3g ;乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙0. 03g ; 萘啶酮酸〇.〇lg ;毛子草酮〇.〇〇lg ;天冬酰胺〇. lg ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;200g / L生 地黄水提液200ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1)取40g生地黄加水煮沸30min，过 滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得生地黄水提液 200ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；葡萄糖酸锌钙；毛子草酮； 天冬酰胺混匀溶于步骤1所得的生地黄提取液中，280°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭 菌萘啶酮酸；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0014] 实施例5,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵 母浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;乳酸亚铁0. 05g ;葡萄糖酸锌钙0. 05g ;萘啶酮 酸0. 03g ;毛子草酮0. 003g ;天冬酰胺0. 05g ;络蛋白磷酸肽0. 5g ;维生素& 0. lg ;无菌脱 纤维绵羊血90ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯 化钠；琼脂；乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀，蒸馏水溶解，280°C，灭菌 15min，冷却到45°C，加入灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵 羊血混勾，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0015] 实施例6,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉5. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母 浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;乳酸亚铁0. 02g ;葡萄糖酸锌钙0. 03g ;萘啶酮酸 〇. 〇lg ;毛子草酮〇. 〇〇lg ;天冬酰胺〇. 〇5g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;浓 度200g/L的生地黄水提液250ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法制备方法：（1)取50g 生地黄加水煮沸45min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为 200g/L，得生地黄水提液250ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；葡 萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，280°C灭 菌15min，冷却到45°C，加入灭菌乳酸亚铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维 绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0016] 实施例7,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉10. 0g ;麦芽浸粉5. 0g ;酵母 浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;乳酸亚铁0. 05g ;葡萄糖酸锌钙0.0 lg ;萘啶酮酸 0. 03g ;毛子草酮0. 003g ;天冬酰胺0. lg ;维生素Ki 0. 05g ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;浓度 200g / L的生地黄水提液300ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1)取60g生地黄加水 煮沸60min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得 生地黄水提液300ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸亚铁；葡 萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，280°C灭 菌15min，冷却到45°C，加入灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸 馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0017] 实施例8,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉10. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母 浸出粉10.〇g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;乳酸亚铁0.0 lg ;葡萄糖酸锌钙0. 05g ;萘啶酮酸 0. 05g ;毛子草酮0. 005g ;天冬酰胺0. 01g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;维生素Ki 0. 05g ;无菌脱纤 维绵羊血l〇〇ml;浓度200g / L的生地黄水提液300ml;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1) 取60g生地黄加水煮沸60min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到 浓度为200g/L，得生地黄水提液300ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠； 琼脂；乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取 液中混匀，280°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K1;灭菌络蛋白 磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0018] 所述生地黄水提液浓度200g/L指的是每升含有生药200g。
[0019] 本发明所得巴西诺卡氏菌选择培养基用于胸腔积液标本具有检出可靠、巴西诺卡 氏菌分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。
[0020] 1对象与方法。
[0021] 1. 1培养基制备：实验组共设4组，分别为实施例1方案组；实施例2方案组、实施 例6方案组、实施例8方案组和对照组，对照组为普通血琼脂培养板（BAP)培养基，其配方 为每升含有牛肉粉5g、蛋白胨12g、琼脂15g、氯化钠5g、无菌脱纤维绵羊血100ml，灭菌蒸馏 水定容。
[0022] 1. 2胸腔积液采集培养方法：高度疑似巴西诺卡氏菌肺炎患者13例，取患者胸腔 积液，用接种环分区划线接种于实施例1方案组；实施例2方案组；实施例6方案组；实施 例8方案组和对照组培养基。37°C保温，保温箱培养48h、96h挑取目标菌落进行菌属鉴定。 各样本编号送检PCR做分子生物学鉴定。
[0023] 1. 3检出阳性标准：取出培养皿，观察培养基上菌落，呈白色，凸起，光滑，蜡样，表 面干燥，不易刮起的菌落生长情况，挑选目标菌涂片，革兰氏染色，显微镜镜检出阳性，依据 《临床微生物学诊断与图解》检验。最终结果金标准为PCR鉴定。
[0024] 2结果：13份高度疑似巴西诺卡氏菌肺炎患者胸腔积液标本经PCR最后鉴定为巴 西诺卡氏菌阳性的为12例。48h各组检出阳性、假阳性、阴性、假阴性菌株例数见下表，
【主权项】
1. 一种适用于胸腔积液的巴西诺卡氏菌培养基，其特征在于配制1000 ml培养基的配 方中含有： 牛肝粉5. 0~15. Og ; 麦芽浸粉2. 0~5. Og ; 酵母浸出粉5. 0~10.0 g ; 氯化钠5. Og ; 琼脂 15. 0 ~20.0 g ; 卟啉铁〇. 01~〇. 〇5g ; 乳酸钙0. 01~0. 05g ; 萘啶酮酸0. 01~0. 05g ; 毛子草酮〇? 001~〇? 005g ; 天冬酰胺0. 01~0.1 g ; 无菌脱纤维绵羊血80~100mL ; 酪蛋白磷酸肽〇. 1~〇. 5g; 蒸馏水加至1000ml。
【专利摘要】本发明公开了一种适用于胸腔积液的巴西诺卡氏菌培养基。属于检验微生物培养领域，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉、麦芽浸粉、酵母浸出粉、氯化钠、琼脂、乳酸亚铁、葡萄糖酸锌钙、萘啶酮酸、毛子草酮、天冬酰胺、无菌脱纤维绵羊血、酪蛋白磷酸肽，蒸馏水加至1000ml。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠，巴西诺卡氏菌分离率高的特点。
【IPC分类】C12Q1-04
【公开号】CN104846059
【申请号】CN201510302306
【发明人】孙霞
【申请人】孙霞
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月4日