Dna的硅珠直扩检验方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种DNA的检验方法，具体地说是一种在案件中微量及常量生物检材的DNA的硅珠直扩检验方法。
【背景技术】
[0002]随着DNA检验的广泛运用，大批量的生物检材(微量检材和常用量检材)摆在面前，如何高效检验成为一个急需解决的问题；传统检验方法如CHELEX —100法、硅珠法、磁珠法等一般只能针对某一类检材，检验中只能采用分类检验和单管检验的方法，方法适应性差，费工费时，检验速度低，特别是对接触性汗斑类微量生物检材的检验灵敏度差，检出率低。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种不但适应范围广、检验速度快而且检验灵敏度高、检出率高的DNA的硅珠直扩检验方法。
[0004]为了解决上述技术问题，本发明的DNA的硅珠直扩检验方法，包括以下步骤:
步骤A:将包含2-3纳克DNA含量的检材放入孔板中，采用硅珠法提取DNA，DNA提取过程中，孔板的每孔中加入裂解液160-180微升，1摩尔浓度的DTT10-20微升，使DNA释放到液体中后，去除载体，保留液体；
步骤B:另取一块PCR扩增板，PCR扩增板的每孔中加入5-6微升硅珠液体，将上一步骤获得的液体移到PCR扩增板中，并使硅珠悬浮；
步骤C:将PCR扩增板盖上胶盖，放置于4摄氏度的温度环境中30分钟以上；取出PCR扩增板用平板离心机进行离心处理，使硅珠附着在PCR扩增板的板孔内；取出后将PCR扩增板翻转过来，轻甩两次以上，将液体甩弃，硅珠保留在管底；
步骤D:使用体积浓度70%的冷乙醇清洗硅珠，去除杂质，再干燥硅珠；
步骤E:采用常规扩增液和扩增方法进行扩增，每孔中加入扩增混合液，同时用移液器吹打使娃珠悬浮；
步骤F:将PCR扩增板盖上胶盖，按常规方法做PCR扩增；
步骤G:扩增结束后，PCR扩增板的每孔中加入纯水，放入平板离心机中瞬时离心，每孔取适量产物上机检测。
[0005]所述步骤A中，将低于3纳克的微量生物检材直接全部放入到孔板中。
[0006]所述步骤B中，移液时PCR扩增板的每孔吹找4-5次。
[0007]所述步骤C中，用平板离心机进行离心处理过程中，用平板离心机3000转离心3分钟。
[0008]所述步骤D中，用乙醇清洗硅珠过程中，每孔用70%负20摄氏度的乙醇200微升洗硅珠2次。
[0009]采用上述方法后，与传统方法对案件现场检材的实验室检验对比发现:血、唾液斑等常量检材二者的检出率均在95%以上，与传统方法无显著差别；对于现场遗留的作案工具、物品等检材，检出率由来50%提高到70%左右；赤手足汗斑印迹和手套印迹等微量检材，检出率由来12%提高到26%左右，效果成为突出；因此不但对各类检材的适应性好，检验省时省力，而且将案件现场微量生物检材的检出率提高2倍以上，有很高的实际运用价值。
【具体实施方式】
[0010]下面结合【具体实施方式】，对本发明的DNA的硅珠直扩检验方法作进一步详细说明。
[0011]本发明的DNA的硅珠直扩检验方法，包括以下步骤:
步骤A:将适量检材放入孔板中，如是血、唾液斑等常量检材则剪取2-3纳克左右DNA含量的检材(直径为0.12厘米圆形滤纸血斑DNA含量约1个纳克)，如为接触性汗斑等低于3纳的微量生物检材则可取全部；采用硅珠法提取DNA，DNA提取过程中，孔板的每孔中加入裂解液160-180微升，1摩尔浓度的DTT10-20微升，使DNA释放到液体中后，去除载体，保留液体；
步骤B:另取一块PCR扩增板，PCR扩增板的每孔中加入4-5微升硅珠液体，将上一步骤获得的液体移到PCR扩增板中，移液时PCR扩增板的每孔吹找4-5次，使硅珠悬浮；
步骤C:将PCR扩增板盖上胶盖，放置于4摄氏度的冰箱中30分钟以上；从冰箱中取出PCR扩增板用平板离心机进行离心处理，使硅珠附着在PCR扩增板的板孔内；取出后将PCR扩增板翻转过来，轻甩两次以上，将液体甩弃，硅珠保留在管底；
步骤D:用乙醇清洗硅珠，最后一次甩弃乙醇，硅珠在99摄氏度的温度下用4分钟烤干;
其中，用乙醇清洗硅珠过程中，每孔用70%负20摄氏度的乙醇200微升洗硅珠2次。
[0012]步骤E:采用常规扩增液和扩增方法进行扩增，例如采用ID-PLUS试剂扩增，扩增混合液按引物:dNTP:纯水1 '2:2配制；每孔中加入10微升扩增混合液，每孔中加入扩增液时，用移液器吹打使硅珠悬浮；
步骤F:将PCR扩增板盖上胶盖，按11微升体系常规做PCR扩增；
步骤G:扩增结束后，PCR扩增板的每孔中加入10微升纯水，放入平板离心机中瞬时离心，每孔取2微升产物上机检测。
[0013]本发明中的以上步骤均可以用自动化工作平台完成。
【主权项】
1.一种DNA的硅珠直扩检验方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤A:将包含低于3纳克DNA含量的检材放入孔板中，采用硅珠法提取DNA，DNA提取过程中，孔板的每孔中加入裂解液160-180微升，1摩尔浓度的DTT10-20微升，使DNA释放到液体中后，去除载体，保留液体； 步骤B:另取一块PCR扩增板，PCR扩增板的每孔中加入5-6微升硅珠液体，将上一步骤获得的液体移到PCR扩增板中，并使硅珠悬浮； 步骤C:将PCR扩增板盖上胶盖，放置于4摄氏度的温度环境中30分钟以上；取出PCR扩增板用平板离心机进行离心处理，使硅珠附着在PCR扩增板的板孔内；取出后将PCR扩增板翻转过来，轻甩两次以上，将液体甩弃，硅珠保留在管底； 步骤D:使用冷乙醇清洗硅珠，去除杂质，再干燥硅珠； 步骤E:采用常规扩增液和扩增方法进行扩增，每孔中加入扩增混合液，同时用移液器吹打使娃珠悬浮； 步骤F:将PCR扩增板盖上胶盖，按常规方法做PCR扩增； 步骤G:扩增结束后，PCR扩增板的每孔中加入纯水，放入平板离心机中瞬时离心，每孔取适量产物上机检测。2.按照权利要求1所述的DNA的硅珠直扩检验方法，其特征在于:所述步骤A中，将低于3纳克的微量生物检材直接全部放入到孔板中。3.按照权利要求1所述的DNA的硅珠直扩检验方法，其特征在于:所述步骤B中，移液时PCR扩增板的每孔吹找4-5次。4.按照权利要求1所述的DNA的硅珠直扩检验方法，其特征在于:所述步骤C中，用平板离心机进行离心处理过程中，用平板离心机3000转离心3分钟。5.按照权利要求1所述的DNA的硅珠直扩检验方法，其特征在于:所述步骤D中，用乙醇清洗硅珠过程中，每孔用70%负20摄氏度的乙醇200微升洗硅珠2次。
【专利摘要】本发明公开了一种在案件中微量及常量生物检材的DNA的硅珠直扩检验方法。它包括以下步骤：步骤A：采用硅珠法提取DNA，使DNA释放到液体中后，去除载体，保留液体；步骤B：将上一步骤获得的液体移到PCR扩增板中，使硅珠悬浮；步骤C：使硅珠附着在PCR扩增板的板孔内；硅珠保留在管底；步骤D：用乙醇清洗硅珠；步骤E：采用ID-PLUS试剂扩增；步骤F：按11微升体系常规做PCR扩增；步骤G：扩增结束后，加入纯水后取产物上机检测。采用上述方法后，不但对各类检材的适应性好，检验省时省力，而且将案件现场微量生物检材的检出率提高2倍以上，有很高的实际运用价值。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105256022
【申请号】CN201510668520
【发明人】毛坤云
【申请人】毛坤云
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月13日