一种从蝇蛆中提取寡肽和油脂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从蝇蛆中提取寡肽和油脂的方法，属于生物技术中酶解蝇蛆蛋白 的技术领域。
【背景技术】
[0002] 蝇蛆生长速度极快，刚孵化的幼虫经过4-5天后即有1厘米长，重约30毫克。蝇蛆养 殖设备简单，容易操作。而且蝇蛆的养殖不像其他养殖业，没有疫病，不用花大力气防疫防 病。蝇蛆富含丰富的蛋白质、油脂和甲壳素。蝇蛆中蛋白含量占干重的60%左右，相比于其 他昆虫，其蛋白中的氨基酸组成更加合理，必需氨基酸含量高，且所含蛋白纤维少，更容易 被人体消化吸收。必需氨基酸含量以及必需氨基酸与非必需氨基酸的比值均高于FA0提出 的参考蛋白模式评价。油脂占蝇蛆干重的20%左右。由于蝇蛆不能合成类固醇类物质，所以 其饱和脂肪酸和胆固醇含量低，不饱和脂肪酸含量高。脂肪酸的组成与鱼油的脂肪酸十分 接近，对人体的保健有着良好的作用。
[0003] 目前，对蝇蛆提油的方法有溶剂法和压榨法。采用溶剂法提油，虽然能得到很高的 提油率，但是提完油之后还要经过脱酸、脱胶等一系列精炼过程，步骤繁琐麻烦。采用溶剂 法提油，车间也需要设计成防爆模式，成本高，并不适合小型油厂。而且昆虫油脂目前并不 会像大豆、菜籽一样大规模生产，所以也不适合此方法。压榨法提油虽然简单方便，但是其 压榨之前需要进行高温热处理，且经过压榨之后蛋白受到很大程度的破坏，所以此方法也 不经济。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供从蝇蛆中同步提取寡肽和油脂的方法。
[0005] 所述方法包括如下步骤：
[0006] (1)清洗、漂烫:利用沸水将鲜蛆进行漂烫处理，将蝇蛆致死并使其体内的酚氧化 酶失活；
[0007] (2)磨浆:对步骤(1)得到的蝇蛆加水进行磨浆，再加水得到浆液；
[0008] (3)酶解:将步骤(2)得到的浆液注入酶解罐，调节温度至45-65Γ，用0.5-2M的氢 氧化钠溶液调节pH至8-9.5，恒温10-30min;当衆液的pH值稳定在8-9.5，加入蛋白酶进行酶 解;酶解结束后，用〇. 5-2M的盐酸溶液调至pH=4-6.5，并且在酶解温度下保持稳定;之后离 心，得到酶解液、乳化层及其残渣；
[0009] (4)过滤:将离心得到的酶解液用硅藻土过滤，得到酶解清液；
[0010] (5)喷雾干燥:将酶解清液进行喷雾干燥得到寡肽产品；
[0011] (6)乳化层调pH值:将离心得到的乳化层加水，使得乳化层:水的质量比为1:2-5， 之后用0.5-1M氢氧化钠溶液或者0.5-1M盐酸溶液调其pH为4-6.5;
[0012] (7)冷冻解冻:将步骤(6)得到的溶液进行冷冻处理，冷冻成型之后取出解冻，解冻 后进行离心，得到油相。
[0013]在本发明的一种实施方式中，步骤(3)酶解条件为：加蛋白酶的量为3000-7000U/ g，搅拌速度为l〇〇rpm，酶解时间为0.5-3h，酶解温度为45-65°C，酶解过程中不断加入0.2-2M的氢氧化钠溶液使其pH值稳定在8-9.5。
[0014]在本发明的一种实施方式中，步骤(3)离心条件为转速4000rpm，时间为15min。
[0015] 在本发明的一种实施方式中，步骤(5)喷雾干燥过程中设定进口温度为135°C，出 口温度为70 °C。
[0016] 在本发明的一种实施方式中，步骤(7)是将步骤(6)得到的溶液在_18°C条件下冷 冻12h-24h，取出解冻后进行离心，得到油相。
[0017] 在本发明的一种实施方式中，步骤(7)中的解冻是在15-25 °C条件下进行。
[0018] 在本发明的一种实施方式中，步骤(7)离心的转速为8000rpm，时间为15min。
[0019] 在本发明的一种实施方式中，所述方法包括如下步骤：
[0020] (1)清洗、漂烫:利用沸水将鲜蛆进行漂烫处理，将蝇蛆致死并使其体内的酚氧化 酶失活；
[0021] (2)磨浆:对步骤（1)得到的蝇蛆加水进行磨浆，蝇蛆:水的质量比为1:1，再加水形 成浆液，使得固液比为1:5-20;
[0022] (3)酶解:将得到的浆液注入酶解罐，调节温度至45-65Γ，用0.5-2M的氢氧化钠溶 液调节pH至8-9.5，恒温10-30min，当衆液的pH值稳定在8-9.5，加入蛋白酶进行酶解;加蛋 白酶的量为3000_7000U/g，搅拌速度为lOOrpm，酶解时间为0.5-3h，酶解温度为45-65°C，酶 解过程中不断加入0.2-2M的氢氧化钠溶液使其pH值稳定在8-9.5;酶解结束后，用0.5-2M的 盐酸溶液调pH值为4-6.5，并且在酶解温度下保持稳定;离心得到酶解液、乳化层及残渣； [0023] (4)过滤:将离心得到的酶解液进行硅藻土过滤，得到酶解清液；
[0024] (5)喷雾干燥:将酶解清液喷雾干燥得到寡肽产品，喷雾干燥过程中设定进口温度 为135°C，出口温度为70°C;
[0025] (6)乳化层调pH值:将步骤(3)离心得到的乳化层加水，使得乳化层:水的质量比为 1:2-5，之后用0.5-1M氢氧化钠溶液或者0.5-1M盐酸溶液调其pH为4-6.5;
[0026] (7)冷冻解冻:将步骤(6)中的溶液进行冷冻处理，温度为-18 °C，时间为12h-24h， 之后取出在15-25 °C下解冻，解冻后离心得到油相。
[0027]本发明的有益效果:本发明提供了蝇蛆酶解的工艺条件以及酶解后产生的乳化层 的破乳方法，为蝇蛆的深加工和资源的利用提供了一条新的途径。通过酶解及之后相关工 艺得到的油脂避免了有机溶剂的使用，对油的品质具有一定改善。所得到的酶解液中肽含 量占有3.24%，固形物含量占4.02%，且这些肽中分子量在1000道尔顿以下的占大部分;最 终喷雾干燥得到的产品中多肽占了 80.60%，且其具有一定的抗氧化性和ACE抑制活性。而 通过调pH，冷冻解冻后，乳化层的提油率为66.03%，得到的油脂其色泽、酸价、过氧化值、碘 值、皂化值均比有机溶剂提取的油脂好。
【附图说明】
[0028]图1本发明总工艺路线图。
[0029]图2为所得寡肽产品的分子量分布及其对应分子量段的肽含量。
[0030]图3为测定ACE抑制活性中空白样品所得图谱。
[0031] 图4为测定ACE抑制活性中加入酶解液后所得到的图谱。
【具体实施方式】
[0032] 本发明所用的材料、试剂、仪器和方法，如未特殊说明，均为本领域常规材料、试 剂、仪器和方法，均可通过商业渠道和现有方法获得。
[0033]水解度的测定：
[0034]采用pH-stat法来测定蛋白质酶解的水解度。
[0035]
[0036 ] ht〇t一每克蛋白质中肽键的克当量，mmo 1 /g;
[0037] MP-蛋白质总量，g;
[0038] Nb-氢氧化钠溶液浓度，mol/L;
[0039] B-氢氧化钠溶液消耗的体积，mL;
[0040] α 一氨基解离度。
[0041] 提油率的测定：
[0042]
[0043] 实施例1
[0044]将鲜蛆称取200g，漂烫后，以鲜蛆与水的质量比为1:1进行磨浆。再加去离子水使 其固液比为1:10,将混合浆液倒入酶解罐中，升温至55°C，用0.5M的氢氧化钠溶液调节其pH 值为9,等到pH值稳定不变后，加入Alcalase碱性蛋白酶的量为5000U/g蛋白，之后用0.5M的 氢氧化钠溶液调节pH值使酶解过程中pH值保持稳定，记录所需氢氧化钠溶液的体积。酶解 3h之后，用1M的盐酸溶液调节pH值至6。之后进行离心，离心转速为4000rpm，时间为20min。 得到乳化层、水相(酶解液)以及残渣。
[0045]在水相中加入2g硅藻土，搅拌均匀后进行抽滤，得到酶解清液。把酶解清液进行喷 雾干燥，设定进口温度为135°C，出口温度为70°C，最终得到寡肽粉。
[0046]将乳化层加入一定量的水，其实质量比为1:5，用0.5M的盐酸溶液调节pH值为5.5 并保持稳定，之后放入_18°C的冰箱中冷冻12h，最后在室温下解冻。将解冻后的乳化层离 心，转速为8000rpm，时间为20min，吸取上层油相。
[0047] 此过程，蛋白质酶解的水解度为20.84%，得油率为50.68%。
[0048] 实施例2
[0049]将鲜蛆称取200g，漂烫后，以鲜蛆与水的质量比为1:1进行磨浆。再加去离子水使 其固液比为1:15,将混合浆液倒入酶解罐中，升温至45°C，用0.5M的氢氧化钠溶液调节其pH 值为9,等到pH值稳定不变后，加入Alcalase碱性蛋白酶的量为5000U/g蛋白，之后用0.5M的 氢氧化钠溶液调节pH值使酶解过程中pH值保持稳定，记录所需氢氧化钠溶液的体积。酶解 3h之后，用1M的盐酸溶液调节pH值至6。之后进行离心，离心转速为4000rpm，时间为20min。 得到乳化层、水相以及残渣。
[0050]在水相中加入2g硅藻土，搅拌均匀后进行抽滤，得到酶解清液。把酶解清液进行喷 雾干燥，设定进口温度为135°C，出口温度为70°C，最终得到寡肽粉。
[0051 ]将乳化层加入一定量的水，使其质量比为1:5,用0.5M的盐酸溶液调节pH值为5并 保持稳定，之后放入-18 °C的冰箱中冷冻12h，最后在室温下解冻。将解冻后的乳化层离心， 转速为8000rpm，时间为20min，吸取上层油相。
[0052] 此过程，蛋白质