用于多重抗微生物剂敏感性测试的抗微生物剂盒和方法与流程

相关申请的参考本申请要求2018年6月8日提交的美国临时专利申请号62/682571的优先权的权益，其全部公开特此通过参考结合。领域本发明总体上涉及抗微生物剂敏感性测试，并且更具体地讲涉及用于临床样品的快速抗微生物剂敏感性测试的装置和方法。背景当前的肉汤稀释法抗微生物剂敏感性测试(ast)方法使用单个盒，其具有预先填充了以所需测试浓度提供的抗微生物剂化合物的少于130个储器。抗微生物剂化合物可能在溶液中表现出较差的稳定性。结果，在实验室实践中使用包含干燥的抗微生物剂化合物的盒，因为它们可在室温下运输和储存而没有抗微生物剂的降解。干燥的盒设计用于以水溶液重构。为了防止交叉污染，ast方法依赖于将相同浓度的微生物转移到每个储器中，使得每个盒均设计为与单种被测试微生物一起使用。而且，每个盒均带有抗微生物剂化合物的预设布局和浓度范围，这限制为各种患者样品探索更新的药物浓度或类型的范围。因此，需要用于稳健的多重测定设计的更通用的盒系统。此外，需要增加每个患者盒的储器数量，以便测试可用于耐药性病原体的大量抗微生物剂。概述一方面，本公开提供一种盒，其既可用于源自人类样品的微生物的抗微生物剂敏感性测试，又可用于质量控制(qc)，从而降低进行ast系统的定期常规质量控制的成本和复杂性。本公开这个方面的盒可包括第一多个储器，其包含至少8、10、12、14、16、18、20、22或25种不同的抗微生物剂，每种抗微生物剂在不同储器中以多种不同的量或浓度存在，从而定义稀释系列。本公开这个方面的盒也可包括以下布置，其将多个这些稀释系列布置成“qc组块”，使得每个组块包含可利用相同qc微生物的多种抗微生物剂。在各种实施方案中，盒包括至少96个储器或至少384个储器。在一些情况下，稀释系列可包括多个浓度，这些浓度定义用于患者样品和质量控制(qc)生物体的抗微生物剂的预期最小抑制浓度(mic)的范围，并且每个稀释系列可不同地包括至少一个高于或低于用于患者样品和qc生物体的抗微生物剂的预期mic范围的浓度。在一些情况下，多个抗微生物剂稀释系列包含足够的稀释程度，以包括所指示的qc生物体的最小抑制浓度(mic)。每个稀释系列可包括至少一个低于a)抗微生物剂具有适应症的最低临床折点或b)所指示的qc微生物的qc范围的下限的较低者的浓度。最低浓度可为第二低浓度的一半浓度。最低浓度可小于第二低浓度的一半浓度。最低浓度可大于第二低浓度的一半浓度。每个稀释系列可包括至少一个高于抗微生物剂具有适应症的最高临床折点和用于qc组块的生物体的qc范围的上限的较高者的浓度。最高浓度可为第二高浓度的两倍。最高浓度可小于第二高浓度的两倍。最高浓度可大于第二高浓度的两倍。在一些情况下，用于患者样品的抗微生物剂的预期mic范围与用于qc生物体的抗微生物剂的预期mic范围不同。盒的两个或更多个储器可任选地包含足够量的抗微生物剂化合物以抑制多种革兰氏阴性微生物的生长。以高浓度存在的抗微生物剂化合物可为碳青霉烯。盒任选地在小组的每个qc组块中包括至少一个足够生长的储器。在某些情况下，盒包含限定第一和第二方向的正交轴；在这些情况下，当将各种抗微生物剂的稀释系列沿第一方向(例如垂直地)定向时，可指定盒的接种沿相同方向(即第一方向)或沿第二方向发生。在一些情况下，多个稀释系列可沿第一方向定向，并且每个qc组块可包含在第二方向上彼此相邻的多个稀释系列。多种抗微生物剂中每一种的稀释系列可沿第一方向定向，并且微生物样品可沿第一方向接种。继续本公开的该方面，盒可包括一种或多种选自由以下组成的列表的抗微生物剂：阿米卡星(amikacin)、阿米卡星-磷霉素(amikacin-fosfomycin)、阿莫西林(amoxicillin)、阿莫西林-克拉维酸盐(amoxicillin-clavulanate)、氨苄西林(ampicillin)、氨苄西林-舒巴坦(ampicillin-sulbactam)、阿奇霉素(azithromycin)、阿奇霉素-阿维巴坦(azithromycin-avibactam)、阿洛西林(azlocillin)、氨曲南(aztreonam)、氨曲南-阿维巴坦(aztreonam-avibactam)、贝西沙星(besifloxacin)、比阿培南(biapenem)、卡达唑胺(cadazolid)、羧苄西林(carbenicillin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢唑林(cefazolin)、头孢地尼(cefdinir)、头孢托仑(cefditoren)、头孢吡肟(cefepime)、头孢吡肟-他唑巴坦(cefepime-tazobactam)、头孢他美(cefetamet)、头孢地尔(cefiderocol)、头孢克肟(cefixime)、头孢美唑(cefmetazole)、头孢尼西(cefonicid)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢替坦(cefotetan)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢洛扎-他唑巴坦(ceftolozane-tazobactam)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢丙烯(cefprozil)、头孢洛林(ceftaroline)、头孢洛林-阿维巴坦(ceftaroline-avibactam)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢他啶-阿维巴坦(ceftazidime-avibactam)、头孢布烯(ceftibuten)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢吡普(ceftobiprole)、头孢洛扎-他唑巴坦(ceftolozane-tazobactam)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢噻吩(cephalothin)、氯霉素(chloramphenicol)、西诺沙星(cinoxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、克拉霉素(clarithromycin)、克林沙星(clinafloxacin)、克林霉素(clindamycin)、粘菌素(colistin)、达巴万星(dalbavancin)、达托霉素(daptomycin)、德拉沙星(delafloxacin)、地红霉素(dirithromycin)、多利培南(doripenem)、多西环素(doxycycline)、依诺沙星(enoxacin)、伊拉瓦环素(eravacycline)、厄他培南(ertapenem)、红霉素(erythromycin)、法罗培南(faropenem)、非达霉素(fidaxomicin)、非那沙星(finafloxacin)、氟罗沙星(fleroxacin)、磷霉素(fosfomycin)、夫西地酸(fusidicacid)、加雷沙星(garenoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)、庆大霉素(gentamicin)、gepotidacin、格帕沙星(grepafloxacin)、艾拉普林(iclaprim)、亚胺培南(imipenem)、亚胺培南-雷利巴坦(imipenem-relebactam)、卡那霉素(kanamycin)、来法莫林(lefamulin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、左氧那地沙星(levonadifloxacin)、利奈唑胺(linezolid)、linopristin-flopristin、洛美沙星(lomefloxacin)、氯碳头孢(loracarbef)、美西林(mecillinam)、美罗培南(meropenem)、甲氧西林(methicillin)、美洛西林(mezlocillin)、米诺环素(minocycline)、拉氧头孢(moxalactam)、莫西沙星(moxifloxacin)、萘夫西林(nafcillin)、萘啶酸(nalidixicacid)、奈替米星(netilmicin)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、奥马环素(omadacycline)、奥利万星(oritavancin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素(penicillin)、哌拉西林(piperacillin)、哌拉西林-他唑巴坦(piperacillin-tazobactam)、普拉佐米星(plazomicin)、多粘菌素b(polymyxinb)、奎奴普丁-达福普汀(quinupristin-dalfopristin)、阿祖培南(razupenem)、利福平(rifampin)、索利霉素(solithromycin)、司帕沙星(sparfloxacin)、磺胺异噁唑(sulfisoxazole)、硫培南(sulopenem)、特地唑胺(tedizolid)、替考拉宁(teicoplanin)、特拉万星(televancin)、泰利霉素(telithromycin)、四环素(tetracycline)、替卡西林(ticarcillin)、替卡西林-克拉维酸盐(ticarcillin-clavulanate)、替加环素(tigecycline)、妥布霉素(tobramycin)、甲氧苄啶(trimethoprim)、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)、丙大观霉素(trospectomycin)、万古霉素(vancomycin)、阿库来菌素a(aculeacina)、两性霉素b(amphotericinb)、卡泊芬净(caspofungin)、克霉唑(clotrimazole)、氟康唑(fluconazole)、氟胞嘧啶(flucytosine)、5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine)、灰黄霉素(griseofulvin)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、制霉菌素(nystatin)、粪壳菌素(sordarin)、特比萘芬(terbinafine)、法硼巴坦-美罗培南(vaborbactam-meropenem)、伏立康唑(voriconazole)及其盐或水合物形式。在各种实施方案中，用于抗微生物剂的qc生物体可包括金黄色葡萄球菌金黄亚种(staphlococcusaureusssp.aureus)(atcc29213)；粪肠球菌(enterococcusfaecalis)(atcc29212)；大肠埃希氏菌(escherichiacoli)(atcc25922)；肺炎克雷伯菌肺炎亚种(klebsiellapneumoniaessp.pneumoniae)(atcc700603)；肺炎克雷伯菌(klebsiellapneumoniae)(atccbaa2814)；铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)(atcc27853)；粪肠球菌(e.faecalis)(atcc51299)；金黄色葡萄球菌(s.aureus)(baa-1708)；金黄色葡萄球菌(s.aureus)(baa-977)；金黄色葡萄球菌(s.aureus)(atcc43300)；肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)(atcc49619)和trichotheciumplasmoparae(atcc13353)。本发明该方面的示例性盒布局呈现于图2b和2c中。在另一方面，本公开涉及一种使用盒进行ast的方法，所述盒包含至少96或至少384个储器和至少8、10、12、14、16、18、20、25或30种独特的抗微生物剂，非限制性地包括以上呈现的公开的方面的盒。所述方法包括指示用户选择以系统软件进行临床或qc样品测试。在一些情况下，如果选择了qc样品测试，则所述方法包括指示用户将两种或更多种不同的qc生物体与盒一起装载到系统中，将两种或更多种不同的qc生物体接种到盒中，在促进微生物生长的条件下将盒温育2-18小时之间的时间段，并进行一种或多种ast测定以确定盒上抗微生物剂对qc生物体的mic。在其中直至达到足够的生长测定阈值才开始一种或多种ast测定的实施方案中，足够的生长测定包括对一个或多个包含代谢探针且没有抗微生物剂的接种储器进行一个或多个光学测量，该足够的测定阈值定义为预定的光学测量值，并且足够的测定阈值对于不同的生物体可以不同。代谢探针可包含刃天青和光学测量可包括荧光测量。一种或多种ast测定可包括代谢测定和表面结合测定。在确定mic之前，可对盒上的多个储器进行1-3次的生长查询。在另一方面，本公开涉及一种用包含至少96或至少384个储器和至少8种独特的抗微生物剂的盒进行ast或为ast提供qc的方法，每种抗微生物剂以多个浓度存在，所述个浓度定义稀释系列，该稀释系列跨越预期的临床折点范围和预期的qc生物体折点范围两者。所述方法包括用包含微生物的患者来源的样品或至少一种用于盒上存在的抗微生物剂的qc生物体接种盒，在促进微生物生长的条件下将盒温育2-24小时之间的时间段，并进行一种或多种测定以确定盒上多种抗微生物剂对测试样品或qc生物体的最小抑制浓度(mic)。如果盒以患者来源的样品接种，则确定测试样品的mic的步骤包括比较在临床折点范围内的抗微生物剂浓度下的微生物生长。如果盒以qc生物体接种，则确定qc生物体的mic的步骤包括比较在预期的qc范围内的抗微生物剂浓度下的qc生物体生长。在一些情况下，每种抗微生物剂稀释系列均重复两次或更多次，并用两个或更多个患者来源的样品接种盒。如果接种了革兰氏阴性微生物，则将盒的至少两个储器用与稀释系列所接受的不同数量或浓度的微生物进行接种，并且该浓度可能高于盒的其他储器。然后将盒在促进微生物生长的条件下温育2-24小时之间的时间段，并进行一种或多种测定以确定盒上多种抗微生物剂对患者来源的样品或qc生物体的mic。在一些情况下，在确定mic之前将盒上多个储器的生长查询1-5次。在使用qc生物体的情况下，所述方法还任选地包括将抗微生物剂对qc生物体的mic与参考范围进行比较，并且如果mic不在参考范围内，则向ast系统的用户发送抗微生物剂的mic超出范围的信号。在另一方面，本公开涉及一种用多重盒(例如包含至少96或至少384个储器和至少8种独特的抗微生物剂，每种抗微生物剂存在于重复两次或更多次的稀释系列中)进行ast的方法，其包括上述步骤。在本公开的任何前述方面的一些实施方案中，在确定mic的测定之前，查询不超过10%的储器以评估微生物的生长。在仍然另一方面，本公开涉及一种用于多重ast测试的盒，其包含组织成多个相同的储器阵列的多个储器，每个储器阵列定义ast小组并且包含多个浓度的多种抗微生物剂。在一些情况下，每个储器阵列可包括包含不同数量的抗微生物剂并定义抗微生物剂的稀释系列的多个储器以及至少一个不包含抗微生物剂的孔。或者或另外，盒可包括密封至少一个储器阵列的至少一个可移动的覆盖物，比如膜或盖；一些实施方案使用多个可移动的覆盖物，每个可移动的覆盖物密封一个储器阵列。在另一个实施方案中，本公开涉及一种用于进行抗微生物剂敏感性测试(ast)的包含本公开的盒的试剂盒。该试剂盒可进行：a)ast方法，其包括以下步骤：用患者来源的样品接种盒，基于不同抗微生物剂浓度下细胞生长的比较评估抗微生物剂的最小抑制浓度(mic)和对抗微生物剂的敏感性之一和/或b)质量控制(qc)方法，其包括以下步骤：用至少一种指定用于盒上存在的抗微生物剂的qc生物体接种盒，和基于在不同抗微生物剂浓度下细胞生长的比较和用于qc生物体的正常范围，评估抗微生物剂的mic是否处于用于qc生物体的正常范围内。该试剂盒可为自动化的。该试剂盒可包含沿相同方向定向的稀释系列，使得用患者来源的样品接种盒不会在盒内造成污染。该试剂盒还可包含多种qc生物体，其用于对盒上存在的抗微生物剂提供质量控制，其中盒中的多个不同孔同时用多种qc生物体进行接种。前述列表旨在示例而非限制本公开的方面和实施方案，并且本领域的技术人员将意识到，可以本领域目前已知的方式修改这些方面和实施方案而不背离本公开的精神。附图简述当结合附图考虑时，根据以下详细描述将更清楚地意识到以上以及其他特征。然而，附图仅出于说明的目的而不是为了限制。图1描绘ast母盒与可获得的ast测定板的空间要求。与50个测定板相比较，3个96孔板的母盒需要显著更少的储存空间。图2a描绘3板母盒上抗微生物剂的布局，该母盒包含已知起抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌两者作用的抗微生物剂小组、已知抗革兰氏阴性细菌的抗微生物剂小组以及已知具有抗革兰氏阳性细菌活性的抗微生物剂小组。每种抗微生物剂均以3字母的常规缩写描绘。图2b描绘用于革兰氏阳性细菌的ast系统的示例性384孔盒的布局，和图2c描绘用于革兰氏阴性细菌的示例性384孔盒的布局。每个盒包括多种抗微生物剂的多个稀释系列；每个稀释系列还包括规定的抗微生物剂的质量控制生物体。在该图中，对于每个稀释系列，抗微生物剂用表9中呈现的3字母代码指涉在最上面一行，和质量控制生物体指定在中间一行。系列的每孔中抗微生物剂的浓度描绘于最下面一行。浓度值变暗表示浓度预计超出抗微生物剂对质量控制生物体的mic范围，而变浅的值表示浓度预计在范围内。每个带有在垂直组块中聚集的抗生素稀释系列的板的设计使得多种质量控制生物体能够在单次运行中进行加载和处理。图2d描绘用于革兰氏阴性细菌的ast系统的示例性384孔盒的布局，和图2e描绘用于革兰氏阳性细菌的示例性384孔盒的布局。图3描绘用于母盒ast测定的接种工作流程的示意图。图4描绘用于从用于ast测定的母盒中建立患者盒的单个孔流程图。图5描绘包含抗革兰氏阴性细菌的抗微生物剂的患者盒384孔的最终布局。图6描绘包含抗革兰氏阳性细菌的抗微生物剂的患者盒384孔的最终布局。图7描绘细菌生长结果，显示每种抗微生物剂的最小抑制浓度(mic)值。最上面一行中的图表含有来自384孔板的数据。最下面一行中的图表含有来自96孔板的数据。图8描绘在来自两个不同实验(左图)以及来自384孔板上的中央孔相对于边缘孔(右图)中在384孔板中于ast测定期间的体积损失百分比。图9描绘本公开实施方案的革兰氏阳性和革兰氏阴性样本的说明书和样品处理。图10a-b描绘患者盒的广谱板布局。图11a-b描绘革兰氏阳性或革兰氏阴性抗微生物剂的患者盒布局。定义本文指涉的专利和科学文献建立了本领域技术人员可获得的知识。本文引用的已发布的美国专利、授权的申请、公布的外国申请和参考文献特此通过参考结合至好像每个具体地和单独地表明通过参考结合的相同程度。如本文使用的，对变量的数值范围的叙述旨在传达可在变量等于该范围内任何数值的情况下实践本发明。因此，对于固有地离散的变量，变量可等于数值范围内的任何整数值，包括范围的端点。类似地，对于固有地连续的变量，变量可等于数值范围内的任何实值，包括范围的端点。例如但不限于，如果变量固有地为离散的，则描述为具有0-2之间的数值的变量可取数值为0、1或2，并且如果变量固有地为连续的，则可取数值为0.0、0.1、0.01、0.001或≥0和≤2的任何其他实值。除非另外具体指明，否则如本文使用的词语“或”以包括性的含义“和/或”而不是排他性的含义“要么/或”使用。为了使本发明更易于理解，下面首先定义某些术语。在整个说明书中阐述了以下术语和其他术语的另外定义。动物：如本文使用的术语“动物”是指动物界的任何成员。在一些实施方案中，“动物”是指处于任何发育阶段的人类。在一些实施方案中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人类动物。在某些实施方案中，非人类动物为哺乳动物(例如啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、绵羊、牛、灵长类动物和/或猪)。在一些实施方案中，动物包括(但不限于)哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼、昆虫和/或蠕虫。在一些实施方案中，动物为转基因动物、基因工程动物和/或克隆动物。抗微生物剂：如本文使用的抗微生物剂是指杀死(杀微生物的)微生物、减弱(抑制微生物的)或抑制微生物功能的物质。抗微生物剂可为化合物、生物产物(比如肽、蛋白、抗体或核酸)或小分子。其可为天然存在的产物或合成产物。大约或约：如本文使用的适用于一个或多个目标数值的术语“大约”或“约”是指类似于所述参考值的数值。在某些实施方案中，术语“大约”或“约”是指在任一方向(大于或小于)落入所述参考值的25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少范围内的数值范围，除非另外说明或以其他方式从上下文中可明显看出(除非在这种数字超过可能数值的100%)。各种抗微生物剂的临床折点范围(clinicalbreakpointranges)提供在临床和实验室标准协会(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)(clsi)出版物“performancestandardsforantimicrobialsusceptibilitytesting”、fda网站https://www.fda.gov/drugs/developmentapprovalprocess/developmentresources/ucm575163.htm和eucast网站http://www.eucast.org/clinical_breakpoints/中。这组数值确定通过ast测定确定的mic结果的解释标准。直至并且包括敏感值的所有mic值均将报告为对临床最低值敏感。对于高于敏感值的mic，取决于被测试的抗微生物剂和种类，可报告中等、敏感剂量依赖性和耐药性值。例如，对于环丙沙星和肠杆菌科(enterobacteriaceae)，敏感mic截断值为1μg/ml；mic为2μg/ml报告为中等；和所有的mic高于4μg/ml均报告为耐药性。临床相关稀释范围：如本文使用的“临床相关稀释范围”为临床折点范围加上低于敏感值的两个稀释度和高于耐药性值的一个稀释度。例如，对于环丙沙星和肠杆菌科(enterobacteriaceae)而言，敏感mic截断值为1μg/ml，和所有的mic高于4μg/ml报告为耐药性，因此临床相关稀释范围涵盖0.25μg/ml-8μg/ml。递送：如本文使用的术语“递送”包括局部和全身递送两者。例如，抗微生物剂的递送包括其中将抗微生物剂递送至目标组织并表达编码的蛋白且保留在目标组织内的情况(也称为“局部分布”或“局部递送”)以及其中将抗微生物剂递送至目标组织并表达编码的蛋白且分泌到患者的循环系统(例如血清)中，和全身分布并被其他组织吸收的情况(也称为“全身分布”或“全身递送”)。稀释范围：如本文使用的稀释范围是指给定抗微生物剂的系列稀释(或“二倍”稀释)范围，比如肉汤微量稀释ast的标准稀释范围。例如，对于代表性的抗微生物剂(比如环丙沙星)，该范围可包括以下稀释度：16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml、0.125μg/ml等。系列稀释可指除2(二倍稀释)以外的倍数的稀释度。在某些情况下，可用5倍稀释或10倍稀释进行系列稀释，以覆盖稀释次数内期望的最小和最大范围。然而，出于本文描述的实例的目的，除非另外表明，否则稀释倍数为2。半衰期：如本文使用的术语“半衰期”为数量比如核酸或蛋白浓度或者活性下降到在时间段开始时所测量的其数值的一半所需的时间。改善、增加或减少：如本文使用的术语“改善”、“增加”或“减少”或语法等同形式表示相对于基线测量，比如在开始本文描述的治疗之前在同一个体中的测量，或在没有本文描述的治疗的情况下在对照受试者(或多位对照受试者)中的测量的数值。“对照受试者”为患有与所治疗的受试者相同形式的疾病，具有与所治疗的受试者大约相同年龄的受试者。母盒、患者盒、测试盒：如本文使用的母盒(mastercartridge)为母体盒(parentcartridge)，通过将抗微生物剂化合物从母盒分配至子患者盒而从其制备子“患者”或“样品”盒。在一些实施方案中，子盒具有抗微生物剂化合物的系列稀释，而母盒包含抗微生物剂化合物的浓缩或冻干形式。如本文使用的患者盒、子盒、测试盒、样品盒或样品测试盒可互换使用，其不同于盒。微生物：如本文使用的微生物为生物体，比如细菌、病毒、原生动物、藻类、真菌或任何微生物剂，其可在人类或动物受试者中引起疾病。微生物也可能在受试者中保持无限期潜伏，并且可能永远不会引起疾病。最小抑制浓度(mic)：如本文使用的抗微生物剂的mic是指在其浓度下可检测其抗微生物活性的抗微生物剂的最低浓度。患者：如本文使用的术语“患者”或“受试者”是指可例如出于实验、诊断、预防、美容和/或治疗目的而给予所提供的组合物的任何生物体。典型的患者包括动物(例如哺乳动物，比如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和/或人类)。在一些实施方案中，患者为人类。人类包括产前和产后形式。药学上可接受的：如本文使用的术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的益处/风险比相称的物质。储器：如本文使用的术语“储器”用于表示用于容纳组合物比如试剂或样品、用于储存、或用于准备或用于进行测定的容纳空间。该术语可与例如在盒或多孔微量滴定板中的“孔”互换使用。储器可为单孔结构。储器也可为任何形式和形状，包括(但不限于)圆形孔或者任何形状或大小的孔或者细长通道。储器旨在容纳流体或干燥/冻干的粉末物质。样品：如本文使用的术语“样品”是指生物样品、患者样品或含微生物的样品。受试者：如本文使用的术语“受试者”是指人类或任何非人类动物(例如小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。人类包括产前和产后形式。在许多实施方案中，受试者为人。受试者可为患者，其是指提交给医疗提供者以诊断或治疗疾病的人。术语“受试者”在本文中可与“个体”或“患者”互换使用。受试者可患有或易患疾病或障碍，但是受试者可能或可能不显示疾病或障碍的症状。基本上：如本文使用的术语“基本上”是指表现出全部或接近全部范围或程度的所关注的特征或特性的定性状态。生物学领域的普通技术人员将理解，生物学和化学现象很少(如果曾经有的话)去完成和/或继续完成或达到或避免绝对结果。因此，术语“基本上”在本文中用于捕获许多生物学和化学现象中固有的潜在完整性不足。目标微生物：如本文使用的目标微生物为所讨论的抗微生物剂作为杀微生物、抑制微生物或抑制剂来破坏微生物与其感染性相关的某些功能对其有效的微生物。治疗有效量：如本文使用的术语治疗剂的“治疗有效量”意指当给予患有或易患疾病、障碍和/或病症的受试者时足以治疗、诊断、预防和/或延缓疾病、障碍和/或病症的症状的发作的量。本领域的普通技术人员将意识到，一般地经包含至少一个单位剂量的给药方案来给予治疗有效量。治疗：如本文使用的术语“治疗”(“treat”、“treatment”或“treating”)是指用于部分或完全缓解、改善、减轻、抑制、预防特定疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征、延缓其发作、降低其严重程度和/或降低其发生率的任何方法。为了降低发展出与疾病相关的病理学的风险，可将治疗给予不表现出疾病体征和/或仅表现出疾病早期体征的受试者。定性敏感性结果(qualitativesusceptibilityresult)(qsr)：如本文使用的qsr是指确定抗微生物剂是否对微生物有作用，以及微生物是否对抗微生物剂敏感，反之亦然。例如，微生物在存在抗微生物剂的情况下停止生长表明抗微生物剂对微生物有作用。详述本公开尤其提供使用单个盒进行多重ast的系统和方法。通常，本公开针对多重ast的实施方案使用包含以下数量的储器的盒，所述数量大于单个ast小组所需的储器数量(例如单个患者样品的ast分析所需的储器数量的两倍、三倍、四倍或更多倍)。在某些情况下，盒配置为在单个盒上为多个患者样品提供ast，从而有利地降低ast的每个患者样品的成本。或者或另外地，盒配置为包括多个ast小组(比如用于革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，用于特定类别的抗生素，比如广谱和窄谱抗生素)或用于特定类别的传染剂和/或抗生素的ast查询的其他特定小组。在使用中，以上呈现的本公开实施方案的多重盒可包括两个、三个或更多个ast小组，并且可装载有单个患者样品并且立即进行处理，或者可装载有多个患者样品(例如每个单独的ast小组一个样品)并进行处理，使得盒上的每个ast小组均装载有单独的患者样品，或者使得仅一个ast小组或仅两个ast小组为空的。一旦处理完毕，就可处理掉盒或可将其保存以将未使用的ast小组装载另外的患者样品。为了便于多次使用，多重盒可包括一个或多个密封属于每个ast小组的孔的膜，以防止在处理盒期间将流体引入到未使用的ast小组中。或者或另外地，在处理多重盒上的小组后，可清洗、抽吸和/或密封用过的孔，以防止其重复使用和污染盒中其他ast小组。本公开的盒也可设计为提供对ast系统和方法的质量控制。作为一个实例，clsi建议使用多种质量控制生物体对一系列抗微生物剂浓度进行ast系统的每天质量控制测试，所述抗微生物剂浓度可从对于给定的抗微生物剂预定的qc范围内最低浓度的一半延伸到预定的qc范围内最大浓度的多达两倍。质量控制生物体和qc范围通常对ast小组内的每种抗微生物剂均具有特异性，尽管同一类别内的抗微生物剂可具有相似或重叠的qc范围。本领域的技术人员将意识到，对于给定的ast小组，可能需要检查多种质量控制生物体和浓度范围。必须定期(例如每天或每周)对这些生物体和浓度范围进行qc，以确保对给定系统获得的ast结果的一致性和准确性，并且在针对给定抗微生物剂的质量控制生物体没有给出范围内的结果的情况下，可指示另外的测试。本领域的技术人员将意识到，对于使用当前ast系统的较小ast设施，质量控制测试的数量可能接近或者甚至超过所检查的临床样品的数量。本公开某些实施方案的ast系统使用具有数百个孔的盒，有利地允许对多种质量控制生物体的质量控制和/或在单个盒上进行的折点范围。因此，这些实施方案的ast系统和方法的优势为减少质量控制测试所需的成本和时间，并且在较低通量下提高ast的经济可行性。本公开还提供用于创建多个患者盒(即子盒)的母盒，其中患者盒用于进行抗微生物剂敏感性的一种或多种多重测定。患者盒具有比母盒更大数量的具有抗微生物剂的储器。在进行测试之后，患者盒或子盒为不必要的，而母盒可在多个这种测试组上重复使用，即母盒可用于制备多个子盒或患者盒。在另一方面，本发明提供一种具有超过150个包含一种或多种抗微生物剂的储器的患者盒。本发明提供一种通用系统，以测试更大数量的抗微生物剂和/或更大范围的抗微生物剂浓度，其可针对患者的需求进行定制。现有ast平台的缺点当前的自动化表型抗生素敏感性测试(ast)平台的一个重大缺陷为无法在其菜单上容纳新批准的抗生素，导致在新药批准与自动化ast菜单上出现之间平均延迟5年。这给感染性疾病(id)患者护理带来重大问题，因为新抗生素通常比通用替代品更加有效且毒性更小，而且在没有ast结果的情况下id医生无法有把握地开出靶向抗生素疗法。因此，新的高度有效的抗生素通常未被充分利用，导致死亡率和住院费用增加，后者主要是由于住院时间延长。这也损害抗生素管理计划(antibioticstewardshipprogram)的目标，该目标旨在尽可能快地为每位患者递送最合适的抗生素疗法。此外，这种延迟减小制药公司开发新抗生素的动机，鉴于当前的抗生素耐药性流行，这引起严重的国际关注。表型ast通过确定一组抗生素中的每一种抑制细菌生长的能力，来为医生提供关键的可行信息，以确定适当的抗生素疗法。这最通常通过肉汤微量稀释(bmd)来确定，该方法可确定一组抗生素中的每一种用于患者样品的最小抑制浓度(mic)。为了确定给定抗生素的准确mic，必须测试一定范围的浓度。因此，ast“小组”包含多种抗生素，每种抗生素均在一定范围的浓度下进行测试，每个“孔”均具有给定浓度下的抗生素。有3种在临床实验室市场上占主导地位的全自动化表型ast平台(即biomerieuxvitek2®、danahermicroscan®和becton-dickinsonphoenix®)以及一种新的快速ast新成员(acceleratediagnosticspheno®)。这些系统中的每一种均通过重复(比如每15-30分钟)测量其小组中所有孔的生长来进行表型ast测定。当系统的算法确定每种抗生素在生长和抑制之间具有足够的界定以进行准确的mic调用时，便会报告结果。尽管现有ast平台可提供准确的结果，但其对重复测量的依赖对可并行测试的抗生素数量产生重大工程限制。因此，这些平台仅限于少于20种抗生素的菜单(对于pheno®为1-14种，具体取决于生物体)。这种有限的空间为临床实验室客户提供非常有限的供包括在其小组上的抗生素选择：由于新抗生素每剂的价格通常为非专利药的多于10倍，因此客户通常被迫放弃这些抗生素来替代更具成本效益的选择。相比之下，实验室标准化协会中心(centersforlaboratorystandardsinstitute)(clsi)bmd参考方法，即“金标准”表型ast方法，在温育16-20小时之后进行单次光学读取。因此，该方法为简单起见而权衡了时间，仅需要单次“终点”读取即可。在一些情况下，该方法依赖于结果的视觉(肉眼)解释。当前的规定允许有限的抗微生物剂小组占据96孔板。通过模拟clsi参考方法的终点测定范例，本方法通过消除工程压力以减少每小组的孔数，从而使得超过150个储器或孔能够进行多重化。在一些实施方案中，本方法使超过200个孔能够进行多重测定。如美国专利号9834808中所述，该测定在仅温育3.5小时之后即提供准确的ast数据。为了容纳缓慢生长的菌株，比如万古霉素中介的金黄色葡萄球菌(vancomycin-intermediatestaphylococcusaureus)(visa)，该方法每小组测量<5个孔以确保达到“足够的生长”阈值，以开始测定处理。特别是，这允许使用384或1536孔的标准微量板形式，并且进一步使得能够并行处理具有超过200的任何孔数的小组。进一步地，该方法允许降低用于质量控制的成本。所描述的方法减轻用户的负担，因为其减少必须专用于qc的小组数量。在此，可在单个小组上并行运行2、3、4、5、6、7或8种qc生物体，而用于样品测试的那些的小组抗微生物剂浓度没有任何变化。通过qc生物体的这种多重化，需要更少的小组专用于qc。这对于实验室和小型实验室可能是有利的，特别是由于fda要求新的ast平台对所有药物进行规模化qc，可能需要将6种不同的qc菌株进行处理以qc全面的革兰氏阳性ast小组，和可能需要5种不同的qc菌株进行处理以qc全面的革兰氏阴性ast小组(表1)。因此，对于每天运行5-10个样品的实验室，每周将11个小组专用于qc可使成本增加>15%。因此，利用本文所述的多重qc方法，用于运行标准患者样品的易耗品成本可以更低。表1.全面的革兰氏阳性ast小组的qc和全面的革兰氏阴性ast小组的qc的数值.传统的自动化ast系统设计为类似于临床样品一样处理qc样品，每个样品专用一个小组。这是由vitek®2和phoenixtm易耗小组(卡片)和microscantm接种器(renok)的设计要求的。vitek和phoenix小组使用单个入口将样品分配至所有小组储器中，而microscan接种器则从单个稀释托盘中抽取相同样品的96个等分试样。因此，在这些系统上运行的每种qc生物体必须具有专用小组。进一步重要的是要注意，新系统所需的qc生物体数量可能会更高，这是因为1)fda最近要求对商用小组进行规模化qc，以及2)存在需要新qc生物体的新抗生素，比如β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂组合疗法。因此，能够实现多重qc的小组和用于处理这些小组的方法目前特别重要。为了满足fda对规模化qc的要求，新系统比如acceleratediagnosticsphenotm已经开发出复杂的盒(小组)，其会根据用户选择的临床或qc样品来改变所测试的抗微生物剂的实际浓度。尽管该方法具有独创性，但是能够进行这种“动态稀释”的所得盒的成本可能明显高于“静态浓度”小组比如本文所述的那些小组的成本。设计本文所述的小组和qc方法使得无论是处理临床还是qc(或测试)样品，每个包含抗微生物剂的储器均含有相同数量的药物。优选的方法为对临床和qc样品测试相同浓度的抗微生物剂，尽管应当注意的是，例如通过将两倍体积的溶液添加至储器中来运行qc以测试临床浓度的一半是可行的。多重测定通过对每个患者样品并行运行大量的多重测定，本平台能够满足3个特定的用户需求：首先，标准小组上可获得大量抗生素，包括最近批准的药物；第二，使用“完全”稀释系列；和第三，通过在折点区域周围进行重复测试来提高准确性。在一个实施方案中，可并行地用多于或等于3种抗微生物剂测试每个患者样品。在一个实施方案中，可以多于或等于4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或者多于或等于30种抗微生物剂并行测试每个患者样品。特别是对于革兰氏阴性生物体，可用多于或等于35种抗生素并行测试每个患者样品。除测试所有类别的所有标准通用抗生素之外，这些还可包括新批准和尚待批准的抗生素，包括(但不限于)：avycaz、vabomer、zerbaxa、特地唑胺(tedizolid)、替加环素(tigecycline)、多利培南(doripenem)、德拉沙星(delafloxacin)、奥利万星(oritavancin)、替拉万星(telavancin)、达巴万星(dalbavancin)、eracyclcycline、头孢地尔(cefiderocol)、奥马环素(omadacycline)、普拉佐米星(plazomicin)、艾拉普林(iclaprim)、来法莫林(lefamulin)、solithera、普利马辛(primaxin)、spr-994和mk-7655。可并行运行的大量孔进一步使得能够测试大的稀释范围。如本领域技术人员已知的，clsi标准为运行每种抗生素的系列(或两倍)稀释范围，以准确确定mic。范围包括“折点”范围，即fda和clsi确定药物将在临床上有效(“敏感，s”)或无效(“耐药，r”)的mic值。例如，药物比如苯唑西林对金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)的mic为2μg/ml或更低被解释为意指菌株敏感并且应使用该药物，而mic为4μg/ml和更高意指生物体耐药并且临床上无效。由于这些测试孔之间没有稀释度，因此大多数药物(比如厄他培南)对大肠埃希氏菌(escherichiacoli)具有另外的“中间”折点，以提供中间缓冲区域，其中临床使用通常取决于其他药物的折点。表2中提供已知对肠杆菌科(enterobacteriaceae)和铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)有效的常用抗微生物剂的示例性折点表。另外的信息可从以下参考文献中获得：临床和实验室标准协会(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)(clsi)出版物“performancestandardsforantimicrobialsusceptibilitytesting”、fda网站https://www.fda.gov/drugs/developmentapprovalprocess/developmentresources/ucm575163.htm和eucast网站http://www.eucast.org/clinical_breakpoints/。表2.用于确定两种示例性细菌对抗微生物剂的敏感性或耐药性的fda折点.随着微生物的进化和更新型抗生素耐药性微生物变种的出现，用于ast的抗微生物剂标准预设值无法满足解决和鉴定最适合每位患者治疗感染的抗微生物剂的需求。本发明部分地基于令人惊讶的发现，即超出临床稀释范围的抗微生物剂范围可证明是有利的。这有必要增加所测试的抗微生物剂稀释范围，以包括超出临床稀释范围的稀释度。在另一个实施方案中，本发明满足对响应于某些抗微生物剂或某些浓度的抗微生物剂而缓慢生长的微生物进行评估的需要，使得适当地验证感知的ast阳性结果，并且可提供对抗微生物剂的最终临床功效的另外洞察。由在此公开的多重化平台提供的通用性，提供不仅测试更多数量的抗微生物剂而且还测试更大范围的抗微生物剂稀释度的优势。多重化平台提供根据患者的需求、疾病症状和任何其他相关因素定制一组特定的测试的能力。可从fda资源(比如clsim100指南)、fda网站https://www.fda.gov/drugs/developmentapprovalprocess/developmentresources/ucm575163.htm中获得用于选择用于测试和报告抗微生物剂敏感性的抗微生物剂的指南。同样地，也可从以上引用的csli指南中获得有关测试条件的建议、常规质量控制建议、有关应考虑用于常规测试和报告的另外试剂的建议。扩展数量的孔能够以一式两份、一式三份或更大数量的重复测试每种稀释浓度，或者测试中间稀释浓度(比如3μg/ml)，和/或扩展每种抗生素的稀释范围。这些可提供更高的准确性和/或敏感性和/或耐药性信息。具有>200个储器或孔的患者盒的另一个优势为，对于本领域技术人员已知为“简单”的情形(比如非复杂性尿路感染)，可在单个板上处理多个患者样品。这些情形可能需要用较少数量的抗生素进行并行测试；因此，为了节省成本和时间，每单个盒运行多个样品可为有益的。在一些实施方案中，具有>200个储器的患者盒用于容纳从同一患者收集的多个样品，例如体液样品，比如血液、csf、血清、肺灌洗液、唾液或尿液。通常，一些样品为在无菌条件下收集的，这种样品称为无菌样品。对于一些样品，不可能保持无菌条件，这种样品称为非无菌的。鉴于有可能避免相邻储器中两种样品的交叉污染，则多于200个储器的患者盒使得能够在同一盒中测试无菌和非无菌样品两者。母盒自动化表型ast的当前标准是，对于要在运送至实验室的盒(来自测试供应商)上测试的每个患者样品，所有必需的抗生素的所有稀释度以所需的数量存在。这使准确抗生素测量的责任完全落在制造商的工厂车间。通常将抗生素干燥，使其稳定，使得其可在室温下或冷藏下储存，这主要是由于成本而相对于冷冻(-20℃)或低温冷冻(-80℃)储存具有显著优势。然而，本领域的技术人员众所周知的是干燥过程可对抗生素性能具有不利影响，这可能会损害产品并导致召回。如本文公开的母盒通常为包含多个储器的单个“母”板，储器包含足够量的抗微生物剂，以便提供针对多个患者样品和一定范围的抗微生物剂浓度建立抗微生物剂敏感性测试(ast)。在一些实施方案中，单个母盒使得能够测试多于25个独立的患者样品。同一母盒可容纳足以为多个患者样品准备多种抗微生物剂敏感性测试并对其进行多次重复的数量或浓度的多种抗微生物剂，以获得对结果的信心。这大大减少所需的储存空间，并且这可使得抗生素能够以冷冻或低温冷冻的形式提供给实验室客户，这可导致提高批次间的一致性。或者，可将抗生素干燥或冻干并在室温下或冷藏下储存。在一些实施方案中，母盒包含单独的抗微生物剂和抗微生物剂组合两者。母盒中的一个或多个储器可包含多于一种抗微生物剂化合物的组合。因此，母盒包含多个储器。在一些实施方案中，母盒包含384或更多个储器。这允许引入足够数量的抗微生物剂，包括最近批准的抗微生物剂，这对于96个储器的盒是不可行的。其进一步允许定制每个患者板上的抗微生物剂小组。在一些实施方案中，母盒设计成使得其可经历多个冻融循环而抗微生物剂化合物的活性没有任何损害或丧失。在一些实施方案中，母盒能够承受比如低于-80℃的极端温度并且可在宽的温度范围内得到保持而没有遭受结构性损害(比如破裂或翘曲)。在一些实施方案中，母盒包含一个或多个外壳或密封件。可存在外部密封件或外壳，其用于在使用之前将盒与污染隔开。这对于盒的运输和储存是有用的。在一些实施方案中，储器由另一外壳密封。在一些实施方案中，每个储器被单独密封。在一些实施方案中，每个储器通过气密覆盖物密封。另外，每个储器密封件可单独操作。在一些实施方案中，外壳为密封的小袋。在一些实施方案中，密封的小袋包含母盒。在小袋内存在干燥剂的情况下，将包含固体形式抗微生物剂的母盒密封，以保持脱水。因此，包含母盒和干燥剂的小袋用于密封包含固态抗微生物剂的母盒。进一步地，包含溶剂化形式的抗微生物剂的母盒可用粘合密封剂密封和/或在小袋内储存或运输。在一些实施方案中，母盒为透明的。在一些实施方案中，母盒为光保护的。在一些实施方案中，母盒允许光线穿过储器的基底。在一些实施方案中，母盒包含基质管。在一些实施方案中，母盒提供足够的抗微生物剂以制备50-100、100-250、250-500、600-750或750-1000个患者盒或微量滴定板。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少10倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少20倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少100倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少200倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少500倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少1000倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的至少10000倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒包含患者盒中最高期望测试浓度所需的高达106倍更高量的每种抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的抗微生物剂为冻干的或以其他方式干燥的固体形式。在这种实施方案中，对于每种抗微生物剂而言，需要将固体形式溶解或溶剂化成高浓度储备溶液，以将一部分溶液等分到患者盒或辅助储器或稀释储器中。可从母盒中产生许多系列稀释度用于患者盒。在一些实施方案中，抗微生物剂在母盒中处于溶液中。液体的总体积保持尽可能低，而抗微生物剂的浓度保持高。在一些实施方案中，含有抗微生物剂的每个储器的体积为1ml。在一些实施方案中，含有抗微生物剂的每个储器的体积为0.5ml。在一些实施方案中，含有抗微生物剂化合物的每个储器的体积为0.1ml。在一些实施方案中，将抗微生物剂在母盒中于水性溶剂中溶剂化。在一些实施方案中，将抗微生物剂在母盒中于有机溶剂中溶剂化。有机溶剂的实例包括(但不限于)二甲基亚砜(dmso)、二甲基甲酰胺(dmf)、乙醇、甲醇、丙酮和n-甲基-2-吡咯烷酮。在一些实施方案中，使用缓冲的水性溶剂，例如磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在一些实施方案中，首先将抗微生物剂在ph大于8的溶剂或溶液中溶剂化。在一些实施方案中，一些抗微生物剂使用ph大于8.1、或8.2、或8.3、或8.4、或8.5、或8.6、或8.7、或8.8、或8.9或大于ph9.0的溶剂进行溶剂化。在一些实施方案中，首先将抗微生物剂在ph小于7的溶剂或溶液中溶剂化。在一些实施方案中，一些抗微生物剂使用ph小于7、或小于6、或小于5、或小于4、或小于3的溶剂进行溶剂化。在一些实施方案中，首先将抗微生物剂在有机溶剂中溶剂化。在一些实施方案中，首先将抗微生物剂使用第一体积的合适溶剂溶剂化，并用水性溶剂或用水补足剩余体积以达到期望的浓度。该方法需要液体处理器将抗生素从母盒或板中等分至“患者”或“子”盒或板上。因此，抗生素可以在患者盒或板中所需浓度的倍数的浓度存在于母板中。例如，对于16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml和0.5μg/ml的子级稀释系列，母板可包含320μg/ml、160μg/ml、80μg/ml、40μg/ml、20μg/ml和10μg/ml的浓度，使得每孔在从母到子患者盒的转移中浓度被稀释20倍。还可将母板设计为需要较少的稀释度，以节省孔。这对于将96孔母板与384或1536孔子板一起使用可能是有利的，这对于大体积的板填充可能具有优势。例如，对于16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml和0.5μg/ml的子级稀释系列，母板可仅包含320μg/ml、40μg/ml和10μg/ml的浓度。在这种情况下，对于每个主板浓度，子板将用两种不同的稀释度即20倍和40倍填充。另外，可在转移中进行更大数量的稀释。在极端情况下，每种抗生素可仅包含单一浓度，通过液体处理器将其等分到适当的子板稀释范围内。在一些实施方案中，母盒包含3个96孔板，一个包含仅用于革兰氏阴性细菌的抗微生物剂，一个包含仅用于革兰氏阳性细菌的抗微生物剂和一个包含对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌两者均起作用的广谱抗微生物剂(广谱板)。在一些实施方案中，母盒可包含布置于单个母盒板上的所有抗微生物剂。抗微生物剂从母盒转移至患者盒为通过液体处理器完成的。示例性的平台包括hamiltonnexusandstarlit和dynamicdeviceslynx。也可使用包含类似机器人和液体处理器的其他现成或定制平台。这些平台可等分抗生素、肉汤和患者样品，因此允许子盒空着“到达”机器，从而大大地增加实验室客户的储存和处理容易性。液体处理器可进一步实现抗生素的定制，使得仅针对特定患者样品测试一部分抗生素。或者，可以ast分析仪的软件水平进行抗生素的选择/抑制。母到子抗生素转移方法的另外益处为容纳微(或根本不)溶于水的抗生素的能力。这些物质的溶解可通过使用清洁剂或其他液体或者通过使用非水性溶剂来增强。这些物质可存在于母盒本身中和/或添加至制备子板的液体处理器中的试剂包中。在一些实施方案中，母盒可设计成使得在患者盒上包含源自两个或更多个不同母盒的抗微生物剂。在一些实施方案中，将抗微生物剂冻干到母盒上。在一些实施方案中，抗微生物剂作为干粉存在于母盒中。在一些实施方案中，抗微生物剂以高浓度存在于溶液中。储存于母盒中的抗微生物剂的浓度至少为用于目标微生物的抗微生物剂的最小抑制浓度(mic)的20倍。母盒中存在的抗微生物剂的浓度至少为用于目标微生物的抗微生物剂的最小抑制浓度(mic)的30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、100倍或200倍或500倍。在一些实施方案中，母盒包含制备一个患者盒所需的每种抗微生物剂的高达1000倍的量。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多于1微克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多于1毫克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多于10毫克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多于或等于100毫克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多于或等于1克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多于或等于10克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的每个储器含有多达100克的抗微生物剂。在一些实施方案中，母盒中的抗微生物剂经过多于一个的冻融循环是稳定的。母盒中高浓度的抗微生物剂使得一个或多个冻融循环不会影响抗微生物剂的完整性或功能功效。在一些实施方案中，母盒包含384孔微量滴定板。在一些实施方案中，母盒包含一个或多个密封件。在一些实施方案中，外部密封件将盒与周围环境隔开。这对于运输和保持无菌可特别有益。在一些实施方案中，母盒包含覆盖一个或多个储器的内部密封件。在一些实施方案中，使用母盒来建立多重ast测定，以进行共享温育期的多种不同测定，其中每种测定包括在存在一种或多种抗微生物剂的情况下的微生物生长测定，其中上述多种不同测定为在包含一个或多个储器和一种或多种抗微生物剂化合物的患者盒上进行，其中将盒中的抗微生物剂从母盒转移至患者盒中，母盒含有以足够质量存在的每种抗微生物剂化合物，使得在0.1ml合适的溶剂中溶剂化产生的抗微生物剂浓度为最高期望测试浓度的>10倍；以及基于相对微生物生长来确定一种或多种微生物的抗微生物剂敏感性。母盒不会与任何患者样品接触，并因此可重复使用以在不同时间建立多轮这种测定。患者盒在某些情况下，可能优选的是使患者盒以适合于用包含源自患者样品的微生物的样品直接测试的量含有干燥或冷冻溶剂化的抗微生物剂。用于进行自动化ast的现有方法在被用患者盒中包含的抗微生物剂测试的样品的整个温育期多次查询储器。该种方法会产生一条生长曲线，其可用于确定被测试抗微生物剂的mic或生长/无生长参数。然而，需要重复测试，再加上典型的医院临床微生物实验室的通量要求(例如对于拥有1034张床的医院，每天需要多达170次ast)限制每盒的储器数量。用于自动化ast的新方法，比如早期提交的美国专利号9834808、2017年9月27日提交的未决美国申请15/717569、2017年6月26日提交的未决美国临时申请62/524972、2017年4月21日提交的公开的pct申请wo2017185012和2017年12月22日提交的未决pct申请pct/us17/68306中描述的那些方法(所述申请全部通过参考结合至本文中)，可在较少储器查询的情况下进行ast。特别是，这种方法可能不需要生长曲线来报告mic。这种进步可使得具有≥150个储器的患者盒可用于自动化ast平台，比如我们在上述申请和专利中所述的那些。可通过考虑要测试的抗微生物剂的数量乘以期望的稀释次数来确定储器的数量。在一些实施方案中，一种抗微生物剂所需的稀释次数不同于另一种。如对示例性患者盒描绘计算的表3中所示，可通过计算所有抗微生物剂所需的稀释次数总和得出所需的接种储器数量，所述总和包括(a)已知对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌两者均有效的抗微生物剂(“广谱”，“组合”)(x)，(b)已知对革兰氏阳性细菌有效的抗微生物剂(y)，和(c)已知对革兰氏阴性细菌有效的抗微生物剂(z)(=x+y+z)。在此选择51种不同的抗微生物剂进行测试。广谱抗微生物剂需要至少128个储器，抗革兰氏阴性微生物的抗微生物剂需要至少115个储器和抗革兰氏阳性微生物的抗微生物剂需要至少102个储器。因此，表3中的示例性患者盒包含至少243个用于革兰氏阴性细菌的储器和至少230个用于革兰氏阳性细菌的储器。在备选实施方案中，可在包含345个储器的用于所有细菌的单个板上制备所有稀释度。表3.用于接种的患者盒储器类型抗生素缩写最低要求最高要求稀释次数广谱阿米卡星amk0.51289广谱氨苄西林amp0.06256411广谱环丙沙星cip0.0312589广谱头孢曲松cro0.25169广谱头孢他啶/阿维巴坦cza2/432/45广谱多西环素dox1326广谱头孢西丁fox1326广谱庆大霉素gen0.25328广谱左氧氟沙星lvx0.25167广谱米诺环素mnc0.5329广谱莫西沙星mxf0.5166广谱呋喃妥因nit42567广谱氨苄西林/舒巴坦sam1/0.564/327广谱甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(1:20)sxt0.5648广谱四环素tet0.25328广谱替加环素tgc0.0156251611广谱妥布霉素tob0.125329革兰氏阴性阿莫西林/克拉维酸amc1/0.564/327革兰氏阴性氨曲南atm1647革兰氏阴性头孢洛扎-他唑巴坦c/t0.25/464/49革兰氏阴性头孢他啶caz0.5327革兰氏阴性头孢他啶/克拉维酸盐caz/clv0.5/40.5/41革兰氏阴性头孢呋辛cfxorcxm1647革兰氏阴性头孢唑林cfz0.25328革兰氏阴性头孢泊肟cpd0.5166革兰氏阴性粘菌素cst0.12587革兰氏阴性头孢噻肟ctx0.25649革兰氏阴性头孢噻肟/克拉维酸盐ctx/clv0.5/40.5/41革兰氏阴性多利培南dor0.0625810革兰氏阴性厄他培南ert0.031251610革兰氏阴性头孢吡肟fep0.253210革兰氏阴性头孢吡肟/克拉维酸盐fep/clv1/101/101革兰氏阴性亚胺培南imp0.125329革兰氏阴性美罗培南mem0.125168革兰氏阴性哌拉西林/他唑巴坦tzp4/4256/47革兰氏阳性阿奇霉素azm0.25167革兰氏阳性克拉霉素clr0.0616革兰氏阳性克林霉素cli0.031251610革兰氏阳性克林霉素/红霉素cli/ery0.5/10.5/41革兰氏阳性头孢洛林cpt0.0312589革兰氏阳性达托霉素dap0.0625810革兰氏阳性红霉素ery0.125168革兰氏阳性庆大霉素hlgenhl5005001革兰氏阳性利奈唑胺lnz0.25167革兰氏阳性莫匹罗星(hl)muphl2562561革兰氏阳性苯唑西林oxa0.0312589革兰氏阳性苄基青霉素(青霉素g)pen0.031251610革兰氏阳性奎奴普丁/达福普汀(30:70)qnp/dfp0.12587革兰氏阳性利福平rif0.2586革兰氏阳性链霉素hlstphl100010001革兰氏阳性特地唑胺tdz0.12546革兰氏阳性万古霉素van0.25649本文描述384孔盒形式，并且显示其产生可再现且可靠的mic数据。通常，不优选具有多于96个孔的板，因为孔容量较小，并且尤其是在使用少量液体时，溶液的蒸发会影响数据结果。另外，还观察到基于板上孔的位置会出现溶液的不均匀损失。如在本文的示例性测试中描绘的简单测试中所示，外围的孔比朝向孔中央的孔经历更高水平的蒸发。因此，令人惊讶且出乎意料的是，当在384孔板中进行时ast测定会成功。相反，来自384孔板测定的数据高度可靠。抗微生物剂任何抗微生物剂均可适合于本公开中提供的系统。实例包括(但不限于)阿米卡星(amikacin)、阿米卡星-磷霉素(amikacin-fosfomycin)、阿莫西林(amoxicillin)、阿莫西林-克拉维酸盐(amoxicillin-clavulanate)、氨苄西林(ampicillin)、氨苄西林-舒巴坦(ampicillin-sulbactam)、阿奇霉素(azithromycin)、阿洛西林(azlocillin)、氨曲南(aztreonam)、氨曲南-阿维巴坦(aztreonam-avibactam)、贝西沙星(besifloxacin)、比阿培南(biapenem)、卡达唑胺(cadazolid)、羧苄西林(carbenicillin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢唑林(cefazolin)、头孢地尼(cefdinir)、头孢托仑(cefditoren)、头孢吡肟(cefepime)、头孢吡肟-他唑巴坦(cefepime-tazobactam)、头孢他美(cefetamet)、头孢克肟(cefixime)、头孢美唑(cefmetazole)、头孢尼西(cefonicid)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢替坦(cefotetan)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢洛扎-他唑巴坦(ceftolozane-tazobactam)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢丙烯(cefprozil)、头孢洛林(ceftaroline)、头孢洛林-阿维巴坦(ceftaroline-avibactam)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢他啶-阿维巴坦(ceftazidime-avibactam)、头孢他啶-阿维巴坦(ceftazidime-avibactam)、头孢布烯(ceftibuten)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢吡普(ceftobiprole)、头孢洛扎-他唑巴坦(ceftolozane-tazobactam)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢噻吩(cephalothin)、氯霉素(chloramphenicol)、西诺沙星(cinoxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、克拉霉素(clarithromycin)、克林沙星(clinafloxacin)、克林霉素(clindamycin)、粘菌素(colistin)、达巴万星(dalbavancin)、达托霉素(daptomycin)、德拉沙星(delafloxacin)、地红霉素(dirithromycin)、多利培南(doripenem)、多西环素(doxycycline)、依诺沙星(enoxacin)、伊拉瓦环素(eravacycline)、厄他培南(ertapenem)、红霉素(erythromycin)、法罗培南(faropenem)、非达霉素(fidaxomicin)、非那沙星(finafloxacin)、氟罗沙星(fleroxacin)、磷霉素(fosfomycin)、夫西地酸(fusidicacid)、加雷沙星(garenoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)、庆大霉素(gentamicin)、gepotidacin、格帕沙星(grepafloxacin)、艾拉普林(iclaprim)、亚胺培南(imipenem)、亚胺培南-雷利巴坦(imipenem-relebactam)、卡那霉素(kanamycin)、来法莫林(lefamulin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、左氧那地沙星(levonadifloxacin)、利奈唑胺(linezolid)、linopristin-flopristin、洛美沙星(lomefloxacin)、氯碳头孢(loracarbef)、美西林(mecillinam)、美罗培南(meropenem)、甲氧西林(methicillin)、美洛西林(mezlocillin)、米诺环素(minocycline)、拉氧头孢(moxalactam)、莫西沙星(moxifloxacin)、萘夫西林(nafcillin)、萘啶酸(nalidixicacid)、奈替米星(netilmicin)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、奥马环素(omadacycline)、奥利万星(oritavancin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素(penicillin)、哌拉西林(piperacillin)、哌拉西林-他唑巴坦(piperacillin-tazobactam)、普拉佐米星(plazomicin)、多粘菌素b(polymyxinb)、奎奴普丁-达福普汀(quinupristin-dalfopristin)、阿祖培南(razupenem)、利福平(rifampin)、索利霉素(solithromycin)、司帕沙星(sparfloxacin)、磺胺异噁唑(sulfisoxazole)、硫培南(sulopenem)、特地唑胺(tedizolid)、替考拉宁(teicoplanin)、特拉万星(televancin)、泰利霉素(telithromycin)、四环素(tetracycline)、替卡西林(ticarcillin)、替卡西林-克拉维酸盐(ticarcillin-clavulanate)、替加环素(tigecycline)、妥布霉素(tobramycin)、甲氧苄啶(trimethoprim)、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)、丙大观霉素(trospectomycin)、万古霉素(vancomycin)、阿库来菌素a(aculeacina)、两性霉素b(amphotericinb)、卡泊芬净(caspofungin)、克霉唑(clotrimazole)、氟康唑(fluconazole)、氟胞嘧啶(flucytosine)、5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine)、灰黄霉素(griseofulvin)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、制霉菌素(nystatin)、粪壳菌素(sordarin)、特比萘芬(terbinafine)、伏立康唑(voriconazole)及其盐或水合物。在一些实施方案中，抗微生物剂为化学合成的分子。在一些实施方案中，抗微生物剂为化合物。在一些实施方案中，抗微生物剂为生物分子，比如肽。在一些实施方案中，抗微生物剂为生物分子，比如核苷酸或氨基酸。在一些实施方案中，抗微生物剂为生物学分子。在一些实施方案中，抗微生物剂为抗体。抗微生物剂可以在室温下稳定。在一些实施方案中，抗微生物剂在室温下以溶解形式时不稳定。在一些实施方案中，当在较高温度比如室温下储存时，抗微生物剂易于降解。有几种活性测定可用于测量抗微生物剂在任何条件下于任何储存期内的半衰期。这种测定方法为本领域技术人员众所周知的，并且在本公开中未涵盖。以高的抗微生物剂浓度或作为干粉创建和储存母盒会延长抗微生物剂的半衰期。在一些实施方案中，当储存于母盒中时，抗微生物剂经由多个冻融循环是稳定的。在一些实施方案中，抗微生物剂以干燥形式存在，并且在合适的溶剂中被溶剂化和/或进一步稀释。溶剂化流体可为有机溶剂或者性质上为酸性或碱性的无机溶剂。在水中进行进一步稀释。表4提供用于ast测定所需的常见抗微生物剂的合适溶剂。表4.抗微生物剂溶剂药物溶剂阿米卡星水阿莫西林填充时3mldmso、0.01m磷酸盐缓冲液(ph8.0)氨苄西林0.1m磷酸盐缓冲液(ph8.0)阿维巴坦水阿维巴坦水阿奇霉素95%乙醇氨曲南水头孢唑林0.1m磷酸盐缓冲液(ph6.0)头孢吡肟填充时5mldmso、0.01m磷酸盐缓冲液(ph8.0)头孢噻肟水头孢西丁水头孢泊肟0.1%碳酸氢钠头孢洛林30%dmso/70%盐水头孢他啶水头孢他啶水头孢洛扎水头孢曲松水头孢呋辛0.1m磷酸盐缓冲液(ph6.0)环丙沙星5mlh2o，添加1ml5nnaoh和4mlh2o克拉维酸0.1m磷酸盐缓冲液(ph6.0)克林霉素水粘菌素水达托霉素水多西环素水厄他培南0.01m磷酸盐缓冲液(ph7.2)红霉素95%乙醇庆大霉素水亚胺培南0.01m磷酸盐缓冲液(ph7.2)左氧氟沙星3mlh2o，添加1ml5nnaoh和1mlh2o利奈唑胺95%乙醇美罗培南水米诺环素水莫西沙星水呋喃妥因dmso诺氟沙星3mlh2o，添加2ml5nnaoh和2mlh2o苯唑西林水青霉素水哌拉西林水奎奴普丁/达福普汀水利福平甲醇舒巴坦水磺胺甲恶唑丙酮他唑巴坦水特地唑胺dmso替考拉宁水四环素3mlmeoh+2ml水。稀释之后5nnaoh替加环素水妥布霉素水甲氧苄啶水万古霉素水一种测定设置包括通过将来自母盒或中间系列稀释盒的抗微生物剂分配到一个或多个384个储器的患者盒中来制备患者(目标)盒，每种抗微生物剂一式三份进行约7次连续稀释，并涵盖已知有效并因此应予以报告的每种抗微生物剂的动态范围。稀释范围包括每种抗微生物剂的预期最小抑制浓度(mic)。但最重要的是，根据本发明，在患者盒中包含超出已知有效的范围的稀释范围，即抗微生物剂浓度。384孔患者盒的其余储器用于建立测试对照：每种抗微生物剂化合物均包含无抗微生物剂对照(阴性对照)；和每个抗微生物剂组均包含阳性对照，其中向孔中添加对抗微生物剂不敏感的微生物。每384孔盒还至少一式两份地分配每个对照组。当本领域技术人员认为必要时可包括另外的测试对照。将等量的患者样品分配至盒中的每个孔中，除指定用于无样品对照的孔(如果包括的话)之外。患者盒准备好用于同时测定来自患者样品的微生物对12种所用浓度范围的抗微生物剂的敏感性。可并行建立多个这种板，以测试来自多位患者的样品，每个患者样品各一个板。在准备好的患者盒上进行ast测定。通常，ast测定使用24孔-96孔板进行。如本文公开的，在一些实施方案中，ast测定在384孔板中进行。申请人表明，使用384孔板测定可获得高质量的ast结果。由于384孔板中每个储器的体积均比96孔板小得多，因此试剂按比例缩小以进行测定，从而给测定和数据可靠性带来很大的不确定性。例如，蒸发会影响其中溶液的浓度以及细菌生长或化学反应的速度。令人惊讶地，当在384孔板上进行时，根据本发明使用的测定方法导致成功的ast测定和可靠的结果。诊断或治疗应用本文所述的盒和方法可有效诊断来自受试者的生物样品中微生物群体的性质。受试者可为人类患者。受试者也可为非人类动物。从患者获得生物样品进行分析。生物样品可选自血液、血浆、血液成分、痰液、尿液、渗出液、鼻拭子、阴道拭子、咽拭子、汗液、眼睛分泌物或组织匀浆。作为本文所述的产物和方法的结果，获得在定性和定量评估中有关对一种或多种抗微生物剂的敏感性的信息。本发明可用于治疗各种疾病、障碍和病症。在短期研究期间确定对患者中的一种或多种微生物有效的抗微生物剂以及获得mic值对从业者的治疗决策产生积极影响。本发明以多种方式促进这种结果。例如，母盒的可用性可以克服运输距离障碍、重量限制、温度和稳定性问题，并因此使得可在微生物感染爆发地进行抗微生物剂筛查努力。此外，由于可从母盒中产生多个“子”盒，因此直接使用患者样品或同时用多个患者样品进行大规模定性和定量性质两者的筛查的能力消除在开始有效的治疗方法之前鉴定微生物的必要性而不对患者造成延误。该方法助于确定所选抗微生物剂的有效治疗剂量。第三，使用母盒方法减少批次间的差异，从而使得诊断和治疗决策具有可重复性。在一些实施方案中，制备母盒供下游用于分析用于某些适应症的抗微生物剂，其中本领域的从业者将期望某组抗微生物剂起作用。为了针对给定的适应症选择最有效的抗微生物剂，对这种抗微生物剂进行密切比较需要这种抗微生物剂在单一组中选择性存在。因此，通过仔细选择可包含于母盒中的抗微生物剂，可根据实地必要性和需求定制产生几种平台抗微生物剂ast阵列。实施例尽管已根据某些实施方案具体描述了某些制品、组合物和方法，但以下实施例仅用于说明本发明的实施方案而不旨在限制本发明的实施方案。实施例1：在使用母盒的多重测定中的冷冻室空间利用该实施例描绘通过以母盒形式运输和储存ast测定盒节省的冷冻室空间的估算值。根据本发明的母盒被运输和储存于冷冻室中作为运输和储存测试盒(即患者盒)的通常普遍的程序的备选方案直至使用。母盒包含高浓度和足够质量的抗微生物剂，在该实施例中，母盒为3个96孔板的堆叠，需要513cm3的空间。母板堆叠需要占用空间128mmx85mmx47mm。一个母板可产生一个50个板的患者盒的子组，每个板具有384个储器(孔)。因此，母盒相当于50个一次性384孔板，这些孔板的堆叠经计算占用空间为8810cm3(图1)。子板在测定当天从母盒中产生，并因此一旦测定完成就将其分发。因此，使用母盒可将运输和冷冻室储存空间减少至1/17。实施例2.母盒上抗微生物剂的布局该实施例描绘母盒上抗微生物剂的布局。在该实施例中，将3个96孔板用于如图2所示的母盒。每个母盒含有3种类型的抗微生物剂：(1)一种为对两者均有效的“广谱”抗微生物剂(术语“组合”在本文中通常可与广谱互换使用以表示该类别)；(2)一种为已知对革兰氏阴性细菌有效的抗微生物剂；和(3)一种为已知对革兰氏阳性细菌有效的抗微生物剂。因此，如图2所示，布置包含广谱抗微生物剂的板、包含革兰氏阴性抗微生物剂的板和包含革兰氏阳性抗微生物剂的板。母盒包含高浓度的每种抗微生物剂(至少大于要测试的最高浓度的5倍)。例如，建议用于测试的氨苄西林的最高浓度为64μg/ml。母板中存在的氨苄西林的最高浓度为400μg/ml。另外，母盒还包含足够质量的适合于从单个母盒制备多个患者盒的每种抗微生物剂。实施例3.患者盒的制备在该实施例中，提供从母盒逐步建立患者盒以进行自动化ast测定。使用可从包括hamiltoncompany、tecan、hudsonrobotics等在内的多家制造商获得的液体分配器，可自动化在临床实验室环境中使用母盒产生“患者盒”或目标盒的过程。接种工作流程的示意图如图3所示。首先，用户将3个母板装载到冷藏板架(设定为4℃)上。这些板由1个广谱、1个革兰氏阳性和1个革兰氏阴性抗生素板组成。接下来，将散装试剂和移液器吸头装载在管架上。每12个样品重新装载主体和散装试剂移液器吸头以及样品稀释托盘。对于每组测试，最多要在试管中装载4个患者样品和最多装载4个384孔目标板(患者板)。患者(目标)板的制备.将抗生素从广谱母板转移至目标板。根据图10a-b对抗生素进行“标记”。接种器吸头应放回广谱吸头盒的相同位置，以便在随后的目标板上使用，但应仅用于相同的抗生素以避免交叉污染。将抗微生物剂从革兰氏阳性或革兰氏阴性母板转移至目标板，并根据图11a-b对抗生素进行“标记”。接种器应将吸头放回正确的吸头盒的相同位置，以便在随后的目标板上使用。好好注意以防止任何交叉污染。接下来，使用散装试剂吸头将散装试剂转移至目标板，表5的目标板。患者样品稀释液的制备.使用来自样品吸头盒的未使用的吸头，将200μl患者样品转移到样品稀释托盘的未使用的列中。用过的吸头应立即丢弃以避免交叉污染。对其余患者样品重复以上步骤。用患者样品接种目标板.根据表4，使用来自“样品吸头盒”中的新吸头将50μl稀释的患者样品转移到目标板中，这通过“喷射式分配”完成以避免交叉污染。在将患者样品转移至目标板上的每个孔之后，应丢弃吸头以避免交叉污染。对每个另外的患者样品和目标板重复以上步骤。该过程可使用机器中的一个或多个辅助盒。注意辅助盒和母盒上不要接种微生物。进行每种抗微生物剂化合物的系列稀释并分配于患者样品盒上。图4给出单个孔流程图的示意图。表5.散装试剂包含针对革兰氏阴性细菌的抗微生物剂的患者盒(也称为目标板)的最终布局如图5所示。包含针对革兰氏阳性细菌的抗微生物剂的患者盒(也称为目标板)的最终布局如图6所示。为了测试最小抑制浓度(mic)，分配的每种抗微生物剂的系列稀释度的范围足以涵盖几个数量级的动态范围内的mic。对于定性敏感性测试，还根据clsi标准在患者样品盒上制备足够的稀释范围。这些稀释度可重复存在，并且也可使用另外的稀释度。样品患者盒中抗微生物剂溶液的浓度称为“测试浓度”。测试浓度代表在给定抗生素的质量控制或mic解释标准范围内的所有浓度，如clsim100s手册所定义。实施例4.在384孔板中进行的快速ast提供与在96孔板中进行的测定相似的数据.该实施例证实在384孔板上成功的ast测定，产生高的数据可靠性。显示的抗生素为万古霉素(vancomycin)、达托霉素(daptomycin)、头孢洛林(ceftaroline)和左氧氟沙星(levofloxacin)，其中该菌株的从肉汤微量稀释参考方法获得的mic分别为0.5、0.25、0.12和0.25μg/ml。使用金黄色葡萄球菌的临床分离株。数据表示以rfu计的trf信号。最上面一行中的图表含有来自384孔板的数据。最下面一行中的图表含有来自96孔板的数据。如表6和表7所示，分别使用母盒形式和384孔患者盒(第3列)的抗微生物剂小组1和2的mic结果与通过标准96孔ast测定板(右侧列)运行的结果可靠地一致。图7显示确定抗微生物剂对患者样品微生物的mic值的相应生长曲线。这表明除本文讨论的其他优势之外，具有384孔板形式的母盒提供可靠的结果。表6.抗微生物剂小组1的mic结果抗生素质量控制范围从自母板制成的小组获得的mic从96孔抗生素小组获得的mic头孢曲松0.03-0.12≤0.125≤0.12头孢他啶0.06-0.5≤10.25氨苄西林-舒巴坦2-888妥布霉素0.25-10.51阿米卡星0.5-444氨苄西林2-848哌拉西林-他唑巴坦1-4≤14左氧氟沙星0.008-0.06≤0.25≤0.06头孢吡肟0.015-0.12≤0.25≤0.03表7.抗微生物剂小组2的mic结果抗生素质量控制范围从自母板制成的小组获得的mic从96孔抗生素小组获得的mic利奈唑胺1-422头孢洛林0.12-0.50.50.25特地唑胺0.25-10.250.5苯唑西林0.12-0.50.50.5利福平0.004-0.015≤0.250.004头孢曲松1-824头孢他啶4-1648氨苄西林0.5-211左氧氟沙星0.06-0.5≤0.250.25实施例5.在384孔板中检测到不均匀的体积损失为了测试板的各个区域的蒸发速率，将40µl水添加至384孔板的每个孔中。记录板的质量，并将带盖的板在35℃和150rpm(southwestscienceminiincushaker)下摇动温育过夜约18小时。温育之后，对板进行质量测定以确定温育期间的总体积损失(图8，左图)。该数据记录了整个板上液体体积的总损失。为了确定单个孔中剩余的体积，使用微量移液器。报告了至少6个中央或边缘孔的平均体积损失百分比(图8右图)。该数据表明，整个板的液体体积损失不均匀，外围孔的液体体积损失为中央孔的约6倍。实施例6.单盒质量控制小组设计.本发明人设计了384孔ast盒设计，其既可用于使用一组抗微生物剂对患者样品进行ast测试，又可在装载有针对小组中的抗微生物剂指定的qc生物体时提供对盒上ast小组的质量控制。对革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物具有特异性的示例性盒布局分别如图2b和图2c所示。在这些图中，盒的行和列指示在左侧和上边缘处。通过以下表8中列出的3字母抗微生物剂代码和通过对每个分组指示的qc生物体一起将孔分组。分组内每个孔的每种抗微生物剂的浓度以µg/ml表示。表8.图2b、2c、2d和2e的3字母抗微生物剂代码抗微生物剂缩写抗微生物剂缩写氨苄西林amp阿米卡星amk阿奇霉素azm阿莫西林-克拉维酸amc头孢西丁筛查foxscn氨苄西林amp头孢洛林cpt氨苄西林-舒巴坦sam环丙沙星cip氨曲南atm克拉霉素clr头孢唑林cfz克林霉素cli头孢吡肟-齐德巴坦fpz达托霉素dap头孢噻肟ctx德拉沙星dfx头孢西丁fox多西环素dox头孢泊肟cpdd-test(cli/ery)dtest头孢洛林cpt伊拉瓦环素erv头孢他啶caz红霉素ery头孢他啶-阿维巴坦cca庆大霉素gen头孢洛扎-他唑巴坦c/t庆大霉素高水平genhl头孢曲松cro艾拉普林icl头孢呋辛cxm左氧氟沙星lvx环丙沙星cip利奈唑胺lnz粘菌素cst米诺环素min多利培南dor莫西沙星mxf多西环素dox莫匹罗星高水平muphl伊拉瓦环素erv呋喃妥因nit厄他培南ert诺氟沙星noresbl-1(头孢吡肟/clav)fep/clv氧氟沙星ofxesbl-2(头孢噻肟/clav)ctx/clv苯唑西林oxaesbl-3(头孢他啶/clav)caz/clv青霉素pen庆大霉素gen普拉佐米星plz亚胺培南imp利福平rif美罗培南mem链霉素高水平stphl美罗培南-法硼巴坦mevsulfa-trimethsxt米诺环素min共杀素syn莫西沙星mxf特地唑胺tdz呋喃妥因nit泰利霉tel诺氟沙星nor四环素tet氧氟沙星ofx替加环素tig奥马环素oma万古霉素van哌拉西林-他唑巴坦tzp阿莫西林amx普拉佐米星plz头孢吡肟fep磺胺甲恶唑-甲氧苄啶sxt亚胺培南-雷利巴坦irb四环素tet头孢他啶-他唑巴坦caz-taz替加环素tig头孢他啶-阿维巴坦cza妥布霉素tob克林霉素诱导的红霉素耐药性(筛查测试)cli/ery甲氧苄啶tmp特地唑胺tzd氨曲南-阿维巴坦aza如图所示，对于ast小组中的每种抗微生物剂，本公开实施方案的单个盒包括包含在整个测试和qc范围内的各种浓度的抗微生物剂的多个孔。本领域的技术人员将意识到，用于患者样品的抗微生物剂的mic范围可不与用于质量控制生物体的抗微生物剂的mic范围相同或者甚至重叠，并且本公开盒中抗微生物剂的稀释范围将不必匹配在其他ast盒设计中使用的范围。图2b和2c中示例的实施方案的ast小组构成用于革兰氏阳性细菌的36种抗微生物剂和用于革兰氏阴性细菌的41种抗微生物剂的小组。这些板进一步足以使得多种质量控制生物体能够同时进行处理。应当注意的是，当前的ast小组最常基于64、96或132孔板实施，并且大多数ast小组包含少于20种不同的抗微生物剂，并且本文所述的设计扩展可在单次运行期间于单个ast盒上测试的抗微生物剂的数量。在图2b和2c中示例的盒设计中，使用相同qc生物体的抗微生物剂的稀释系列通常沿同一轴而不是随机聚集，这有利于在单次运行中装载和处理多种质量控制生物体。本发明人设计了384孔ast盒设计，其既可用于使用一组抗微生物剂对患者样品进行ast测试，又可在装载有针对小组中的抗微生物剂指定的qc生物体时提供对盒上ast小组的质量控制。对革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物具有特异性的示例性盒布局分别如图2d和图2e所示。在这些图中，盒的行和列指示在左侧和上边缘处。通过表8中列出的3字母抗微生物剂代码和通过对每个分组指示的qc生物体一起将孔分组。分组内每个孔的每种抗微生物剂的浓度以µg/ml表示。图2d和2e中示例的实施方案的ast小组构成用于革兰氏阳性细菌的约23种抗微生物剂加上5种筛查测试和用于革兰氏阴性细菌的约34种抗微生物剂加上1种筛查测试的小组。这些小组进一步足以使得多种质量控制生物体能够同时进行处理。特别是，qc的稀释范围可为一些抗生素小组上完整稀释范围的子集。显示该设计的示例性小组布局如图2d和图2e所示。在这些布局中，每个小组上的24列储器分为3个区域，每个区域8列。这些称为“qc组块”，因为尽管每个板将接种相同的生物体以进行临床分离株测试，但各自可接种不同的qc生物体以进行qc检测。每个板(革兰氏阴性和革兰氏阳性)需要3次不同的qc运行，在图2d和2e中标记为qc-1至qc-3。对于每次运行qc-1至qc-3，应在每个组块中运行的qc生物体在图2d和2e中显示于适当的行中。在优选的实施方案中，系统软件指示用户选择要测试临床样品还是qc样品。如果要测试临床样品，则可进一步指示用户选择应进行综合测试还是多重测试。如果用户选择综合测试，则用户界面(ui)会指示她/他制备样品的接种管，并将其和适当的综合小组装载到载体中。图3a中的屏幕截图显示在用户正在制备接种样品管并将小组装载到载体中的步骤期间，在将第二革兰氏阳性小组主动装载在4小组载体期间的ui。如果用户改为从ui中选择以在综合小组上进行qc，则系统指示她/他使用多重载体并制备适当qc生物体的接种样品管，如图3b的屏幕截图所示。注意，该实例显示图2e中标记为“qc-2”的运行。在一些实施方案中，可存在一种或多种抗微生物剂稀释液，其对qc而言是必需的，但不直接支持被测试样品的mic或筛查测试结果的确定。例如，在图2e中，存在amx以便为qc提供确认结果，以表明atcc700603保留了对amx的耐药性，这是使用该qc生物体对amc进行qc所必需的。应当注意的是，当前的ast小组最常基于64、96或132孔板实施，并且大多数ast小组包含少于20种不同的抗微生物剂，并且本文所述的设计扩展可在单次运行期间于单个ast盒上测试的抗微生物剂的数量。还应当注意的是，此处所述的发明在用于样品测试或qc时不需要在小组浓度方面产生差异，这对于实现低成本易耗品是重要的。在图2d和2e中示例的盒设计中，使用相同qc生物体的抗微生物剂的稀释系列通常沿同一轴而不是随机聚集，这有利于在单次运行中装载和处理多种质量控制生物体。特别是，这可加快接种速度。在图2d和2e中，稀释系列水平定向。稀释系列以相同方向定向，使得用患者来源的样品接种盒不会在盒内造成污染。这种定向允许可含有多种抗微生物剂的复杂ast小组。使用当前的ast小组，由于必须测试的小组数量，因此要为整个小组提供qc既费力又昂贵。本公开的方法使得能够使用少得多的材料并且可耗费更少的时间进行qc测试。本公开实施方案的盒通常但不必适合用于如出于所有目的通过参考结合的vacic等(“vacic”)的美国授权前公开号2018/0088141中描述的ast系统所述。更具体地讲，段落73-74描述一种ast方法，其包括检查盒的一个或多个对照孔中的样品中微生物是否足够生长的第一步，并且一旦确定已经发生足够的生长，则进行一个或多个终点测定，以评估在不同浓度的不同抗微生物剂条件下的微生物生长。因此，在某些实施方案中，盒包括一个或多个不包含抗微生物剂的孔，并且可用于足够的生长测定。在正常的ast测试操作中，盒的孔装载有样品并进行温育；以预定间隔(例如0.5、1、2、3、4等小时)测试一个或多个足够生长的孔，并且一旦确定足够的生长，就如vacic中所述进行一个或多个终点测定。对于qc使用，盒的一个或多个足够生长的孔中的每一个均接受质量控制生物体而不是患者样品，例如至少一个足够生长的孔可接受针对盒上每种抗微生物剂指定的质量控制生物体，例如如图2b和c所列。可在设定的间隔(例如0.5、1、2、3或4小时)之后评估足够生长的孔，并且在一些情况下，在确定qc生物体足够生长之后，针对接收该qc生物体的孔开始终点测试；检查其余足够生长的孔是否有足够的生长，并且当确定每种qc生物体已达到显著的生长阈值时，就开始对含有该qc生物体的孔进行终点测试。或者，只有在多种qc生物体已达到足够的生长阈值之后，才可在盒上进行终点测定测试；或者，在预计qc生物体具有相似的生长动力学时，可在单个qc生物体的预定的生长间隔和确认的生长之后开始终点测试。等同方案本领域的技术人员将认识到或能够使用不超过常规实验确定本文所述的本发明的特定实施方案的许多等同方案。本发明的范围不旨在限于以上描述，而是如以下权利要求中所述。当前第1页12