胃癌预后新型分子标志物lncRNA-AB007962的检测及用图
【技术领域】：
[0001] 本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及胃癌根治术后预后领域，具体而言，本 发明涉及一种胃癌预后新型分子标志物ln CRNA-AB007962的用途及其制备的检测试剂盒。
【背景技术】：
[0002] 胃癌是全世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，在我国，胃癌的发病率及致死率均 高居前列，因其早期症状的不典型，造成了明确诊断时，多已到达了进展期。胃癌患者根据 不同原则可以分为多种类型，例如：根据组织分化程度分型可以分为高、中、低分化型胃癌， 此外，Lauren分型作为临床上经常应用的分类方法，可以将胃癌患者分为肠型、弥漫型和混 合型。不同分型患者的生存期存在显著差异，能为患者预后起到一定预示作用。但是，目前 对胃癌的预后判断没有明确的参考标准，对不同分型的胃癌也没有特异性的预后指标，远 远不能满足对患者个体化的预后评判的需求。因此，明确胃癌患者或不同分型胃癌患者的 预后指标，成为胃肠肿瘤外科领域亟待解决的重要课题。
[0003] LncRNA是一类转录本长度大于200个核苷酸的非编码RNA，它具有多种生物学功 能，在染色质修饰、转录、翻译、剪切、表观遗传学调控等多种生物过程发挥重要作用。研究 表明，IncRNA在前列腺癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌等多种肿瘤组织中呈现异常表达，并 在肿瘤发生、发展过程中起促癌或抑癌作用。近年来，IncRNA成为研究热点，并在临床诊断、 化疗敏感性和预后评价等方面显示出重要的应用价值，逐渐受到研究者的重视。
【发明内容】
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[0004] 发明目的：
[0005] 本发明提供一种胃癌新型分子标志物长链非编码lncrna_AB007962的检测试剂 盒，解决了为Lauren分型为肠型胃癌患者的预后生存期评价的问题。
[0006] 技术方案：
[0007] 在胃癌组织中低表达的分子标志物lncRNA-AB007962,其特征在于： lncRNA-AB007962 的核酸序列为 SEQ ID No. 1。
[0008] 上述分子标志物lncRNA-AB007962的用途，其特征在于：用于制备评估Lauren分 型为肠型的胃癌患者预后的试剂盒。
[0009] 试剂盒采用实时荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：
[0010] (1)癌与癌旁组织提取总RNA试剂；
[0011] ⑵总RNA反转录为cDNA试剂；
[0012] (3)定量PCR检测表达试剂。
[0013] 该试剂盒包括：
[0014] (1)癌与癌旁组织提取总RNA试剂：TRIzoL、三氯甲烷、异丙醇、75%乙醇、无酶 水；
[0015] ⑵总 RNA 反转录为 cDNA 试剂：gDNA Eraser、f5X gDNA Eraser Buffer、 PrimeScript RT Enzyme Mix I、5X PrimerScript Buffer 2、RT Primer Mix、RNase Free dH20 ；
[0016] (3)定量PCR检测表达试剂：lncRNA-AB007962实时荧光定量PCR特异性引物、 GAPDH内参实时荧光定量PCR特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。
[0017] 定量PCR检测试剂中包含用于检测lncRNA-AB007962表达的引物序列，引物序列 为SEQ ID No. 2,以及作为内参的基因 GAPDH表达的引物序列，引物序列为SEQ ID No. 3。
[0018] 所用定量PCR检测表达试剂中的引物序列适用于SYBR Green、TaqMan探针、分子 信标、双杂交探针、复合探针的检测。
[0019] 优点及效果：
[0020] 本发明提出了一种胃癌新型分子标志物长链非编码lncRNA_AB007962及其检测 试剂盒，具有如下优点：
[0021] 本发明提供一种在胃癌组织中低表达的长链非编码RNA-AB007962分子标志物及 应用方法，该基因被命名为lncRNA-AB007962,长度为5053个核苷酸，定位于1号染色体 149627309-149651107之间，可应用于Lauren分型为肠型的胃癌患者术后早期的预后判 断，该IncRNA序列详见SEQ N0:1。对人胃癌与配对癌旁正常组织样本中通过实时荧光定 量PCR验证，lncRNA-AB007962在胃癌组织中明显低表达（p〈0. 05)，与胃癌患者的肿瘤最大 径显著相关（P = 0.033)，与Lauren分型为肠型的胃癌患者预后生存时间显著相关（p = 0. 006)，lncRNA-AB007962高表达患者比低表达患者具有更久的生存期。
[0022] 本发明可以检测lncRNA-AB00762在胃癌患者中的表达水平及情况，该荧光定量 PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高、定量快速准 确、稳定性好。且为Lauren分型为肠型的胃癌患者的预后生存期评价和预测提供了强有力 的分子生物学依据，具有深远的临床意义。
【附图说明】：
[0023] 图1为实时荧光定量PCR分析lncRNA-AB007962在96对胃癌组织与配对癌旁正 常胃组织的表达差异情况（2 Aet值）。
[0024] 图2为96例胃癌患者组织中LncRNA-AB007962的表达情况（-Δ Δ Ct值）。
[0025] 图3为Kaplan-Meier生存曲线分析lncRNA-AB007962与28例Lauren分型为肠 型的胃癌患者预后的关系。
【具体实施方式】：
[0026] 下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步的说明：
[0027] 本发明提供一种在胃癌组织中低表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA， lncRNA)AB007962的分子标志物及其试剂盒的应用方法，lncRNA-AB007962长度为5053个 核苷酸，定位于1号染色体149627309-149651107之间，可应用于Lauren分型为肠型的胃 癌患者术后早期的预后判断，该IncRNA序列详见SEQ NO: 1。
[0028] 在96对人胃癌与配对癌旁正常组织样本中通过实时荧光定量PCR验证，通过SPSS 17. 0 (SPSS Inc，Chicago, IL，USA)软件进行数据分析发现：lncRNA-AB007962在胃癌组织 中明显低表达（p〈〇. 05)。非参数检验（Mann-Whitney U及Kruskall-Wallis)分析发现 lncRNA_AB007962与胃癌患者的肿瘤最大径显著相关（p = 0· 033)，Kaplan-Meier生存曲 线分析发现lncRNA-AB007962与Lauren分型为肠型的28例胃癌患者的预后生存时间显著 相关（P = 〇. 006)，lncRNA-AB007962高表达患者比低表达患者具有更久的生存期（详见表 1)。由此可见，lncRNA-AB007962异常表达与胃癌进展及预后密切相关，在此基础上，本发 明提供了一种高性价比，高应用性的针对胃癌Lauren分型为肠型患者的预后检测试剂盒。
[0029] 在胃癌组织中低表达的分子标志物lncRNA-AB007962,其特征在于： lncRNA-AB007962 的核酸序列为 SEQ ID No. 1。
[0030] 用于制备评估Lauren分型为肠型的胃癌患者预后的试剂盒。
[0031] 胃癌新型分子标志物lncRNA-AB007962,其异常表达与胃癌进展及预后密切相关， 可用于制备评估胃癌预后的试剂盒，在此基础上，本发明提供了一种高性价比，高应用性的 针对胃癌Lauren分型为肠型患者的预后检测试剂盒。
[0032] 试剂盒采用实时荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：
[0033] (1)癌与癌旁组织提取总RNA试剂；
[0034] (2)总RNA反转录为cDNA试剂；
[0035] (3)定量PCR检测表达试剂。
[0036] 该试剂盒包括：
[0037] (1)癌与癌旁组织提取总RNA试剂：TRIzoL、三氯甲烷、异丙醇、75%乙醇、无酶 水；
[0038] ⑵总 RNA 反转录为 cDNA 试剂：gDNA Eraser、f5X gDNA Eraser Buffer、 PrimeScript RT Enzyme Mix I、5X PrimerScript Buffer 2、RT Primer Mix、RNase Free dH20 ；
[0039] (3)定量PCR检测表达试剂：lncRNA-AB007962实时荧光定量PCR特异性引物、 GAPDH内参实时荧光定量PCR特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。
[0040] 定量PCR检测表达试剂包含用于检测lncRNA-AB00