一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本申请涉及药物化学技术领域，尤其涉及一种来源于海洋真菌的Azaphilones类 衍生化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 海洋中蕴含着丰富的微生物资源，其特殊复杂的海洋环境（高盐度、高压力、低 温、光照等）赋予海洋微生物特殊的代谢方式，代谢物的化学结构具有极大的复杂性和多 样性。尤其是海洋微生物中提取的含有特异性结构及生物活性强的新型化合物具有显著的 药理稳定性和强效性，并且毒副作用相对较小，对防治心脑血管病、癌症、艾滋病、老年病等 疑难病症具有独特效应，已成为开发新药、特药的主要方向之一。
[0003] 而且，海洋微生物具有繁殖快、易培养、代谢易于调控，菌种较易选育等优点，结合 发酵工艺可进行该药物化合物的工业化生产。
[0004] 因此，从海洋生物代谢物提取的新型药物化合物的开发研究意义重大，本发明提 供了一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物及其制备方法和应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种新型结构的来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化 合物，解决了现有技术中未存在该结构化合物的不足。
[0006] 本发明提供了一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物，其结构式如式 A所示：
[0007]
[0008] 另一方面，本发明还提供了一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的 制备方法，包括以下步骤：
[0009] S1、将海洋真菌菌核青霉Penicillium sclerotiorum M-22菌株接种于种子培养 基，摇床培养，得到种子培养液；
[0010] S2、将种子培养液接种于发酵液体培养基中，摇床培养得到发酵物；
[0011] S3、将发酵产物用甲醇浸泡提取，甲醇提取液浓缩后经乙酸乙酯萃取、浓缩、得到 浸膏，再经层析分离，得到结构式如式A的化合物。
[0012] 本发明还提供了一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物在制备抑菌 药物中的应用。
[0013] 本发明还提供了一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物在制备抗肿 瘤药物中的应用。
[0014] 本发明的一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物是从一种海洋真菌 中分离得到，海洋微生物种类繁多，数量庞大，从微生物提取化合物的方法简单，步骤简便， 使得Azaphi Iones类衍生化合物来源丰富，成本低廉；且该Azaphilones类衍生化合物抑菌 或抗癌效果良好，具有潜在的应用价值。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明的一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的核磁共振氢 谱图；
[0016] 图2为本发明的一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的核磁共振碳 谱图；
[0017] 图3为本发明的一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的核磁共振 HSQC二维谱图；
[0018] 图4为一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物对4种指示菌株病原菌 的抑制实验效果图：a :对金黄葡萄球菌的抑制作用；b :对克雷氏肺炎菌的抑制作用；c :对 铜绿假单孢杆菌的抑制作用；d :对大肠杆菌的抑制作用。
【具体实施方式】
[0019] 下面通过【具体实施方式】结合附图对本发明作进一步详细说明。
[0020] 在本发明中，一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物，从海口西海 岸沿海的漂浮腐叶生真菌菌核青霉P. sclerotiorum M-22中分离得到。该菌株已保 存在海南医学院热带病重点实验室中保藏，保藏日期为2012年11月28日，保藏号是 HNKTM-Z-F-022。保藏单位地址为：海南省海口市学院路海南医学院热带病重点实验室。经 鉴定，P. sclerotiorum M-22和专利号为CN201410072154. 1的中国发明专利已公开的的真 菌菌核青霉P. sclerotiorum. SJ 0167为同一种菌株。
[0021] -种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物，其结构式如式A所示：
[0022]
[0023] 本发明还提供了一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的制备方法， 包括以下步骤：
[0024] Sl、将海洋真菌菌核青霉P. sclerotiorum M-22菌株接种于种子培养基，摇床培 养，得到种子培养液；
[0025] S2、将种子培养液接种于发酵液体培养基中，摇床培养得到发酵物；
[0026] S3、将发酵产物用甲醇浸泡提取，甲醇提取液浓缩后经乙酸乙酯萃取、浓缩、得到 浸膏，再经层析分离，得到式（1)化合物。
[0027] 步骤Sl种子培养基组分为：葡萄糖8~12g，蛋白胨1. 5~2. 5g，酵母膏0. 8~ I. 5g，海盐20~30g，水0. 8~I. 2L。步骤Sl摇床培养条件为：温度22~28°C，转速100~ 150rmp，发酵时间2~6d。
[0028] 在上述制备方法中，步骤S2发酵培养的培养基的组分为：葡萄糖8~12g，蛋白胨 1. 5~2. 5g，酵母膏0. 8~I. 5g，海盐20~30g，水0. 8~I. 2L。步骤S2摇床培养条件为： 温度22~28°C，转速100~150rmp，发酵时间10~25d。
[0029] 实施例一：
[0030] -种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的具体制备步骤如下：
[0031] Sl :种子培养液的获得：
[0032] Sll配制种子培养基：将葡萄糖8g，蛋白胨I. 5g，酵母膏0. 8g，海盐20g，自来水 800mL配好溶液，分别装于8个250mL锥形瓶，在121°C、0.1 MPa的条件下灭菌20min。
[0033] S12种子培养液的制备：将海洋真菌菌核青霉P. sclerotiorum M-22菌株接种于 种子培养基，在22°C的温度下，置摇床上以150rpm的转速，培养6天，制得种子培养液。
[0034] S2 :发酵培养：将200mLSll制得的种子培养基装入500mL的锥形瓶中，经121°C、 0.1 MPa的条件下灭菌20min后，无菌操作将5mL步骤S12得到的种子培养液接种至装有发 酵培养基的锥形瓶中，共接种100瓶，在25°C的条件下，置于摇床上以IOOrpm的转速培养 10~25d制得发酵物。
[0035] S3 =Azaphilones类衍生化合物的提取分离：将步骤S2发酵好的发酵物以每瓶 IOOmL的甲醇，摇匀后放置Id(期间摇匀4~5次）后，用布氏漏斗过滤，滤液浓缩一半后 用1/2体积的乙酸乙酯萃取4次后浓缩，得到乙酸乙酯粗提浸膏；发酵菌丝加入等质量的 50%甲醇溶液提取4次后合并提取液，提取液浓缩一半后用1/2体积的乙酸乙酯萃取4次 后浓缩，得到乙酸乙酯粗提浸膏，合并2次获得的粗提物浸膏，累计得18. 9g粗提物浸膏。浸 膏用200~300目的硅胶进行层析分离，硅胶进行层析分离时分别用10:0、9:1、8 :2、7:3、 6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1 :9和0:10的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，将8:2、7:3和6:4的石 油醚-乙酸乙酯梯度洗脱液合并，用体积比为2:1:1的石油醚-二氯甲仿-甲醇为洗脱液 进一步洗脱，再经过制备型HPLC，用体积比为7:3的甲醇-水为洗脱液纯化，即得21. 3mg Azaphilones类衍生化合物。分离提取的Azaphilones类衍生化合物为黄色粉末，对其进行 核磁共振分析鉴定的谱图如图1~3所示。
[0036] Azaphilones类衍生化合物结构测试的理化性质数据如下：1H-NMR(溶剂为氘代 氯仿）和13C-NMR(溶剂为氘代甲醇）具体数据见表1。
[0037] 表 1
[0038]
[0039] 从核磁共振的结构分析检测结果可以确定Azaphilones类衍生化合物的分子式 为C mH29O7CI,结构式如式A所示：
[0040]
[0041] 实施例二：
[0042] -种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物的具体制备步骤如下：
[0043] Sl :种子培养液的获得：
[0044] Sll配制种子培养基：将葡萄糖12g，蛋白胨2. 5g，酵母膏I. 5g，海盐30g，自来水 1200mL配好溶液，分别装于8个250mL锥形瓶，在121°C、0.1 MPa的条件下灭菌20min。
[0045] S12种子培养液的制备：将海洋真菌菌核青霉Penicillium sclerotiorum M-22 菌株接种于种子培养基，在28°C的温度下，置摇床上以150rpm的转速，培养2天，制得种子 培养液。
[0046] S2 :发酵培养：将200mLSll制得的种子培养基装入500mL的锥形瓶中，经121°C、 0.1 MPa的条件下灭菌20min后，无菌操作将5mL步骤S12得到的种子培养液接种至装有发 酵培养基的锥形瓶中，共接种100瓶，在25°C的条件下，置于摇床上以150rpm的转速培养 IOd制得发酵物。
[0047] S3 =Azaphilones类衍生化合物的提取分离：将步骤S2发酵好的每瓶发酵物加入 IOOmL的甲醇，摇匀后放置Id(期间摇匀4~5次）后，用布氏漏斗过滤，滤液浓缩一半后 用1/2体积的乙酸乙酯萃取4次后浓缩，得到乙酸乙酯粗提浸膏；发酵菌丝加入等质量的 50%甲醇溶液提取4次后合并提取液，提取液浓缩一半后用1/2体积的乙酸乙酯萃取4次 后浓缩，得到乙酸乙酯粗提浸膏，合并2次获得的粗提物浸膏，累计得18. 9g粗提物浸膏。浸 膏用200~300目的硅胶进行层析分离，硅胶进行层析分离时分别用10:0、9:1、8 :2、7:3、 6:4、5:5、4:6、3 :7、2:8、1:9和0:10的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，将8 :2、7:3和6:4的石 油醚-乙酸乙酯梯度洗脱液合并，用体积比为2:1:1的石油醚-二氯甲仿-甲醇为洗脱液 进一步洗脱，再经过制备型HPLC，用体积比为7:3的甲醇-水为洗脱液纯化，即得21. 3mg Azaphilones类衍生化合物。分离提取的Azaphilones类衍生化合物。经核磁谱图分析鉴 定，本实例所制备的Azaphilones类衍生化合物结构式与实施例1所制备的Azaphilones 类衍生化合物相同，如式