一种乳香挥发油的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体设及一种乳香挥发油的提取方法。
【背景技术】
[0002] 我国中药产业对乳香的需求逐年增加，《中国药典》(2010年版)含有乳香的成方制 剂为57个。乳香及其炮制品其功效为:活血定痛，消肿生肌。主要是用于治疗胸搏屯、痛，胃腕 疼痛，痛经经闭，风湿搏痛，跌打损伤，痴肿疮瘍等常见病、多发病的常用中药材。
[0003] 目前对乳香挥发油的提取方法单一，难W充分提取其有效成分，且所得产品的抗 炎效果不明显。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是克服上述不足之处提供一种能够充分发挥抗炎效果，且制备方法 简单，成本低的乳香挥发油的提取方法。
[0005] 本发明的目的是通过W下方式实现的：
[0006] -种乳香挥发油的提取方法，该方法包括W下步骤：
[0007] 取乳香粉，置于萃取蓋中，采用超临界C〇2萃取法，萃取蓋萃取压力30~36MPa，萃 取溫度40~45°C，萃取时间60~90min;C〇2流速200~300kg/hr;分离蓋I的压力为8~ 12MPa，萃取溫度40~50°C，分离蓋Π 的压力为4~6MPa，萃取溫度35~40°C。
[000引所采用的乳香为粒径20~60目乳香粗粉。
[0009] 优选乳香挥发油的提取方法包括W下步骤：
[0010] 取乳香粉，置于萃取蓋中，采用超临界C〇2萃取法，萃取蓋萃取压力35MPa，萃取溫 度40°C，萃取时间75min;C〇2流速220kg/hr;分离蓋I的压力为12MPa，萃取溫度50°C，分离蓋 Π 的压力为6MPa，萃取溫度40°C。
[0011] 与现有技术比较具有的有益效果:本发明采用特定的C〇2超临界萃取法萃取乳香 挥发油，萃取得油率高，得油率为21.0% W上，提取出的有效成分多，还首次提出6个文献未 报导的化合物。且C〇2易挥发，无有机溶剂残留，萃取溫度较低，挥发性成分不易受到破坏， 避免不稳定成分的氧化。本发明乳香挥发油对小鼠有显著的镇痛、抗炎作用。
[0012] W下通过具体的药效试验进一步证明本发明乳香挥发油抗炎药效的效果：
[001引1、供试品
[0014] 乳香(产自埃塞俄比亚），粉碎，分别过Ξ号筛；乳香C〇2挥发油（按照实施例1方法 制备得到）。
[0015] 试验动物：昆明种小鼠（SPF级），许可证SCXK(苏)2002-0030，上海杰思捷实验动物 有限公司，18~22g，雌雄各半。
[0016] 2、试验方法
[0017] 2.1动物分组
[0018] 根据动物体重的不同进行随机分为4组，每组12只。分别设阳性对照组，乳香组、乳 香挥发油组，w及空白对照组。
[0019] 2.巧幢设置
[0020] 空白对照组:0.5 % CMC-fe溶液；
[0021 ] 阳性对照组：W0.5%CMC-Na溶液为溶剂，制成浓度为4mg/mL(阿司匹林浓度）的混 悬液；
[0022] 给药组参考《中国药典》2010年版乳香用量，W人用量5g/d计算（人体重按60Kg)， 按体重折算成小鼠日等效用量。
[0023] 1#乳香组：W0.5%CMC-fe溶液为溶剂，制成浓度为30mg/mL的混悬液；
[0024] 4#乳香组：W0.5%CMC-fe溶液为溶剂，制成浓度为30mg/mL的混悬液；
[0025] 9#乳香组：W0.5%CMC-fe溶液为溶剂，制成浓度为30mg/mL的混悬液；
[00%] 4#乳香挥发油组:称取0.7296g挥发油，加入lOOmL 0.5%CMC-fe溶液溶解，制成浓 度为30mg/mL(折合生药材)的混悬液；
[0027] 2.3给药方法
[00%]连续i . g.给药6d，禁食12h，第7d再i . g.给药一次，前后共给药7次，单次给药容积： 0.5mL/10g〇
[0029] 2.4试验主要步骤
[0030] 连续灌胃给药6d后，禁食1化过夜。第7d再灌胃给药一次，化后，在小鼠右耳的前后 两面涂布二甲苯0.05mL，左耳不做任何处理。各组分别于致炎后60min脱颈椎处死动物，剪 下双耳用7mm直径打孔器分别在耳相同部位打下圆耳片，电子天平称质量。计算肿胀度及肿 胀抑制率，比较各给药组与对照组差异情况。
[0031] 2.5观察指标 [00创肿胀度：
[0033] 肿胀度(mg)=右耳片重量(致炎耳，mg)-左耳片重量(对照耳，mg)
[0034] 肿胀抑制率；
[0035] 肿胀抑制率（％ )=(对照组肿胀度-给药组肿胀度)/对照组肿胀度*100%
[0036] 结果与分析
[0037] 实验结果W肿胀度和肿胀抑制率表示，结果见表1。统计学采用组间t-student检 验。结果表明，阳性对照组的耳肿胀度与空白对照组比较有显著差异(P<〇.05)，乳香挥发油 组的耳肿胀度与空白对照组比较有极显著差异(P<〇.01)。说明乳香挥发油对二甲苯致小鼠 耳肿胀有抑制作用。乳香挥发油肿胀抑制率较高，高于阳性对照组，具有显著的抑制肿胀作 用。
[0038] 表1乳香对二甲苯致炎抑制作用试验结果
[0039]
[0040] 注：（1 )*: P<0.05，**: P<0.01;与对照组比较（t检验）
[0041] (2)肿胀度(mg)=右耳片重-左耳片重
[00创 （3)肿胀抑制率（％ )=(对照组肿胀度-给药组肿胀度)/对照组肿胀度*100%
【具体实施方式】
[0043] W下通过实施例对本发明进行进一步说明
[0044] 实施例1
[0045] 取300g过2号筛的乳香粉，置于萃取蓋中，采用超临界C〇2萃取法，萃取蓋萃取压力 35MPa，萃取溫度40°C，萃取时间75min; C〇2流速220kg/hr;分离蓋I的压力为12MPa，萃取溫 度50°C，分离蓋Π 的压力为6MPa，萃取溫度40°C。得油率为25.0%。
[0046] 实施例2
[0047] 取300g过2号筛的乳香粉，置于萃取蓋中，采用超临界C〇2萃取法，萃取蓋萃取压力 30MPa，萃取溫度45°C，萃取时间70min; C〇2流速250kg/hr;分离蓋I的压力为lOMPa，萃取溫 度40°C，分离蓋Π 的压力为4MPa，萃取溫度35°C。得油率为21.0%。
[004引 W下按照实施例1方法提取13个乳香挥发油进行制备得到的乳香挥发油利用GC- MS测定，结果如下：
[0049]表2 13个乳香样品性状情况表
[(Κ)加]
[0051] 上述乳香挥发油利用GC-MS测定，方法及结果如下：
[0052] a)供试品溶液的制备
[0053] 取乳香挥发油0.5g，精密称定，加少量无水乙醇至50mL量瓶中，溶解，稀释至刻度， 过0.45皿滤膜；
[0054] b)对照品溶液的制备
[0055] 取α-羡締、醋酸辛醋对照品，加无水乙醇制成每ImL含0.8mg的溶液；
[0056] C)挥发油成分分析
[0057] 采用GC-MS对乳香C〇2超临界萃取挥发油进行成分分析;色谱条件为:DB-WAXMX柱 (30m，0.25皿，0.2mmID);载气化，流速ImL/min;分流比20:1;升溫程序:起始溫度50°C，保留 5min，W5°C/min升溫至200°C，保留8min;再W5°C/min升溫至220°C，保留 15min，最后 WlO °C/min升溫至250°C，保留5min;
[0化引进样口溫度250°C ;FID溫度280°C ;进样量：1化。质谱条件为:离子源溫度260°C，采 集从3.5~65min，电轰击电压：化V，m/z :40~600。
[0化9] GC-MS分析图谱经计算机和人工把每个峰与谱库NISTllLibra巧相匹配检索定性， 匹配度大于75(最大为100)作为鉴定结果。化合物定量W峰面积归一化法计算相对百分含 量。
[0060] 分析挥发油主要成分及含量：
[0061] 根据GC-MS分析，13个乳香C〇2超临界萃取挥发油共分析出成分157个，与NIST Ubrary谱库检索，分别鉴定了出化合物126种。13个挥发油样品主要鉴定出的化合物有：1# 样品59种、2#样品52种、3#样品56种、4#样品56种、5#样品5巧巾、6#样品66种、7#样品57种、8# 样品53种、9#样品53种、10#样品51种、11 #样品53种、12#样品52种、13#样品55种。
[0062] 在对乳香挥发油样品GC-MS分析中，为了比较准确地进行分析，对匹配度较低的W 及含量较小的成分未进行解析。13个挥发油样品中解析出的成份均超过50种W上，主要检 出成分主要有締类、醇类、醋类等。1#、6#均产自索马里产地，样品成分出峰时间较早，集中 在37分钟前出峰(分析时间为65分钟），运两个挥发油样品共有成分较多，为26个。其他乳香 挥发油样品出峰时间集中在32分钟后，尤其在41分钟后出峰较多。
[0063] 解析出所有13个乳香挥发油样品共有成分10个，分别为：（lR)-( + )-a羡締、右旋祗 二締、4-亚甲基-1-甲基-2(2-甲基-1-締-1-基)-1-乙締基-环庚烧、护揽香締、611义6116、5- 6161116116、月桂酸、2,2-二甲基-3-(3,7，12，16,20-五甲基-3,7，11，15，19-戊締基二^^一烧- 化)环氧乙烧、（1S，2E，4S，5R，7E，1化)-西柏烧-2，7，11-Ξ締-4，5-二醇、顺-9-十六碳締酸。
[0064] 除了与其他11个乳香的10个共有成分外，1#、6#乳香共有特殊性成分有16个，分别 为:曰-可己締、（-)-4-祗品醇、别香澄締、α-石竹締、马鞭草締醇、[S-化.E)]-1-甲基-5-亚甲 基-8-异丙基-1,6环癸二締、2-亚甲基-5(1-甲基乙締基）-8甲基-环[5.3.0.]癸烧、α-蛇床 締、日-衣兰油締、β-二氨沉香巧喃、氧化石竹締、辛酸辛醋、香叶基芳精醇、日-按叶油醇、β-按 叶油醇、Τ-揽香締等。
[00化]而除了与 1#、6#共有的 10个成分外，其他2#、3#、4#、5#、7#、8#、9#、10#、11#、12#、 13#等11个乳香共有的特征性成分还有17个，分别为:β-罗勒締、β-芳精醇、1-辛醇、乙酸十 二締基醋、顺式倍半香检締水合物、异卿趴締、α-愈创木締、Ve;rticiol、a-白檀油締醇、澄花 叔醇异下酸醋、环按締醇乙酸醋、9,10-二甲基Ξ环[4.2.1.1(2,5)]癸烧-9,10-二醇、正十 五酸、3-氧-乙酷基-6-甲氧基-环环木渡萝締醇、（-)-按油締醇、十八酸、顺-十八碳締酸等。
[0066]
[0067]
[006引
【主权项】
1. 一种乳香挥发油的提取方法，其特征在于该方法包括以下步骤： 取乳香粉，置于萃取釜中，采用超临界C02萃取法，萃取釜萃取压力30~36MPa，萃取温度 40~45°C，萃取时间60~90min;⑶2流速200~300kg/hr;分离釜I的压力为8~12MPa，萃取 温度40~50°C，分离釜Π 的压力为4~6MPa，萃取温度35~40°C。2. 根据权利要求1所述的乳香挥发油的提取方法，其特征在于所采用的乳香为粒径20 ~60目乳香粗粉。3. 根据权利要求1所述的乳香挥发油的提取方法，其特征在于该方法包括以下步骤： 取乳香粉，置于萃取釜中，采用超临界C02萃取法，萃取釜萃取压力35MPa，萃取温度40 。(：，萃取时间75min; C02流速220kg/hr;分离釜I的压力为12MPa，萃取温度50°C，分离釜Π 的 压力为6MPa，萃取温度40 °C。
【专利摘要】本发明公开了一种乳香挥发油的提取方法，该方法包括以下步骤：取乳香粉，置于萃取釜中，采用超临界CO2萃取法，萃取釜萃取压力30～36MPa，萃取温度40～45℃，萃取时间60～90min；CO2流速200～300kg/hr；分离釜Ⅰ的压力为8～12MPa，萃取温度40～50℃，分离釜Ⅱ的压力为4～6MPa，萃取温度35～40℃。采用本发明CO2超临界法萃取乳香挥发油，萃取得油率高，平均得油率为21.0％，提取出的成分多，且CO2易挥发，无有机溶剂残留，萃取温度较低，挥发性成分不易受到破坏，避免不稳定成分的氧化。本发明乳香CO2超临界萃取物对小鼠有显著的镇痛、抗炎作用。
【IPC分类】A61K36/324, C11B9/02, A61P29/00
【公开号】CN105586151
【申请号】CN201511021956
【发明人】李静雅, 赵开军, 竞存, 王新月, 王誉
【申请人】南京中山制药有限公司
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2015年12月30日