一种用于痰液标本的星状诺卡氏菌选择培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及检验微生物培养领域，具体涉及一种用于痰液标本的星状诺卡氏菌选 择培养基。
【背景技术】
[0002] 微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来 促进或抑制一定类型的生物体(如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将 所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。星状诺卡氏菌（Actinomyces印pingeri)是 需氧土壤腐生菌，属于放线菌的一种，是条件致病菌，该菌广泛存在于空气、尘埃、土壤和家 畜体表，通过呼吸系统引起发病，也可经皮肤伤口或外伤创面侵入，引起人的诺卡氏菌病， 星状诺卡菌主要通过呼吸道引起人的原发性、化脓性肺部感染，可出现肺结核的症状。肺部 病灶可转移到皮下组织，形成脓肿、溃疡和多发性瘘管，也可扩散到其他器官。临床症状上 与肺结核、肺曲菌病、肺韦格氏肉芽肿相似，很容易误诊。
[0003] 近年来，星状诺卡氏菌病已不罕见，在有或无免疫异常的人群中均可发生。早期诊 断并早期治疗，可100%治愈。若诊断延误，病死率可达30~50%，因此作为确诊唯一依据的临 床细菌检查的正确与快速鉴定极为重要。目前，该菌属的鉴定金标准为PCR鉴定，但是PCR 检测设备要求和操作成本均较高，因此临床培养多用普通血琼脂培养板（BAP)培养。而星 状诺卡氏菌属于苛养菌，即对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以 生长。星状诺卡氏菌生长缓慢，而痰液标本中金黄色葡萄球菌、肺炎球链菌、其他放线菌等 病原菌在目前的培养基上比星状诺卡氏菌生长更快，很快就覆盖了培养基，星状诺卡菌无 法生长，阳性率低，使用传统方法需要96小时方可有阳性表现，1周左右方能较准确地做出 鉴定，结果延误时间，造成多处病灶转移，如转移至脑部极易造成死亡。
【发明内容】
[0004] 本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于痰液标本星状诺 卡氏菌生长的选择培养基。
[0005] 本发明解决其技术问题的技术方案是：一种用于痰液标本的星状诺卡氏菌选择培 养基，其特征在，配制1000ml培养基的配方中含有： 牛肝粉5. 0~15. 0g ; 麦芽浸粉2. 0~5. 0g ; 酵母浸出粉5. 0~10. 0g ; 氯化钠5. 0g ; 琼脂 15. 0 ~20. 0g ; 卟啉铁〇. 01~〇. 〇5g ; 乳酸钙0. 01~0. 05g ; 萘啶酮酸0. 01~0. 05g ; 毛子草酮〇? 001~〇? 〇〇5g ; 维生素I 0.01~0? lg ; 无菌脱纤维绵羊血80~100ml ; 蒸馏水加至l〇〇〇ml。
[0006] 上述培养基的制备方法为：称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂； 乳酸钙；毛子草酮混匀蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉铁；灭菌 萘啶酮酸；灭菌维生素K1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
[0007] 优化方案中，每1000ml培养基还含有酪蛋白磷酸肽0. 1~0. 5g。
[0008] 优化方案中，每1000ml培养基还含有天冬酰胺0.01~0.lg。
[0009] 优化方案中，每1000ml培养基还含有浓度200g/L的生地黄水煮液200~300ml。
[0010] 上述优化方案的培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取生生地黄加水煮沸30-60min，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得生地 黄水煮液； (2) 称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子草酮；天冬酰胺 混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟 啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸 馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0011] 其中：所述的牛肝粉、麦芽浸粉提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、氨基酸、 多肽、核苷酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为微生物提供均衡营养，这些物质 对促进星状诺卡氏菌的繁殖和生长都是很重要的因素；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂为 培养基的凝固剂；卟啉铁为营养剂，为星状诺卡氏菌繁殖生长提供必需的铁元素；乳酸钙 除了做营养增强剂外，还可以抑制革兰氏阳性菌生长；萘啶酮酸抑制革兰氏阴性菌的生长； 毛子草酮（2-Ethoxymethylene_3, 5-dihydroxy-y-pyrone)，实验室研宄表明毛子草酮可以 抑制金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、卡他球菌、白喉杆菌、变 形杆菌、肠炎杆菌等杂菌的生长，但该浓度下由于对诺卡氏菌属无抗菌抑菌作用，因此提高 了星状诺卡氏菌的分离率。通过实验将同一星状诺卡氏菌接种到2个BAP培养基上，其中 一个BAP培养基添加0. 1%灭菌维生素匕于37°C下培养，48小时后观察菌株，发现添加维生 素匕的BAP培养基有小的星状诺卡氏菌菌落，没有添加维生素k :的BAP培养基未发现星状 诺卡氏菌菌落，维生素匕促进细胞生长、分化，是星状诺卡氏菌的生长因子；无菌脱纤维绵 羊血提供能量环境；酪蛋白磷酸肽为激活剂，可以促进星状诺卡氏菌对铁元素、钙元素的摄 取；天冬酰胺为营养强化剂，促进星状诺卡氏菌对氨基酸的摄取；生地黄为玄参科植物生 地黄的新鲜或干燥块根，现代医学研宄表明，生地黄根茎中含有20多种苷类；8种糖类；20 余种氨基酸和20余种无机元素，生地黄水提液是良好的营养强化剂，并且有抑制金黄色葡 萄球菌生长的作用。
[0012] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、星状诺卡氏菌分离率高的特点。
【具体实施方式】
[0013] 以下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0014] 实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母 浸出粉5. Og ;氯化钠5. Og ;琼脂15. Og ;卟啉铁0.0 lg ;乳酸钙0. 05g ;萘啶酮酸0. 05g ;毛子 草酮0.0 Olg ;维生素& 0. lg ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法称取 牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子草酮混匀蒸馏水溶解，210°C， 灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊 血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0015] 实施例2,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉10. 0g ;麦芽浸粉5. 0g ;酵母 浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;卟啉铁0.0 lg ;乳酸钙0. 03g ;萘啶酮酸0. 03g ;毛子 草酮0. 003g ;维生素& 0.0 lg ;络蛋白磷酸肽0. lg ;无菌脱纤维绵羊血80ml ;蒸馏水加至 1000ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子草酮混 匀，蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌维 生素k 1;灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
[0016] 实施例3,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母 浸出粉10.〇g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;卟啉铁0. 02g;乳酸钙0. 05g ;萘啶酮酸0. 05 ;毛 子草酮0. 005g ;维生素& 0. 05g ;天冬酰胺0.0 lg ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;蒸馏水加至 1000ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子草酮； 天冬酰胺混匀，蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉铁；灭菌萘啶酮 酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容