgccccgt aggctgcccc gtaggctcca tggccactgc
[0039] 781cccacaaggc ctgtctccac aggaatggga agcggacagg gagacgggca gcagctcaca
[0040] 841tgctgggaca acgcagtgtt caatccattc tccatccagc agctccagac atctttccag
[0041] 901aacacaaacc tgacccca