一种从卵叶蜘蛛抱蛋植物中提取分离的活性成分及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用卵叶蜘蛛抱蛋djOit/isiraBaill.)(保藏编号是：No. 20140316-1)生产简单植物源氧杂蒽酮类化合物及新型苯骈香豆素类化合物的方法；本发 明还涉及此两类化合物在制备抗菌制剂中的用途，属于药学领域。
【背景技术】
[0002] 卵叶蜘蛛抱蛋(学名Baill.)为天门冬科蜘蛛抱蛋属植物， 根状茎较粗，近圆柱形。叶2-3枚簇生，卵圆状披针形至卵形；叶柄明显，坚硬。总花梗常呈 簇抽出，纤细；苞片3-5枚，卵形；花被坛状，外面有紫色细点，内面深紫色；裂片卵形，较短； 雄蕊6枚，几无花丝；子房短，花柱粗短，无关节；柱头大，圆形，呈盾状膨大。浆果球形。花 期8-9月。产云南和关西等西南部，也分布于越南。生于深山密林中、山谷、溪边湿润处。卵 叶蜘蛛抱蛋的药理活性及其活性成分的研究鲜有报道，现有研究仅从其中分离得到其中甾 体皂皂苷类成分。而其民间广泛药用其根茎，称其活血化瘀，解毒止痛效果良好，主治肾亏， 腰痛，风湿性疼痛，机体跌打损伤等，但其活性成分并无系统研究。
[0003] 本发明人首次从中分离出结构新颖的苯骈香豆素类化合物和简单植物源氧杂蒽 酮类化合物。研究发现所示含苯骈香豆素类化合物和植物源氧杂蒽酮类化合物具有良好的 抗菌活性，目前尚未见对新型苯骈香豆素化合物的结构及其抗菌活性的报道，也未见植物 源氧杂蒽酮类化合物抗革兰氏阴性菌活性的报道，因此市场上也尚未有与此有关的药物。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在提供一种结构独特的具有良好抗菌活性作用的新化合物，其结构式如 下： 式I
其结构特征是：&为氨基、氢、羟基、Cii。烷氧基、Cii。酰氧基或Cii。酰胺基；R2为甲 基；R3为氨基、氢、羟基、Cii。烷氧基、C1i。酰氧基或cii。酰胺基。
[0005] 本发明优选的式I化合物为札为羟基，R2为甲基，R3为羟基。
[0006] 本发明旨在还提供一种简单植物源氧杂蒽酮类化合物，所述化合物具有良好抗菌 活性作用，其结构式如下： 式II
其结构特征是：&为氨基、氢、羟基、Cii。烷氧基、Cii。酰氧基或Cii。酰胺基；R2为甲 基；R3为氨基、氢、羟基、Qi。烷氧基、Cii。酰氧基或Cii。酰胺基。
[0007] 本发明优选的式II化合物为札为羟基，R2为甲基，R3为羟基。
[0008] 本发明所述的Qi。烷氧基优选Ci6烷氧基，更优选甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧 基，异丙氧基，戊氧基，己氧基等; 本发明所述的Qi。酰氧基优选ci6酰氧基，更优选甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰 氧基，异丙酰氧基，戊酰氧基，己酰氧基等； 本发明所述的Qi。酰胺基优选ci6酰胺基，更优选甲酰胺基、乙酰胺基、丙酰胺基、丁酰 胺基，异丙酰胺基，戊酰胺基，己酰胺基等； 本发明式I中的部分化合物可通过以下方法制备得到：
，其中R为氨基、Cii。烷氧基、Cii。酰氧基或Cii。酰胺基 本发明式II中的部分化合物可通过以下方法制备得到：
，其中R为氨基、Qi。烷氧基、Cii。酰氧基或Cii。酰胺基 本发明式I和II中的部分化合物可通过提取蜘蛛抱蛋属植物根茎来获得含活性成分 化合物的提取物，然后从提取物中采用硅胶柱层析、制备薄层层析等方法分离纯化得到。
[0009] 本发明式I和II化合物优选以下方法制备得到：（1)选取卵叶蜘蛛抱蛋的根茎 为原料，使用乙醇(优选70%)进行超声提取，过滤，滤去药渣，滤液合并减压浓缩至浸膏，无 醇味；然后把浓缩物分散于水中，用石油醚(沸程30~60°C)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次 萃取，萃取后分别减压浓缩，得各溶剂的浸膏；（2)选取卵叶蜘蛛抱蛋氯仿浸膏为样品，经 硅胶柱层析，并使用氯仿和甲醇的混合溶剂为洗脱溶剂，以薄层色谱为检测手段，洗脱液浓 缩、合并得Fr.A1~Fr.A5五个部分；（3)选取Fr.A2部分为样品，并使用硅胶拌样，进行硅 胶柱层析，用氯仿：甲醇（300:1~10:1)系统进行梯度洗脱，所得分离样品分为Fr.A2-1、 Fr.A2-2以及Fr.A2-3三部分；（4)选取Fr.A2-2为样品，经硅胶柱层析，石油醚：乙酸乙酯 (200:1~3:1)为洗脱剂进行纯化，得到化合物II(卵叶香豆素甲）；（5)选取Fr.A2-1为 样品，经硅胶柱层析再次纯化，得到化合物I卵叶氧杂蒽酮甲。本发明的下述实例中列举了 利用卵叶蜘蛛抱蛋djOit/isira(j^icaBaill.)(保藏编号是：No. 20140316-1)根莖，制 备发明式化合物I和II的实例。
【附图说明】
[0010] 图1卵叶蜘蛛抱蛋根极性部位提取流程。
[0011] 图 2 化合物I的 2D-NMR数据Ch:600MHz;13C:150MHz)。
[0012] 图 3 化合物II的 2D-NMR数据CH:600MHz;13C:150MHz)。
[0013] 图4卵叶香豆素甲、卵叶氧杂蒽酮甲及其衍生物的对革兰氏阳性菌的最低抑菌浓 度（MIC值）。
[0014] 图5卵叶香豆素甲、卵叶氧杂蒽酮甲及其衍生物对革兰氏阴性菌的最低抑菌浓度 (MIC值）。
[0015] 图6卵叶香豆素甲、卵叶氧杂蒽酮甲及其衍生物的最小杀菌浓度（MBC值)。 具体实施方案： 实施例1:在如下的实施例中所指的化合物I的结构式： 化合物：
1浸膏的制备 卵叶蜘蛛抱蛋根茎干燥切片5. 55Kg，70%乙醇超声提取3次(质量体积比为1 :30)，每 次超声1小时。滤去药渣，滤液合并减压浓缩至浸膏，无醇味；然后把浓缩物分散于水中，用 石油醚(沸程30~60°C)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次分别萃取3次，分别50°C减压浓缩，得 各部分浸膏。合并氯仿部位浓缩干燥得21. 14g，乙酸乙酯部位13.43g(见图1)。 2化合物的分离精制 卵叶蜘蛛抱蛋氯仿部分21. 14g，经硅胶柱层析（硅胶H，200~300目，420g，氯仿：甲 醇500:1~10:1洗脱），薄层色谱（TLC)检测，洗脱液浓缩并合并得Fr.A1~Fr.A5五个部 分。 Fr.A2部分为浅黄色粉末状，约5. 4g，以硅胶（100-200目）拌样，风干进行H硅胶柱 层析，用氯仿：甲醇（300:1~10:1)系统进行梯度洗脱，每75ml接一瓶。得到三个部分， Fr.A2-2经H硅胶柱层析，石油醚：乙酸乙酯（200:1~3:1)体系洗脱，得到化合物2 (卵叶 香豆素甲），约12mg。 白色无定形粉末，分子式C14H1Q04，熔点182~183°C，旋光度-1.658 (cl.00，MeOH)，IR(KBr)cmS3468，1638 ;HR-ESI-MS餘々：实测值 241. 0500[M-H]+;计算为C14H904， 241. 0477NMRand13CNMR(400Hz，CDC13):见图 2〇 实施例2:在如下的实施例中所指的化合物II的结构式： 化合物II 1浸膏的制备
同实施例1。 2化合物的分离精制 卵叶蜘蛛抱蛋氯仿部分21. 14g，经硅胶柱层析（硅胶H，200~300目，420g，氯仿：甲 醇500:1~10:1洗脱），薄层色谱（TLC)检测，洗脱液浓缩并合并得Fr.A1~Fr.A5五个部 分。 Fr.A2部分为浅黄色粉末状，约5. 4g，以硅胶（100-200目）拌样，风干进行H硅胶柱 层析，用氯仿：甲醇（300:1~10:1)系统进行梯度洗脱，每75ml接一瓶。得到三个部分， Fr.A2-1再次经H硅胶柱层析，TLC检识其纯度后，得到化合物I卵叶氧杂蒽酮甲，约35mg。 黄色无定形粉末，分子式C16HnF06，熔点149~150 °C，旋光度-0.1773 (cl. 00，MeOH),IR(KBr)cmS3422, 1602, 1477 ；ESI-MSm/z(%) ：318[M+H+] (100)； -已51-]\^餘々：实测值 318.3004 []\1+扣+;计算为(：16111丨06,3 1 8 . 29 3 3。111匪1?311(11圮匪1? (600Hz，CDC13):见图 3。 实施例3:卵叶香豆素甲乙酰化衍生物的合成
将卵叶香ii素甲I(10mg, 0. 03mmol)和DMAP(3g, 0. 02mmol)置于 25ml圆底烧 瓶中，用5mlTHF溶解后，滴加两滴醋酐(约10mg，0.06mmol)，于40°C反应5h，减压