[0057] 在一个具体的实施方式中，参见附图4,支撑结构还包括一固定环7,固定环7套接 在端口一 4外侧。具体的，固定环7可为圆环，圆环内壁设置有柱状凸起8,柱状凸起8沿圆 环内壁周向均匀分布。
[0058] 本实用新型在支撑结构上设置固定环，该固定环一方面可用于将纳米纤维膜更好 的固定在端面上，使其不脱落；另一方面，可以使纳米纤维膜与培养器皿之间有一段距离， 使细胞更好的形成三维结构，也可实现细胞的共培养。
[0059] 在一个具体的实施方式中，参见附图1-3,支撑结构端口二5包括向外延伸的边缘 9,边缘9上设置有便于抓持的把手10。在使用中，可将支撑结构端口二的边缘放置在细胞 培养平板孔上，采用设置在其上的把手方便的移动复合支架。
[0060] 实施例1 :PCL纳米纤维膜支架结构的制作
[0061] 利用静电纺丝技术进行静电纺丝。静电纺丝试验条件如下：以六氟异丙醇（HFIP) 为溶剂，配制6 %聚己内酯（PCL)溶液，接收距离为20. 5cm，流速为1.0 mL/h，电压为 9. 5kv-10.0 kv，收集时间为0. 5h，氮气压力为0.1 Mpa，以PBS缓冲液为接收器得到纳米纤维 膜，晾干后得到支架结构，得到纳米纤维膜为直径为300nm+/-20nm。
[0062] 实施例2 :PCL_胶原蛋白纳米纤维膜支架结构的制作
[0063] 利用静电纺丝技术进行静电纺丝。静电纺丝试验条件如下：以HFIP为溶剂，配制 8% PCL-胶原蛋白溶液，PCL与胶原蛋白比例为11 :5,接收距离为20. 5cm，流速为0. 5mL/h， 电压为9. 5kv-10.0 kv，收集时间为0. 5h，氮气压力为0.1 Mpa，以PBS缓冲液为接收器，得到 纺丝膜为直径为560nm+/-20nm，直径较粗，同时由于胶原具有一定的亲水性，利于细胞的生 长。
[0064] 实施例3 :筒形结构PLA支撑结构的制作
[0065] 通过3D打印以聚乳酸（PLA)为原料，根据细胞培养平板孔6、24、96孔板的尺寸和 结构设计支撑结构。设计尺寸如下表1所示：
[0066] 其中柱形结构同样需要把静电纺丝膜用医学黏胶粘到不带把手的柱形底部，其中 柱形尺寸如表所示：
[0067] 表1 :与6、24、96孔板匹配的筒形支撑结构尺寸
[0069] 实施例4 :梯形截面PLA支撑结构的制作
[0070] 通过3D打印以聚乳酸（PLA)为原料，根据细胞培养平板孔6、12、24孔板的尺寸和 结构设计支撑结构。设计尺寸如下表2所示：
[0071] 表2 :与6、12、24孔板匹配的支撑结构尺寸
[0074] 实施例5 :含固定环的PLA支撑结构的制作
[0075] 通过3D打印以聚乳酸（PLA)为原料，根据细胞培养平板孔6、24孔板的尺寸和结 构设计支撑结构，在本实施例中，固定环为圆环，记为外环，支撑结构的主体为内环。设计尺 寸如下表3所示：
[0076] 表3 :与6、24孔板匹配的支撑结构尺寸
[0078] 实施例6 :神经瘤母细胞和神经胶质细胞细胞培养试验
[0079] 采用本实用新型实施例1所述支架结构作为细胞三维培养的支架，以本实用新型 设计的6孔板匹配的支撑结构为例进行试验，将PCL纳米纤维膜支架结构采用医用胶黏剂 贴合在支撑结构上制备得到复合支架，对神经瘤母细胞核神经胶质细胞进行细胞培养试 验，并对其分别进行CCK8检测和死活染色检测。
[0080] 如表4所示，为神经瘤母细胞SY5Y的CCK-8检测结果，对照组为二维培养及本公 司另一产品（将静电纺丝膜采用胶黏剂黏贴在硬质塑料上，记为PCL-塑料）；如表5所示， 为神经胶质细胞的CCK-8检测结果，对照组为二维培养及三维支架离心培养。
[0081 ] 表4 :神经瘤母细胞SY5Y的CCK-8检测结果
[0082]
[0083] 表5 :神经胶质细胞的CCK-8检测结果
[0085] 由上述结果可知，对于神经瘤母细胞，其中采用PCL三维支架的两种处理方式下 的细胞生长状态良好，与2D培养相比第三天到第六天细胞在PCL上生长速率要明显高一 些；同时进行了两种细胞的死活染色，染色结果也表明在该材料中培养细胞并没有对细胞 有毒性；此外，采用本实用新型PCL复合支架产品与直接将PCL黏贴在硬质塑料上相比，采 用本实用新型结构PCL外观更加均匀且结构不易被破坏。
[0086] 对于神经胶质细胞，比较了静止和离心接种方式下，细胞生长状态。胶质细胞属于 原代细胞株，所以增值能力不强，PCL材料对细胞无毒性，但增值能力有限。从结果来看离 心方法下，细胞在第3天到第5天有一个比较好的增殖率，但整体来看离心接种方式下各孔 之间差异较大，平行性不好。因此，在试验中可采用点种静置方法接种细胞。该材料可以作 为原代细胞三维培养的一种很好的选择。
【主权项】
1. 一种用于细胞培养的复合支架，包括支架结构和支撑结构，其中，所述支架结构包括 通过静电纺丝方法制得的纳米纤维膜，所述支撑结构包括中部封闭、两端分别具有端口一 和端口二的空腔结构，所述支架结构贴合在所述支撑结构端口一的端面上。2. 如权利要求1所述的复合支架，其特征在于：所述支架结构为具有三维多孔结构的 纳米纤维膜。3. 如权利要求2所述的复合支架，其特征在于：所述纳米纤维的直径为100~lOOOnm。4. 如权利要求1-3任一项所述的复合支架，其特征在于：所述支架结构的材料选自以 下组中的一种：聚己内酯、聚乳酸、左旋聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚碳酸酯、聚氨酯、聚 磷酸酯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚羟基丁酸戊酸酯、聚羟基丁 酸己酸酯、聚酯酰胺、聚氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、胶原蛋白、壳聚糖、改性壳聚糖、淀粉、纤 维素、改性纤维素、明胶、纤维蛋白、丝素蛋白、透明质酸、海藻酸、硫酸软骨素、肝素、琼脂、 葡聚糖、褐藻酸。5. 如权利要求1所述的复合支架，其特征在于：所述支撑结构通过3D打印制作。6. 如权利要求5所述的复合支架，其特征在于：所述支撑结构的横截面为圆形，纵截面 为正方形、矩形或梯形。7. 如权利要求6所述的复合支架，其特征在于：所述支撑结构的横截面为圆形，纵截 面为梯形，且所述端口一的直径小于端口二的直径。8. 如权利要求5-7任一项所述的复合支架，其特征在于：所述支撑结构端口二包括向 外延伸的边缘，所述边缘上设置有凸起。9. 如权利要求5-7任一项所述的复合支架，其特征在于：所述支撑结构还包括一固定 环，所述固定环套接在所述端口一外侧，所述固定环内壁设置有柱状凸起。
【专利摘要】本实用新型涉及一种用于细胞培养的复合支架，复合支架包括支架结构和支撑结构，其中，所述支架结构包括通过静电纺丝方法制得的纳米纤维膜，所述支撑结构包括中部封闭、两端分别具有端口一和端口二的空腔结构，所述支架结构贴合在所述支撑结构端口一的端面上。本实用新型用于细胞培养的复合支架能够模拟天然细胞外基质的结构特点，且克服现有技术中三维支架不易操作、刚性差、易受损的缺陷。
【IPC分类】C12N5/00, D04H1/728, B33Y10/00, D01D5/00, B82Y30/00
【公开号】CN205077067
【申请号】CN201520551670
【发明人】崔雪峰, 魏搏超, 张海礁, 孙贺
【申请人】天津卫凯生物工程有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年7月27日