0°C下反应2小时后等体 积乙酸乙酯萃取，气相色谱检测，转化率为24.8%，四种产品的比例（1:2:3:4)为93.1:4:0: 2 · 9 〇
[0032] 从实施例1、2、3中可看出，选用sigma公司生产的Aspergillus saitoi蛋白酶或 ΑΜΑΝ0/天野酶公司生产的酯酶CES-E2作为水解酶，其产物1的收率要明显高于选用购自 ΑΜΑΝ0/天野酶公司的脂肪酶Lipase PS作为水解酶所得到的收率。
[0033] 实施例4
[0034] 取顺式、反式DV菊酸甲酯异构体的混合甲酯lg，加入pH 6·0、7·0、8·0和9·0，0· 1M 缓冲溶液19mL，乙腈lmL，酯酶CES-E2 0.1 g，30 °C下反应16小时后等体积乙酸乙酯萃取，气 相色谱检测，结果如下：
[0035] 表 1
[0036]
[0037] 从表1中可看出，在其余条件不变的情况下，当体系pH为7.0时，底物的转化率最 高，且产物的纯度最高。
[0038] 实施例5
[0039] 取顺式、反式DV菊酸甲酯异构体的混合甲酯lg，加入pH 7.0，0.1M磷酸盐缓冲溶液 19mL，乙腈lmL，酯酶CES-E2 0.1 g，分别在25、30、35、40、50 °C下反应16小时后等体积乙酸乙 酯萃取，气相色谱检测，结果如下：
[0040]表 2
[0041]
[0042] 从表2中可看出，在其余条件不变的情形下，在50°C温度条件下，底物的转化率最 高，而在35°C温度条件下，产物的纯度最高。
[0043] 实施例6
[0044] 取顺式、反式DV菊酸甲酯异构体的混合甲酯lg，加入pH 7.0，0.1M磷酸盐缓冲溶液 19mL，不同有机溶剂lmL，酯酶CES-E2 0.1 g，35°C下反应16小时后等体积乙酸乙酯萃取，气 相色谱检测，结果如下：
[0045] 表 3
[0046]
[0047] 从表3中可看出，如在丙酮存在的有机溶剂中进行所述反应，在确保产品纯度的情 况下，底物的转化率有所提高。
[0048] 实施例7
[0049] 取顺式、反式DV菊酸甲酯异构体的混合甲酯10g，加入pH 7.0，0.1M磷酸盐缓冲溶 液190mL，丙酮10mL，酯酶CES-E2 1g，35°C下反应20小时后气相色谱检测，转化率为24.8%， 四种产品的比例（1:2:3:4)为98.1:0.7:0:1.2,调节pH至3.5~2.0后等体积乙酸乙酯萃取 三次，旋蒸得到产品2.7g，收率95 %。
[0050] 从附图1中可知，产物1、2、3、4的甲酯的出峰时间分别为4.684,4.541，4.392， 4.430min，产物1的出峰时间为6.164min。
[0051] 上述实施例中产品纯度的测定方法采用了气相色谱检测方法，该检测方法所采用 的色谱仪为岛津GC-2014,气化室温度220°C，FID检测器温度250°C，载气为氮气，流速为 4.5mL/min，分流比为 10:1，色谱柱为 SupelcoP-Dex 120，升温程序为 100°C3min，40°C/min 至180°C，保持2min后结束。
[0052] 上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人 士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明 精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于，W具有化合物5结构的顺 式、反式菊酸异构体的混合DV菊酸甲醋为底物，底物的投加浓度为1~50g/L，在溫度25~50 °C、pH为6.0~8.0的缓冲溶液中，在水解酶的作用下，水解反应生成聚醋类杀虫剂中间体， 其中，混合DV菊酸甲醋中顺式异构体与反式异构体的投料质量比为2:8~6:4,所述的水解 酶为蛋白酶或醋酶，所述的水解酶的投加质量为所述底物质量的10~100%， 化合物5的结构式如下：聚醋类杀虫剂中间体的结构式如下：2. 根据权利要求1所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于:所述的缓 冲溶液的pH为6.0~7.0。3. 根据权利要求1所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于:所述的缓 冲溶液为憐酸盐缓冲溶液。4. 根据权利要求1所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于:所述反应 在助溶剂条件下进行，所述的助溶剂为乙腊、丙酬或二者的组合。5. 根据权利要求4所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于:所述助溶 剂的投料体积为反应体系总体积的1~10%。6. 根据权利要求1所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于:所述的醋 酶购自AMANO/天野酶公司的醋酶CES-E2。7. 根据权利要求1所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其特征在于:所述的蛋 白酶为购自sigma公司的Aspe;rgillus saitoi蛋白酶。8. 根据权利要求1至7任一项权利要求所述的酶法合成聚醋类杀虫剂中间体的方法，其 特征在于，具体的实施过程如下:将所述的底物、水解酶加入到所述的缓冲溶液中，控制反 应溫度在25~50°C间，水解反应生成聚醋类杀虫剂中间体，反应结束后，采用等体积乙酸乙 醋萃取，经旋蒸得到聚醋类杀虫剂中间体的纯品，并采用气相色谱检测纯品转化率及纯度。
【专利摘要】本发明公开了一种酶法合成聚酯类杀虫剂中间体的方法，以具有化合物5结构的顺式、反式菊酸异构体的混合DV菊酸甲酯为底物，底物的投加浓度为1~50？g/L，在温度25~50℃、pH为6.0~8.0的缓冲溶液中，在水解酶的作用下，水解反应生成聚酯类杀虫剂中间体，其中，混合DV菊酸甲酯中顺式异构体与反式异构体的投料质量比为2:8~6:4，所述的水解酶为蛋白酶或酯酶，所述的水解酶的投加质量为所述底物质量的10~100%。采用本发明的方法进行制备聚酯类杀虫剂中间体，其过程简单、反应时间短、转化率高、产品纯度高、绿色环保，适于工业化生产。
【IPC分类】C12P7/40
【公开号】CN105567746
【申请号】CN201511025561
【发明人】陶军华, 乐庸堂, 薛锐, 吴菊
【申请人】苏州汉酶生物技术有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月31日