1-(乙基-Leu-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯、制备、结构和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及1-(己基-Leu-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋，涉及它们的制备方 法，涉及它们的纳米结构，涉及它们对肿瘤细胞增殖的抑制活性，涉及它们抑制S180小鼠 肿瘤生长的活性。结果表明本发明的2种1-(N-己基-Leu-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予 醋具有优秀的抗肿瘤活性。本发明属于生物医药领域。 技术背景
[0002] 恶性肿瘤严重威胁人类的健康。在临床肿瘤治疗中，化疗仍然占有最重要的地位。 可是，肿瘤多药耐药和交叉耐药使得付出巨大劳动发明的抗肿瘤药物很快丧失疗效。于是， 发明具有抗肿瘤和逆转肿瘤耐药的药物一直是抗肿瘤药物研究的前沿。
[0003] 在抗肿瘤药物研究中，申请人曾经用氨基酸予醋修饰四氨-目-巧晰-3-駿酸、 目-巧晰-3-駿酸及1-位取代的目-巧晰-3-駿酸，包括1-位取代的四氨-目-巧晰-3-駿 酸或1-位取代的目-巧晰-3-駿酸制备高效的抗肿瘤化合物。其中下面结构的1-(己 基-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋在8. 9ymol/kg剂量下显示了明确的抗肿瘤作用。
[0004]
[0005] 按照与肿瘤细胞DNA相互作用的结构要求，发明人相信在1-(己 基-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋的己基-AA-OBzl之间插入kLeu残基可W对抗肿瘤 作用产生正面影响。在送种思路的引导下，发明人提出了本发明。
[0006] 发明的内容
[0007] 本发明的第一个内容是提供1-(己基-Leu-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋，AA 为L-Leu,L-Ala,L-Ile,L-Met,L-Tyr,L-Trp,L-Val,Gly,L-Asp,L-Ser,L-Thr,L-Gln, kAsn，kArg(N〇2)和kLys残基。
[0008]
[0009] 本发明的第二个
【发明内容】
是提供制备1-(己基-Leu-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿 酸予醋的制备方法（AA为kLeu，kAla，klle，kMet，kTyr，khp，kVal，Gly,kAsp, kSer，kT虹，kGln，kAsn，kArg(N〇2)和kLys残基），该方法包括：
[0010] 1化-色氨酸予醋在H氣醋酸的催化下与1，1，3,3-四甲氧基丙焼缩合，得到 (3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋；
[0011] 。将（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋用高儘 酸钟氧化，生成1- (2, 2-二甲氧己基）-3-巧晰駿酸予醋；
[0012] 3)在盐酸，冰醋酸和水体系中1-(2,2-二甲氧己基）-3-目-巧晰-3-駿酸予醋转 化为1-(2-氧代己基）-3-巧晰駿酸予醋；
[0013] 4)将Boc-Leu与L-Leu-OBz1，L-A1a_0Bz1，L-11e_0Bz1，L^-Met-OBz1， ^Tyr-OBzl, ^Trp-OBzl, ^Val-OBzl,Gly-OBzI，^Asp-OBzI，^Ser-OBzl, ^Hir-OBzl, L-Gln-OBzl，L-Asn-OBzl，L-Arg(N02)-OBzl和L-LysL^-OBzl转化为Boc-Leu-Leu-OBzl， Boc-Leu-Ala-OBzl,Boc-Leu-IIe-OBzI,Boc-Leu-Met-OBzI,Boc-Leu-Tyr-OBzI, Boc-Leu-Trp-OBzl，Boc-Leu-Val-OBzl，Boc-Leu-Gly-OBzl，Boc-Leu-Asp-OBzl， Boc-Leu-Ser-OBzl,Boc-Leu-Thr-OBzI,Boc-Leu-Gln-OBzI,Boc-Leu-Asn-OBzI, Boc-Leu-Arg(N02)-OBzI和Boc-Leu-Lys-OBzl;
[0014]巧在氯化氨-乙酸乙醋溶液中Boc-Leu-Leu-OBzl，Boc-Leu-Ala-OBzl， Boc-Leu-Ile-OBzl，Boc-Leu-Met-OBzl，Boc-Leu-Tyr-OBzl，Boc-Leu-Trp-OBzl， Boc-Leu-Val-OBzl, Boc-Leu-Gly-OBzI, Boc-Leu-Asp-OBzI, Boc-Leu-Ser-OBzI, Boc-Leu-Ilir-OBzl, Boc-Leu-Gln-OBzl，Boc-Leu-Asn-OBzl，Boc-Leu-Arg(N02)-OBzl和 Boc-Leu-Lys-OBzl转化为Leu-Leu-OBzl，Leu-Ala-OBzl，Leu-Ile-OBzl，Leu-Met-OBzl， Leu-Tyr-OBzl，Leu-Trp-OBzl，Leu-Val-OBzl，Leu-Gly-OBzl，Leu-Asp-OBzl， Leu-Ser-OBzl，Leu-Thr-OBzl，Leu-Gln-OBzl，Leu-Asn-OBzl，Leu-Arg(N〇2)-〇Bzl和 Leu-Lys-OBzl；
[001引 6)将1-(2-氧代乙基）-3-巧嘟簇酸予醋分别与Leu-Leu-OBzl，Leu-Ala-OBzl，Leu-Ile-OBzl，Leu-Met-OBzl，Leu-Tyr-OBzl，Leu-Trp-OBzl， Leu-Val-OBzI,Leu-Gly-OBzI,Leu-Asp-OBzI,Leu-Ser-OBzI,Leu-Thr-OBzI, Leu-Gln-OBzl，Leu-Asn-OBzl，Leu-Arg(N02)-OBzl和Leu-Lys-OBzl偶联得到 1-(乙 基-Leu-AA-OBzl) -P-巧嘟-3-簇酸予醋（AA为AA为^Leu, ^Ala, ^Ile, ^Met, ^Tyr, ^Val,Gly, ^Asp, ^Ser, ^Thr, ^Gln, ^Asn,^Arg卿02)和^Lys残基残基）。
[0016] 本发明的第兰个内容是用MlT法评价1-(乙基-Leu-AA-OBzD-P-巧嘟-3-簇 酸予醋（AA为AA为 ^Leu, ^Ala, ^Ile, ^Met, ^Tyr, 巧，^Val,Gly, ^Asp, ^Ser, ^Thr, ^Gln, ^Asn, ^Arg(NOs)和^Lys残基残基）抑制肿瘤细胞增殖的活性。
[0017]本发明的第四个内容是评价1-(N-乙基-Leu-AA-OBzD-P-巧嘟-3-簇酸予醋 (AA为L-Leu, L-Ala，L-IIe，L-Met, L-Tyr, L-Trp, L-Val，Gly，L-Asp，L-Ser，L-Thr, L-Gln， L-Asn，L-Arg(NOs)和^Lys残基残基）抑制荷S180小鼠肿瘤生长的活性。
[001引本发明的第五个内容是测定1-(N-乙基-Leu-AA-OBzD-P-巧嘟-3-簇酸予醋(AA为AA为L-Leu,L-Ala，L-Ile，L-Met,L-Tyr,L-Trp,L-Val，Gly，L-Asp，L-Ser，L-Thr, ^Gln, ^Asn,^Arg(N02)和^Lys残基残基）的纳米结构。
【附图说明】
[001引 图1. 1-(N-己基-Leu-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋的合成路线.i)TFA，l，l， 3,3-四甲氧丙焼，CH2CI2;U)KMn04,THF;1^)肥1，HOAc, &0 ;iv)HOBt,DCC，NMM,THF;v) 肥I/化OAc;vi)NaBH3CNandHA-AA-OBzl. 4a中AA为kLeu残基，4b中AA为kAla残基， 4c中AA为klle残基，4d中AA为kMet残基，4e中AA为Tyr残基，4f中AA为kT巧残 基，4g中AA为kVal残基，4h中AA为Gly残基，4i中AA为kAsp残基，4j中AA为kSer 残基，4k中AA为kllir残基，41中AA为kGln残基，4m中AA为kAsn残基，4n中AA为 kkArg(N02)残基，40 中AA为kLys残基。
[0020] 图2.化合物4a-〇在纯水中5X106M浓度下的透射电镜照片。
【具体实施方式】
[0021] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。送些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0022] 实施例1制备（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋
[0023] 向200ml二氯甲焼中加入20mll，l，3, 3-四甲氧基丙焼，20mlH氣醋酸，室温揽拌 下活化45分钟，加入18g(0. 37mol)k色氨酸予醋，室温反应48小时。反应化合物依次用饱 和NaHC〇3水溶液巧OmlX3)和饱和化Cl水溶液巧OmlX3)萃洗，分离得到有机层经无水硫 酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残余物用硅胶柱层析纯化（石油離：丙丽=3 : 1)，得 10.Sg(60% )标题化合物，Rf= 0.25(石油離：丙丽=3 : 1)，为黄色油状物。ESI-MS(m/ z) ：395[M+H]"〇
[0024] 实施例2制备I-化2-二甲氧己基）-3-巧晰駿酸予醋
[00巧]将 10. 8g(0. 02mol) (3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿 酸予醋溶于100mL四氨巧喃中，冰浴下分批加入7. 8g(0. 04mol)KMn〇4与50ml水的溶液，室 温反应4小时，TLC监测原料斑点消失，向反应瓶中加入20ml己醇，揽拌20分钟后，过滤， 滤饼用热己酸己醋萃取后，弃去废渣，合并有机相，减压浓缩至干，用己酸己醋溶解，然后依 次用水（30mlX3)和饱和化Cl水溶液巧OmlX3)萃洗，无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓 缩至干。残余物用硅胶柱层析纯化（石油離：丙丽=3 : 1)得3g(28% )标题化合物，Rf =0. 2(石油離：丙丽=3 : 1)，为黄色粉末。ESI-MS(m/e) :391[M+田+。
[0026] 实施例3 1- (2-氧代己基）-3-巧晰駿酸予醋
[0027] 将Ig(0. 002mol) 1- (2, 2-二甲氧己基）-3-巧晰駿酸予醋溶于7. 2ml冰醋酸，加入 0. 9ml水和0. 9ml盐酸，室温揽拌4小时，TLC监测原料点消失，加入50ml冰水混合物，冰浴 下揽拌IOmin后过滤，滤饼用冰水洗涂，瞭干，不经纯化直接用于后面的反应。
[0028] 实施例 4 制备Boc-Leu-AA-OBzl
[0029] 将750mg(3mmol)Boc-Leu溶于30ml无水四氨巧喃，加入425mgHOBt,冰浴揽拌10 分钟后，加630mgDCC与无水四氨巧喃的溶液，揽拌30分钟，得到反应液。将无水四氨巧喃 溶解的 3mmolAA-OBzl(AA为kLeu,kAla,klle,kMet,kTyr,kT巧，kVal,Gly,kAsp, kSer，kT虹，kGln，kAsn，kArg(N02)和kLys残基残基）用NMM调节抑到7,加入上面得 到的反应液中，再用NMM调抑为9,室温下反应8小时后，将反应液减压浓缩至干，加入30mL己酸己醋溶解，滤除析出的DCU(二环己基脈），滤液依次用饱和NaHC〇3水溶液（20血X3)、 饱和化Cl水溶液（20血X3)、5 %K服〇4水溶液、饱和化Cl水溶液（20血X3)、5 %Na肥化水 溶液（20血X3)、饱和化Cl水溶液（20血X3)各洗H遍。己酸己醋层经无水硫酸钢干燥后， 过滤，滤液减压浓缩至干，得到产品经硅胶柱层析纯化（二氯甲焼：甲醇=80 :1)。
[0030]实施例 5 制备Leu-AA-OBzl
[0031]将 2mmolBoc-AA-OBzl(AA为kLeu,kAla,klle,kMet,kTyr,kT巧，kVal, Gly,kAsp,kSer,k!'虹，kGln,kAsn,kArg(N〇2)和kLys残基残基）溶于 5ml己酸己 醋中，冰浴下加入20ml4N氯化氨的己酸己醋溶液，室温反应4小时，TLC监测原料点消失。 减压浓缩至干，残留物加30ml己酸己醋溶解，再减压浓缩至干。该操作反复H次。残留物 加30ml无水己離溶解，再减压浓缩至干。该操作也反复H次。得到产品用于下步反应。
[0032] 实施例6制备1- (N-己基-Leu-Leu-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋（4a)
[0033]将968mg (2. 6mmol)肥1?Leu-Leu-OBzl，28. 8mg化OH固体溶于30ml甲醇中，活 化10分钟后加入600mg (1. 74mol) 1-(2-氧代己基）-3-巧晰駿酸予醋，30min后加入54mg NaBHsCN和适量的无水M拆〇4,反应12小时后，TLC薄板监测反应新点生成，反应液减压浓 缩至干，残留物用己酸己醋溶解，得到的溶液依次用饱和NaHC〇3水溶液巧Oml X 3)和饱和 化Cl水溶液巧Oml X 3)萃洗，己酸己醋层用无水化S〇4干燥，过滤，减压浓缩，残留物经娃 胶柱层析纯化（二氯甲焼：甲醇=60 : 1)，得180mg(18%)标题