一种检测型偏执型精神分裂症易感性的引物及试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及精神分裂症易感基因检测领域，具体涉及到一种检测偏执型精神分裂症易感性的引物及试剂盒。
【背景技术】
[0002]精神分裂症(schizophrenia)是一种慢性、严重性、致残性脑病，严重危害人体健康。是精神类疾病中最严重的一种精神疾病，2009年根据柳叶刀调查显示，我国的精神分裂症患者人数近1000万。精神分裂症需要终身治疗，治疗成本高昂，据统计，美国2002年精神分裂症的治疗总成本达627亿美元，其中直接成本227亿美元，因自杀而早夭和家属因照顾患者而导致的损失等为324亿美元，且精神分裂症具有高致残性，大多数精神分裂症患者会终身残留某些症状，需要终身治疗，由于精神分裂症的严重性和慢性化，对患者、家庭及社会影响很大，消耗大量公共资源，因此精神分裂症已经给社会和家庭带来严重的负担。
[0003]精神分裂症在男性、女性中的发病率几乎相同，但男性发生较早，发生在青春期晚期和成年早期，约在15-25岁起病，而此阶段正是构筑人生道路的关键时期，女性主要在20-35岁起病。患者有幻觉、妄想、自发运动增多等阳性症状，有情感冷漠、言语减退、社交退缩等阴性症状，同时有认知功能缺损，抑郁，社会职业功能损害等认知损伤等症状。
[0004]根据精神分裂症不同临床表现、发病形式、临床特点、病程、治疗方案、治疗反应及预后等因素，可以把精神分裂分为单纯型、偏执型、偏执型、紧张型、未分化型及残留型。
[0005]偏执型又称妄想型，最常见，大约占50%以上;多发病于青壮年或中年，起病缓慢。其症状以妄想为主，其次是夸大、妒忌妄想、自罪和钟情等。患者妄想内容多脱离现实，结构往往零乱，并有泛化趋势，可伴有幻觉和感知综合障碍。情感和行为常受幻觉或妄想的支配，出现自伤或伤人行为。偏执型患者进展常较缓慢。
[0006]—个世纪以来，人们对精神分裂症的生理、生化、影像、药物治疗以及社会家庭、环境等方面观察，对精神疾病的发病机理做出了各种假说和判断，随着科技进步，人们越来越认识到基因缺陷是许多严重精神疾病产生的重要原因，当人们遇到环境压力时，那些携带疾病易感基因的人比不携带易感基因的人更可能患精神卫生疾患，经调查研究，精神分裂症是遗传度很高的多基因病，主要呈现家族聚集，一旦一个家族成员患病，这个家庭的其他成员携带的易感基因远远高于正常人，需要进行有效的预防与治疗，在科技日益发展的今天如何对待精神分裂症，如何从遗传角度检测易感基因以及个体的疾病易感性，从而进行进一步风险预测和诊断，成为广大科技人员和医疗卫生人员面临的严峻问题，
[0007]尽管国内外易感基因研究开展多年，但是进展缓慢，只有少数关于鉴定遗传易感基因的报道，但是没有具体针对某种类型的精神分裂症的检测研究，国际上把精神分裂症分为五种类型，每种类型涉及的易感基因不一样，不能笼统的用一种或者几种基因把这五种类型都鉴定，这样必然专一性差。而且即使诊断出精神分裂症，但是不知道是哪种具体的精神分裂症，对后续的治疗缺乏指导意义。
[0008]利用遗传标记对治病基因进行检测，是近几年来发展的技术。遗传标记，即在染色体上有一段特异DNA序列片段，且有多态性，在世世代代传递中，遵循规律为分离、独立分配和连锁规律，因此可获得遗传物质传递信息。遗传标记可以把基因组分为不同区域，通过连锁和关联分析可获得致病基因所在染色体区域，可对该病基因进一步进行克隆。对于各种不同疾病，寻找致病基因和分析是研究的关键之一。
[0009]第三代遗传标记一SNP(single nucleotide polymorphism)指基因组中某特定核苷酸的位置上会存在两种或两种以上的不同碱基，在群体中最小等位基因频率2 1%。人类的基因组中多数SNP位点仅存在2种等位基因，所以通常SNP会指在特定位置上，某一核苷酸出现双等位基因的改变。SNP是人类基因组计划走向应用的非常重要方法。主要因为SNP提供一个非常有力的工具，用于高危人群的发现、疾病易感基因的鉴定、药物设计和基础生物学研究等。因为人类大量存在SNP位点，提供了更多的机会发现基因与疾病间的关系。通过SNP发现疾病相关基因的突变要比家系等研究容易。某些SNP并不是致病基因，但它可能与某些相邻的致病基因连锁，也同样为重要标记。
[0010]SNP以其密度高(平均每Ikb就有I个)、代表性强(位于基因内部的SNP可能直接影响蛋白质结构或表达水平)、遗传稳定性好(同微卫星多态性比较而言)、易于自动化分析(因SNP在人群中多为双等位基因标记，可简单以“+/—或1/0”直接分型)等特点成为很好的遗传标志。
[0011]最近基因组扫描结果提示，有多条染色体与精神分裂症易感性相关联，其中22号染色体与偏执型精神分裂症易感性相关联，但至今在该染色体区域内未发现确定特异的与偏执型精神分裂症相关的易感基因。目前尚无任何关于GNBlL基因与偏执型精神分裂症相关联的研究结果，本发明第一次利用SNP技术对偏执型精神分裂症易感基因进行检测，为偏执型精神分裂症的深入研究和防治、诊断、治疗提供了新的思路。
【发明内容】
[0012]本发明的目的是提供一种检测型偏执型精神分裂症易感性的引物及试剂盒，从而满足本领域对于正确识别偏执型精神分裂症易感基因的需求，为偏执型精神分裂症的深入研究、预防、治疗、诊断提供了新的思路。
[0013]发明人通过研究结果表明，22号染色体GNBlL基因位于22qlI，Gene ID:54584，是G蛋白亚基编码基因，是偏执型精神分裂症的易感基因，通过对GNBlL基因的SNP位点:rs748806进行分析，结果显示，rs748806与偏执型精神分裂症高度相关。
[0014]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
[0015]1、一种检测偏执型精神分裂症易感基因的引物，其特征在于:所述引物为扩增GNBlL基因rs748806的核苷酸序列，分别为序列表SEQ ID N0.1和序列表SEQ ID N0.2所示。
[0016]ACGTTGGATGTCCGGTCAAGTTCATCTCTG(SEQ ID N0.1)
[0017]ACGTTGGATGTGGTGTGTTTGGGAAACAGC(SEQ ID N0.2)
[0018]2、一种检测偏执型精神分裂症易感基因的试剂盒，其特征在于包括以下试剂:
[0019]I)引物:为SEQ ID N0.1,SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列，
[0020]2)PCR扩增缓冲液，Taq DNA聚合酶，
[0021]3)dNTP 混合液。
[0022]具体的说，本发明是用以下技术方案实现的:
[0023]一种检测偏执型精神分裂症的GNBlL易感基因rs748806的核苷酸序列，为序列表SEQ ID N0.3所示核苷酸序列。该核苷酸序列位于GNBlL基因，其变异位点，以字母“R"表示，
[0024]所述的单核苷酸多态性位点rs748806的基因型为A时，受试者的易感性最低，携带G等位基因时候，受试者的易感性升高。
[0025]一种体外检测偏执型精神分裂症易感基因的检测方法，包括如下步骤:
[0026]1、基因组DNA提取
[0027]采用提取DNA的试剂盒，提取外周血的白细胞中全基因组的DNA。
[0028]2、基因组DNA质量检测
[0029]3、基因组DNA含量和纯度的检测
[0030]4、设计引物
[0031]扩增GNBlL基因rs748806多态性的引物分别为:SEQ ID N0.1,SEQ ID N0.2
[0032]5、PCR扩增目的片段
[0033]扩增GNBlL基因的包含单核苷酸多态性位点rs748806的部分片段。
[0034]6、检测多态性位点的基因型。
[0035]将PCR产物直接测序，根据荧光信号的差异判定基因型。
[0036]7、结果判定
[0037]rs748806碱基为(G)的个体为精神分裂症易感人群。
[0038]本发明的测定方法测定了来源于人的基因组DNA，样品来源无限制，如:体液(血液、腹水及尿液等)、组织细胞(如肝组织)等。通过提取和纯化这些样品可制备基因组DNA。调整基因组DNA的浓度，使其尽可能的一致。以基因组DNA为模板，可扩增出含GNBIL基因突变位点的核酸片段，以获取测定的大量样本。这种通过扩增含GNBlL基因变异点的DNA片段获得的样品，特别适于用作测定材料。
[0039]在进行基因辅助诊断时，本发明优先适用于测定根据GNBlL基因突变类型存在的辅助诊断试剂，辅助诊断试剂包括作为必要成分的特定试剂，其对应于用于测定基因突变类型的方法。按采用的测定方法来选择适当的特定试剂，如DNA片段和/或用于PCR扩增步骤的引物。
[0040]本发明通过大样本的统计分析，研究了GNBlL基因序列的rs748806多态性位点在偏执型精神分裂症患者的等位基因频率，并根据基因型在患病子女中的传递情况，进行传递不平衡检验和单体型分析，结果发现，全部样本的基因型分布和等位基因频率均符合Hardy-We inburg平衡，经过Bonfer