一种适用于胸腔积液的巴西诺卡氏菌培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及检验微生物培养领域，具体涉及一种用于胸腔积液标本的巴西诺卡氏 菌选择培养基。
【背景技术】
[0002] 微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来 促进或抑制一定类型的生物体(如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将 所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。巴西诺卡氏菌（N.braziliensis)是需氧土 壤腐生菌，属于诺卡氏菌属，放线菌门，该菌广泛存在于空气、尘埃、土壤和家畜体表，巴西 诺卡氏菌毒性较强，致病力强，可引起暴发流行，多通过呼吸系统或原发感染，引起皮下组 织及肺、脑等部位的慢性化脓性感染。巴西诺卡氏菌通过损伤的皮肤侵犯皮下组织，直接污 染伤口，产生慢性化脓性肉芽肿，表现为肿胀、脓肿以及多发性瘘管，如足和腿部的所谓足 分枝菌病，临床可表现为急性、亚急性或慢性过程，症状上与肺结核、皮肤结核、放线菌病、 分枝菌病相似很容易误诊。
[0003] 近年来，巴西诺卡氏菌病已不罕见，在有或无免疫异常的人群中均可发生。巴西诺 卡氏菌生长缓慢、病程长，虽然发病率只有1%，但是死亡率却高达86%，早期诊断并时恰当 的治疗，可以100%治愈，因此作为确诊唯一依据的临床细菌检查的正确与快速鉴定极为重 要。目前，该菌属的鉴定金标准为PCR鉴定，但是PCR检测设备要求和操作成本均较高，因 此临床培养多用普通血琼脂培养板（BAP)培养。而巴西诺卡氏菌属于苛养菌，即对生长环 境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长。巴西诺卡氏菌初代培养生长缓 慢，胸腔积液标本在血琼脂培养基上很容易被白色假丝酵母菌，金黄色葡萄球菌等真菌、杂 菌覆盖，巴西诺卡菌无法生长，阳性率低，使用传统方法实验室培养48小时造成有60%巴西 诺卡氏菌漏检，培养96小时以上阳性表现，1周左右方能较准确地做出鉴定，生化鉴定需要 4~6周时间，结果延误时间，造成多处病灶转移，病死率升高。
【发明内容】
[0004] 本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于胸腔积液标本巴 西诺卡氏菌生长的选择培养基。
[0005] 本发明解决其技术问题的技术方案是：一种适用于胸腔积液的巴西诺卡氏菌培养 基，其特征在于，配制l〇〇〇ml培养基的配方中含有： 牛肝粉5. 0~15. 0g ; 麦芽浸粉2. 0~5. 0g ; 酵母浸出粉5. 0~10. 0g ; 氯化钠5. 0g ; 琼脂 15. 0 ~20. 0g ; 乳酸亚铁0. 01~0. 05g ; 葡萄糖酸锌妈0. 01~0. 〇5g ; 萘啶酮酸0. 01~0. 05g ; 毛子草酮〇? 001~〇? 005g ; 天冬酰胺0. 01~0. lg ; 无菌脱纤维绵羊血80~100ml ; 酪蛋白磷酸肽〇. 1~〇. 5g; 蒸馏水加至l〇〇〇ml。
[0006] 上述培养基的制备方法为：称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂； 乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀蒸馏水溶解，280°C，灭菌15min，冷却到 45°C，加入灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到 1000ml后分装。
[0007] 其中：所述的牛肝粉、麦芽浸粉提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、氨基酸、 多肽、核苷酸、多种维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为微生物提供均衡营养，这些 物质对促进巴西诺卡氏菌的繁殖和生长都是很重要的因素；氯化钠维持均衡的渗透压；琼 脂为培养基的凝固剂；乳酸亚铁为营养剂，为巴西诺卡氏菌繁殖生长提供必需的铁元素； 葡萄糖酸锌钙除了做营养增强剂外，还可以抑制革兰氏阳性菌生长；萘啶酮酸抑制革兰氏 阴性菌的生长；毛子草酮（2-Ethoxymethylene_3, 5-dihydroxy-y-pyrone)，实验室研宄表 明毛子草酮对金黄色葡萄球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、绿脓杆 菌、大肠杆菌、弗氏痢疾杆菌、志贺氏痢疾杆菌、脑膜炎双球菌、枯草杆菌、人性结核杆菌等 杂菌的生长有抑制作用，但该浓度下由于对诺卡氏菌属无抗菌抑菌作用，因此提高了巴西 诺卡氏菌的分离率。无菌脱纤维绵羊血提供能量环境；天冬酰胺为营养强化剂，促进巴西诺 卡氏菌对氨基酸的摄取，通过实验将同一巴西诺卡氏菌接种到2个BAP培养基上，其中一个 BAP培养基添加0. lg/L天冬酰胺，于37°C下培养，48小时后观察菌株，发现添加天冬酰胺 的BAP培养基有小的巴西诺卡氏菌菌落，没有添加天冬酰胺的BAP培养基未发现巴西诺卡 氏菌菌落，由此证实对于巴西诺卡氏菌这种苛养菌的加速生长至关重要；酪蛋白磷酸肽为 激活剂，可以促进巴西诺卡氏菌对铁元素、钙元素的摄取；生地黄为玄参科植物生地黄的新 鲜或干燥块根，现代医学研宄表明，生地黄根茎中含有20多种苷类；8种糖类；20余种氨基 酸和20余种无机元素，生地黄水提液是良好的营养强化剂，并且有抑制金黄色葡萄球菌生 长的作用。
[0008] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、巴西诺卡氏菌分离率高的特点。
【具体实施方式】
[0009] 以下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0010] 实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母 浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;乳酸亚铁0.0 lg ;葡萄糖酸锌钙0. 05g ;萘啶酮酸 0. 05g ;毛子草酮0. 001g ;天冬酰胺0. lg ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;蒸馏水加至1000ml。制 备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙；毛子 草酮；天冬酰胺混匀蒸馏水溶解，280°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌萘啶酮酸；无菌 脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
[0011] 实施例2,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉10.0 g ;麦芽浸粉5. Og ;酵母 浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;乳酸亚铁0.0 lg ;葡萄糖酸锌钙0. 03g ;萘啶酮酸 0. 02g ;毛子草酮0. 003g ;天冬酰胺0. 01g ;络蛋白磷酸肽0. lg ;无菌脱纤维绵羊血80ml ;蒸 馏水加至l〇〇〇ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸亚铁； 葡萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀，蒸馏水溶解，280°C，灭菌15min，冷却到45°C，加 入灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml 后分装。
[0012] 实施例3,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母 浸出粉10. 〇g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;乳酸亚铁0. 02g ;葡萄糖酸锌钙0. 05g ;萘啶酮酸 0. 05 ;毛子草酮0. 005g ;天冬酰胺0. 05g ;维生素Ki 0.0 lg ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;蒸馏 水加至l〇〇〇ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸亚铁；葡 萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀，蒸馏水溶解，280°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入 灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
[0013] 实施例4,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉5. 0g ;麦芽浸粉5. 0g ;酵母 浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;乳酸亚铁0. 0