一种数字微流控聚合酶链式反应多联检测系统的制作方法

文档序号:25043800发布日期:2021-05-14 11:33阅读:来源:国知局

技术特征:
2x液滴并转移至n个靠近引物入口的位置;(4)含有去离子水的混合分配区(6)充分混合并在关闭体积调节电极(8)的条件下分配出2滴等体积的去离子水液滴并转移至靠近引物阴性对照、阳性对照入口的位置;(5)样本、裂解液、磁珠的混合溶液在搅拌区(4)充分搅拌并在磁珠分离点(5)进行磁珠分离,洗涤液、漂洗液依次与磁珠在搅拌区(4)充分搅拌并在磁珠分离点(5)进行磁珠分离,洗脱液与磁珠在搅拌区(4)充分搅拌并在磁珠分离点(5)进行磁珠分离,将洗脱液转移至含有去离子水的混合分配区(6);(6)含有去离子水和洗脱液的混合分配区(6)充分混合,并在开启体积调节电极(8)的条件下分配出m滴等体积的液滴,并转移至除引物阴性对照、阳性对照的靠近引物入口的位置,需要指出步骤(4)中去离子水的液滴与阴性或阳性对照的体积之和等于该步骤所分配的液滴体积;(7)将扩增区的n个独立聚合酶链式反应溶液充分混合;(8)在扩增区对n个独立聚合酶链式反应进行扩增,配合荧光检测装置实现荧光信号检测和结果判定。8.根据权利要求7所述的聚合酶链式反应多联检测方法,其特征在于,所述n和m为大于等于1的正整数;优选地,扩增区的温控方式采用基于变温温度模块(9)的温控方式,n个独立聚合酶链式反应溶液不需要移动,通过改变变温温度模块(9)的温度实现聚合酶链式反应所需温度循环条件。9.根据权利要求7所述的聚合酶链式反应多联检测方法,其特征在于,所述n和m为大于等于1的正整数;优选地,扩增区的温控方式可采用基于恒定温度模块(10)和(11)的温控方式,n个独立聚合酶链式反应溶液需要在两个温度区间间往复移动,从而实现聚合酶链式反应所需温度循环条件;优选地,所述温度模块(10)保持例如恒定变性温度不变,用于进行变性反应;优选地,所述温度模块(11)在逆转录反应阶段保持例如恒定逆转录温度不变,用于进行逆转录反应,在逆转录反应完成后升至例如恒定退火、延伸温度不变,用于进行退火、延伸反应;优选地,所述变性温度为92

99℃,优选为95℃;优选地,所述逆转录温度为45

75℃,优选为50℃;优选地,所述退火、延伸温度为55

75℃,优选为60℃。10.根据权利要求7

9中任一项所述的聚合酶链式反应多联检测方法,其特征在于,所述数字微流控聚合酶链式反应多联检测的方法还包括采用荧光检测模块实现定性或定量检测(即qpcr)的步骤;优选地,所述数字微流控聚合酶链式反应多联检测的方法还包括使用电极设计或级联以实现更高检测通量。
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