一种改进的低频细胞循环分选系统的制作方法
【技术领域】
[0001 ]本实用新型涉及一种改进的低频细胞循环分选系统。
【背景技术】
[0002]目前国内外的免疫磁性分选细胞技术主要有德国美天旎公司的分离柱分离，加拿大干细胞公司的磁极分离。这些细胞分选技术存在着分选低频细胞(含量低的细胞)的能力差，分选样品量不能满足临床的需求等问题。另外，在磁极分选过程中由于温度问题等，血液细胞容易被损伤及粘连成簇。
【实用新型内容】
[0003]为了解决这些问题，本实用新型公开了一种改进的低频细胞循环分选方法，包括如下步骤:
[0004]第一步:在控制系统设定分选的流速、磁场强度和分离区温度；
[0005]第二步:在进样室中接收临床上采集的血样与磁珠和抗体孵育完成后的血样；
[0006]第三步:在混合室中同时接收通过样品栗从进样室流来的血样及通过缓冲液栗流来的缓冲液后，样品与缓冲溶液以一定比例混合后形成混合样；
[0007]第四步:分离栗将混合样输送至圆形分离区域，在分离区域中混合样中与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞被磁场吸引滞留在磁场内，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞从磁场中流出；
[0008]第五步:圆形半导体制冷片覆盖在圆形分离区域上方，以对分离区域的温度进行控制防止血细胞在磁场中被损伤；
[0009]第六步:没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管；
[0010]第七步:然后，通过控制系统将磁场极性反转，防止与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞粘连成簇，之后去掉磁场，用洗脱液洗脱与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞，并收集至回收样品管；
[0011 ]第八步:在装有没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞的回收样品管中加入第二种磁珠和抗体孵育之后形成二次样品，将回流软管通过接口插入此回流样品管底部，控制系统打开回流软管上的回流栗使二次样品回流至混合室中，同时通过缓冲液栗使缓冲液流至混合室中，二次样品与缓冲溶液以一定比例混合后形成二次混合样；
[0012]第九步:然后重复上述第四步至第七步即可完成二次分选；
[0013]第十步:然后不断重复上述第八步至第九步即可完成多次分选。
[0014]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选方法，其中，磁场强度在200-600mT之间可调，分离区温度在25-35°C可调。
[0015]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的一个实施例中，包括一个进样室、一个缓冲液瓶、一个混合室、磁极平台、回收样品管和控制系统，进样室通过管道与混合室连接，缓冲液瓶通过管道与混合室连接，磁极平台的前部设有一个圆形分离区域，磁极平台的圆形分离区域分布四个可调节的电磁场，圆形分离区域上方覆盖有圆形半导体制冷片，混合室下部的管道“U”形穿过磁极平台的圆形分离区域后连接至回收样品管，回收样品管侧面开有接口，连接至混合室的回流软管通过接口可拆卸插入至回收样品管底部，进样室和混合室之间、缓冲液瓶和混合室之间、混合室下部穿过磁极平台的圆形分离区域的管道上及连接至混合室的回流软管分别设有样品栗、缓冲液栗、分离栗和回流栗，样品栗、缓冲液栗、分离栗、回流栗和电磁铁与控制系统耦合连接。
[0016]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的上述实施例中，系统可以分选的样品量为0.5ml至50ml。
[0017]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的另一个实施例中，进样室、缓冲液瓶和混合室为两个，磁极平台的前部设有两个圆形分离区域，每个圆形分离区域上方覆盖有圆形半导体制冷片，磁极平台的每个圆形分离区域分布四个可调节的电磁场，每个混合室下部的管道“U”形穿过磁极平台的其中一个圆形分离区域后连接至回收样品管。
[0018]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的上述实施例中，系统可以分选的样品量为0.5ml至100ml。
[0019]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的另一个实施例中，磁极平台的前部设有四个圆形分离区域，磁极平台的每个圆形分离区域分布四个可调节的电磁场，每个圆形分离区域上方覆盖有圆形半导体制冷片，每个混合室下部的管道“U”形穿过磁极平台的其中两个圆形分离区域后连接至回收样品管。
[0020]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的上述实施例中，系统可以分选的样品量为0.5ml至200ml。
[0021]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的实施例中，样品栗、缓冲液栗、分离栗和回流栗均为蠕动栗，管道为弹性管道。
[0022]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选系统的实施例中，样品栗、缓冲液栗、分离栗和回流栗附近设有电动阀，电动阀与控制系统连接。
[0023]有益效果
[0024]本实用新型公开了一种改进的低频细胞循环分选系统，采用循环液流设计和双通路分选设计，应用于免疫磁性分选，来提高低频细胞分选能力和分选的样品量，主要有以下优点:
[0025](I)可以直接应用于临床大量样品的制备，可分析血样的样品量为0.5ml至200ml;
[0026](2)可以同时分选两个样品或者对比样品，也可以同时进行正选和负选；
[0027](3)可以进行多次循环分选，适用于低频细胞分选；
[0028](4)本实用新型中的圆形半导体制冷片覆盖在圆形分离区域上方，可以对分离区域的温度进行控制，从而防止血细胞在磁场中被损伤；
[0029](5)本实用新型在没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管后，通过控制系统将磁场极性反转，可以防止与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞粘连成簇。
【附图说明】
[0030]图1是本实用新型公开的一种改进的低频细胞循环分选系统的第一个实施例的结构示意图。
[0031]图2是本实用新型公开的一种改进的低频细胞循环分选系统的第二个实施例的结构示意图。
[0032]图3是本实用新型公开的一种改进的低频细胞循环分选系统的第三个实施例的结构示意图。
【具体实施方式】
[0033]下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步详细描述，但不作为对本实用新型的限定。
[0034]如图1、图2和图3中所示，本实用新型公开了一种改进的低频细胞循环分选方法，包括如下步骤:
[0035]第一步:在控制系统设定分选的流速、磁场强度和分离区温度；
[0036]第二步:在进样室01中接收临床上采集的血样与磁珠和抗体孵育完成后的血样；
[0037]第三步:在混合室03中同时接收通过样品栗09从进样室01流来的血样及通过缓冲液栗10流来的缓冲液后，样品与缓冲溶液以一定比例混合后形成混合样；
[0038]第四步:分离栗11将混合样输送至圆形分离区域15，在分离区域15中混合样中与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞被磁场吸引滞留在磁场内，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞从磁场中流出；
[0039]第五步:圆形半导体制冷片06覆盖在圆形分离区域15上方，以对分离区域15的温度进行控制防止血细胞在磁场中被损伤；
[0040]第六步:没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管；
[0041 ]第七步:然后，通过控制系统将磁场极性反转，防止与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞粘连成簇，之后去掉磁场，用洗脱液洗脱与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞，并收集至回收样品管，并收集至回收样品管08，用标有“+”的回收样品管08收集靶细胞，用标有的回收样品管08收集非靶细胞；
[0042]第八步:在装有没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞的回收样品管08中加入第二种磁珠和抗体孵育之后形成二次样品，将回流软管13通过接口 14插入此回流样品管08底部，控制系统打开回流软管13上的回流栗12使二次样品回流至混合室03中，同时通过缓冲液栗10使缓冲液流至混合室03中，二次样品与缓冲溶液以一定比例混合后形成二次混合样；
[0043]第九步:然后重复上述第四步至第七步即可完成二次分选；
[0044]第十步:然后不断重复上述第八步至第九步即可完成多次分选。
[0045]本实用新型公开的上述一种改进的低频细胞循环分选方法，其中，磁场强度在200-600mT之间可调，分离区温度在25-35°C可