一种实验室型连续流层析系统的制作方法

[0001]
本实用新型涉及层析领域，具体涉及一种实验室型连续流层析系统，可用于连续流层析工艺开发及实验室样品制备。


背景技术：

[0002]
连续流层析可应用于抗体等药物的层析纯化，通过连续捕获显著提高层析填料的利用率，节省溶液用量，提高生产效率。连续流层析也可将层析过程中目标物与杂质的重叠组分进行回收纯化，从而同时提高纯度和收率。此外，连续流层析还可应用于层析过程中微量组分的快速富集。
[0003]
chromacon公司的contichrom系统采用2柱实现连续捕获，ge公司的aktapcc系统采用3-4柱实现连续捕获。novasep公司的biosc系统以及pall公司的biosmb系统采用的层析柱数量最多分别为6根和16根。层析柱的数量越多，层析柱的装填、清洗、拆卸工作量越大，层析柱的占用空间也会随之增大，而且也更难保证多根层析柱装填效果的一致性。更多的层析柱，意味着更多的管路、阀门、接头等硬件配置以及更复杂的运行逻辑，系统的清洁及病毒清除验证均面临更大挑战，并不利于一线生产人员掌握以及连续捕获工艺的放大。因此，采用2柱或3柱进行连续捕获更具有实际应用意义。在线性流速等工艺参数不变的前提下，若样品浓度较低，通常上样时间会较长，此时2柱连续捕获的生产效率会优于3柱连续捕获；若样品浓度较高，通常上样时间会较短，此时3柱连续捕获的生产效率会优于2柱连续捕获。目前各厂家的连续流层析系统均无法实现2柱和3柱连续捕获的自由切换，无法满足不同生产状况下的工艺最优化。
[0004]
chromacon公司的contichrom系统除可应用于连续捕获外，还可应用于目标物与杂质重叠组分的回收纯化以及微量组分的富集，ge公司、novasep公司以及pall公司的连续流层析系统均不具备此类功能。chromacon公司的contichrom系统采用2柱实现此类功能，为确保2根层析柱运行逻辑的合理衔接，层析柱在运行过程中均会出现一定时间的静止过程，对纯化效率有一定影响。


技术实现要素：

[0005]
针对上述问题，本实用新型旨在提供一种实验室型连续流层析系统，可实现单柱batch功能、连续捕获功能、重叠组分回收纯化功能以及微量组分富集功能。
[0006]
为实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：
[0007]
一种实验室型连续流层析系统，包括：
[0008]
第一柱塞泵、第二柱塞泵、第三柱塞泵、第四柱塞泵、第五柱塞泵和第六柱塞泵，所述第一柱塞泵和第二柱塞泵通过第一三通连接件连通，所述第四柱塞泵连接流路选择阀，所述第五柱塞泵和第六柱塞泵通过第六三通连接件连通；
[0009]
第一层析柱、第二层析柱、第三层析柱3根层析柱，各层析柱的前端分别对应设有第一柱前切换阀、第二柱前切换阀和第三柱前切换阀，后端分别对应设有第一柱后切换阀、
第二柱后切换阀和第三柱后切换阀；所述第一柱后切换阀与第二柱前切换阀的对应阀位相通时，第二层析柱串联于第一层析柱后；所述第一柱后切换阀与第三柱前切换阀的对应阀位相通时，第三层析柱串联于第一层析柱后；所述第二柱后切换阀与第三柱前切换阀的对应阀位相通时，第三层析柱串联于第二层析柱后；所述第二柱后切换阀与第一柱前切换阀的对应阀位相通时，第一层析柱串联于第二层析柱后；所述第三柱后切换阀与第一柱前切换阀的对应阀位相通时，第一层析柱串联于第三层析柱后；
[0010]
所述第一柱前切换阀通过第二三通连接件与流路选择阀、第三柱后切换阀连通；所述第二柱前切换阀通过第三三通连接件与流路选择阀、第一柱后切换阀连通；所述第三柱前切换阀分别通过第四三通连接件与流路选择阀、第一柱后切换阀连通，通过第五三通连接件与流路选择阀、第二柱后切换阀连通；各柱前切换阀、柱后切换阀以及流路选择阀的某相同号位为封死状态，在相应流路处于静止状态时，各柱前切换阀、柱后切换阀以及流路选择阀自动归位于该相同号位；
[0011]
所述第一柱塞泵、第二柱塞泵所在第一流路通过第一四通连接件进入3个柱前切换阀其中之一；所述第三柱塞泵所在第二流路通过第二四通连接件进入3个柱前切换阀其中之一；所述第五、第六柱塞泵所在第三流路通过第三四通连接件进入3个柱前切换阀其中之一；
[0012]
各柱后切换阀选择至出口阀、收集器进行收集或排废，或选择至废液出口进行排废。
[0013]
优选地，每根层析柱在柱前切换阀之后、层析柱之前还设有柱前ph检测器、柱前电导率检测器，在层析柱之后、柱后切换阀之前还设有柱后ph检测器、柱后电导率检测器、紫外检测器，每个柱前ph检测器和每个柱后ph检测器均通过ph检测器旁路切换阀控制各ph检测器的在线与旁路。
[0014]
更优选地，各ph检测器可与ph检测器旁路切换阀制作为一个整体，ph探头可直接安装于1个ph阀上，通过切换ph阀控制ph检测器的在线与旁路。
[0015]
更优选地，柱后电导率检测器与紫外检测器制作为一个整体。如采用紫外电导率一体检测器。
[0016]
优选地，每根层析柱上均设有柱位阀，用于选择柱位正向、反向、旁路。
[0017]
优选地，所述实验室型连续流层析系统在任意一根层析柱上实现单柱batch功能；在第一层析柱上运行单柱batch功能时，所述第一柱塞泵、第二柱塞泵所在流路在第一三通连接件处汇合，可选择通过进样阀进样或由第一柱塞泵、第二柱塞泵入口进样，也可选择由第三柱塞泵、第五柱塞泵和第六柱塞泵作为独立上样泵，流路经第一四通连接件、第一柱前切换阀进入第一层析柱，第一柱后切换阀可选择至出口阀、收集器进行收集或排废，或选择至废液出口进行排废，此时第二层析柱、第三层析柱处于静止状态；本实用新型可以同样方式，在第二层析柱、第三层析柱上实现单柱batch功能。
[0018]
优选地，所述实验室型连续流层析系统可通过第一、第二柱前切换阀及其对应的柱后切换阀的流路切换实现2柱连续捕获，或通过3个柱前切换阀及其对应的柱后切换阀的流路切换实现3柱连续捕获；运行连续捕获功能时，使用第一、第二、第三流路中的任意2路，其中1路进行上样、淋洗，另1路进行洗脱、清洗、平衡；在每次上样的初始阶段，2根层析柱并不处于串联状态，直至第1根层析柱出现1％样品流穿时，才使2根层析柱进入串联状态；本
实用新型运行连续捕获功能时，3根层析柱规格、填料种类、装填高度及柱效均需一致。
[0019]
优选地，所述实验室型连续流层析系统可通过3个柱前切换阀及其对应的柱后切换阀的流路切换实现重叠组分回收纯化；运行重叠组分回收纯化功能时，第三柱塞泵为独立上样泵，进行上样、淋洗，第四柱塞泵为独立稀释泵，进行在线稀释；采用第一流路或第三流路其中之一进行洗脱，采用另一流路进行清洗、平衡；本实用新型运行重叠组分回收纯化功能时，3根层析柱规格、填料种类、装填高度及柱效均需一致。
[0020]
优选地，所述实验室型连续流层析系统可通过3个柱前切换阀及其对应的柱后切换阀的流路切换实现微量组分富集；运行微量组分富集功能时，第三柱塞泵为独立上样泵，进行上样、淋洗，第四柱塞泵为独立稀释泵，进行在线稀释；采用第一流路或第三流路其中之一进行洗脱，采用另一流路进行清洗、平衡；进行清洗、平衡时，可采用单泵运行或双泵梯度运行，满足不同类型层析需要；本实用新型通过第一层析柱、第二层析柱交替进行洗脱操作，使微量组分富集于第三层析柱上，最终对第三层析柱进行洗脱和分段收集，可进行一步确保目标物的纯度符合要求；本实用新型运行微量组分富集功能时，第一层析柱、第二层析柱的层析柱规格、填料种类、装填高度及柱效均需一致，第三层析柱可与第一层析柱、第二层析柱保持一致，也可采用其它规格的层析柱或其它类型的填料。
[0021]
优选地，所述实验室型连续流层析系统运行重叠组分回收纯化功能以及微量组分富集功能时，可采用单泵或双泵作为上样泵进行上样、淋洗，以满足反相层析要求。
[0022]
本实用新型的有益效果在于，其有效解决了现有连续流层析系统存在的问题。本实用新型可实现单柱batch功能，还可实现2柱和3柱连续捕获功能的自由切换，满足不同生产状况下的工艺最优化。本实用新型采用3柱进行重叠组分回收纯化和微量组分富集，配备独立上样泵和独立稀释泵，使3柱的运行逻辑合理衔接，同时可选择用单泵或双泵进行清洗、平衡，满足不同类型层析要求，进行重叠组分回收纯化以及微量组分富集的效率优于2柱连续流层析。
附图说明
[0023]
图1为本实用新型实验室型连续流层析系统p&id图。
[0024]
图2为本实用新型实验室型连续流层析系统单柱batch功能p&id图。
具体实施方式
[0025]
下列实施例是对本实用新型的进一步解释和补充，对本实用新型不构成任何限制。
[0026]
如图1所示，p1～6为柱塞泵，as1～6为气泡传感器，v-in1～6为入口阀，pt-p1～6为泵后压力传感器，m1、m2为混合器，v-inject1为进样阀，v-drain1～3为排液阀，tw1～6为三通连接件，fow1～5为四通连接件，v-s1为流路选择阀，column1～3为层析柱，v-pre1～3为柱前切换阀，v-f1～12为ph检测器旁路切换阀，ph-pre1～3为柱前ph检测器，cond-pre1～3为柱前电导率检测器，pt-pre1～3为柱前压力传感器，v-c1～3为柱位阀，pt-post1～3为柱后压力传感器，ph-post1～3为柱后ph检测器，cond-post1～3为柱后电导率检测器，uv1～3为紫外检测器，v-post1～3为柱后切换阀，bpr1、bpr2为背压阀，v-out1为出口阀，collect1为收集器，waste1～6为废液出口。
[0027]
作为一种具体实施方式，v-s1、v-pre1～3和v-post1～3均采用6位置7口阀，v-in1～6和v-out1均采用8位置9口阀。
[0028]
作为一种具体实施方式，ph检测器可与ph检测器旁路切换阀制作为一个整体，ph探头可直接安装于1个ph阀上，通过切换ph阀控制ph检测器的在线与旁路；柱后电导率检测器可与紫外检测器制作为一个整体，如采用紫外电导率一体检测器。
[0029]
作为一种具体实施方式，v-pre1通过tw2与v-s1、v-post3连通；v-pre2通过tw3与v-s1、v-post1连通；v-pre3分别通过tw4与v-s1、v-post1连通，通过tw5与v-s1、v-post2连通；v-pre1～3、v-post1～3以及v-s1的6号位为封死状态，在相应流路处于静止状态时，v-pre1～3、v-post1～3以及v-s1将自动归位于6号位。
[0030]
作为一种具体实施方式，p1、p2流路也称作fow1流路，可选择由fow1进入v-pre1～3其中之一；p3流路也称作fow2流路，可选择由fow2进入v-pre1～3其中之一；p5、p6流路也称作fow3流路，可选择由fow3进入v-pre1～3其中之一；v-post1～3可选择至v-out1、collect1进行收集或排废，也可选择至waste6进行排废。
[0031]
作为一种具体实施方式，v-post1的4号位与v-pre2的4号位相通时，column2串联于column1后；v-post1的5号位与v-pre3的5号位相通时，column3串联于column1后；v-post2的3号位与v-pre3的3号位相通时，column3串联于column2后；v-post2的4号位与v-pre1的4号位相通时，column1串联于column2后；v-post3的5号位与v-pre1的5号位相通时，column1串联于column3后。
[0032]
实施例1单柱batch功能
[0033]
如图2所示，运行单柱batch功能时，p1、p2流路在tw1汇合，可选择通过v-inject1进样或由p1、p2入口进样，也可选择由p3、p5、p6作为独立上样泵，流路经fow1、v-pre1进入column1，ph-prep1及ph-post1可选择在线或旁路，v-c1可选择柱位正向、反向、旁路，v-post1可选择至v-out1、collect1进行收集或排废，也可选择至waste6进行排废，此时p1、p2可运行双泵梯度，column2、column3处于静止状态；本实用新型可以同样方式，在column2、column3实现单柱batch功能。
[0034]
实施例2连续捕获功能
[0035]
运行连续捕获功能时，需使用fow1～3流路中的任意2路，其中1路进行上样、淋洗，另1路进行洗脱、清洗、平衡；上样完毕后，仍采用相同流路进行淋洗，可以将管路中残留的样品量降至最低；在每次上样的初始阶段，2根层析柱并不处于串联状态，直至第1根层析柱出现1％样品流穿时，才使2根层析柱进入串联状态，可使每根层析柱接触上样流穿液的时间最短，降低产品质量风险；本实用新型可通过v-prep1～2、v-post1～2的流路切换实现2柱连续捕获，或通过v-prep1～3、v-post1～3的流路切换实现3柱连续捕获；运行连续捕获功能时，column1～3的层析柱规格、填料种类、装填高度及柱效均需一致。
[0036]
当样品浓度较低时，通常上样时间会较长，洗脱、清洗、再平衡的时间会较短，此时如果采用3柱连续捕获，等待承接样品流穿的层析柱会在较长时间内处于静止状态，影响生产效率，因此推荐采用2柱连续捕获。进行2柱连续捕获，仅需使用column1和column2。假定fow1流路(p1、p2流路)进行上样、淋洗，fow2流路(p3流路)进行洗脱、清洗、平衡，首先由fow2流路对column1和column2进行平衡，waste6进行排废，然后由fow1流路经fow1、v-pre1对column1进行上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废。待column1出现1％样品流穿
时，column2开始串联于column1后，承接column1样品流穿继续上样，上样流穿液经v-post2、waste6进行排废。待column1达到满载后，column1、column2仍保持串联状态，由fow1流路对column1、column2进行淋洗，waste6进行排废。淋洗完毕，column1、column2结束串联状态，由fow1流路经fow1、v-pre2对column2进行上样，上样流穿液经v-post2、waste6进行排废，同时开始由fow2流路经fow2、v-pre1对column1进行洗脱、清洗、再平衡，column1经v-post1、v-out1进行洗脱峰收集及排废，并可选择用collect1进行组分收集。待column2上样至1％样品流穿，且column1完成再平衡时，column1开始串联于column2后，承接column2样品流穿继续上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废。待column2达到满载后，column2、column1仍保持串联状态，由fow1流路对column2、column1进行淋洗，waste6进行排废。淋洗完毕，column2、column1结束串联状态，由fow1流路经fow1、v-pre1对column1进行上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废，同时开始由fow2流路经fow2、v-pre2对column2进行洗脱、清洗、再平衡，column2经v-post2、v-out1进行洗脱峰收集及排废，并可选择用collect1进行组分收集。待column1上样至1％样品流穿，且column2完成再平衡时，column2再次串联于column1后进行上样。这样2柱交替进行上样，即可实现2柱连续捕获。
[0037]
当样品浓度较高时，通常上样时间会较短，洗脱、清洗、再平衡的时间会较长，此时如果采用2柱连续捕获，上样的层析柱出现1％样品流穿后，会在较长时间内处于静止状态，以等待另外1根层析柱完成洗脱、清洗、再平衡，影响生产效率，因此推荐采用3柱连续捕获。假定fow1流路(p1、p2流路)进行上样、淋洗，fow2流路(p3流路)进行洗脱、清洗、平衡，首先由fow2流路对column1～3进行平衡，waste6进行排废，然后由fow1流路经fow1、v-pre1对column1进行上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废。待column1出现1％样品流穿时，column2开始串联于column1后，承接column1样品流穿继续上样，上样流穿液经v-post2、waste6进行排废。待column1达到满载后，column1、column2仍保持串联状态，由fow1流路对column1、column2进行淋洗，waste6进行排废。淋洗完毕，column1、column2结束串联状态，由fow1流路经fow1、v-pre2对column2进行上样，上样流穿液经v-post2、waste6进行排废，同时开始由fow2流路经fow2、v-pre1对column1进行洗脱、清洗、再平衡，column1经v-post1、v-out1进行洗脱峰收集及排废，并可选择用collect1进行组分收集。待column2上样至1％样品流穿时，column3开始串联于column2后，承接column2样品流穿继续上样，上样流穿液经v-post3、waste6进行排废。待column2达到满载后，column2、column3仍保持串联状态，由fow1流路对column2、column3进行淋洗，waste6进行排废。待column2、column3淋洗完毕，且column1完成再平衡时，column2、column3结束串联状态，由fow1流路经fow1、v-pre3对column3进行上样，上样流穿液经v-post3、waste6进行排废，同时开始由fow2流路经fow2、v-pre2对column2进行洗脱、清洗、再平衡，column2经v-post2、v-out1进行洗脱峰收集及排废，并可选择用collect1进行组分收集。待column3上样至1％样品流穿时，column1开始串联于column3后，承接column3样品流穿继续上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废。待column3达到满载后，column3、column1仍保持串联状态，由fow1流路对column3、column1进行淋洗，waste6进行排废。待column3、column1淋洗完毕，且column2完成再平衡时，column3、column1结束串联状态，由fow1流路经fow1、v-pre1对column1进行上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废，同时开始由fow2流路经fow2、v-pre3对column3进行洗脱、清洗、再平衡，column3经v-post3、v-out1进行洗脱峰收集及排废，并可选择用collect1
进行组分收集。待column1上样至1％样品流穿时，column2开始串联于column1后，承接column1样品流穿继续上样，上样流穿液经v-post2、waste6进行排废。这样3柱交替进行上样，即可实现3柱连续捕获。
[0038]
实施例3重叠组分回收纯化功能
[0039]
很多药物的层析精纯需采用线性梯度洗脱或阶梯梯度洗脱，会根据结合物与层析填料的结合力由弱到强依次洗脱下来，由前到后的洗出顺序依次为前杂、目标物、后杂，但在很多情况下，前杂、目标物、后杂并不能完全分开，甚至无法观察到前杂和后杂的明显峰型。这时如果将较窄的目标物区域收作产物，将目标物与前杂、后杂的重叠组分均舍弃掉，则可获得较高纯度的产物，但是收率会较低；如果将较宽的目标物区域，包括目标物与前杂、后杂的重叠组分均收作产物，则可获得较高收率的产物，但是纯度会较低。若要同时保证纯度和收率，则需要将重叠组分单独进行回收和再纯化，目前已有胰岛素、超低分子肝素等多个领域采用了该策略，但是重叠组分样品的储存和管理，均存在一定的安全风险，而且对于批生产的一致性和稳定性，也是很大的挑战。将层析精纯工艺实现连续化，将重叠组分进行在线回收和再纯化，无疑是同时保证纯度和收率的最佳解决方案。
[0040]
本实用新型可采用3柱进行重叠组分回收纯化；运行重叠组分回收纯化功能时，p3为独立上样泵，进行上样、淋洗，p4为独立稀释泵，进行在线稀释，采用fow1流路(p1、p2流路)或fow3流路(p5、p6流路)其中之一进行洗脱，采用另一流路进行清洗、平衡；进行清洗、平衡时，可采用单泵运行或双泵梯度运行，满足不同类型层析需要；p3上样完毕后，仍采用该流路进行淋洗，可以将管路中残留的样品量降至最低；本实用新型可通过v-prep1～3、v-post1～3的流路切换实现重叠组分回收纯化；运行重叠组分回收纯化功能时，column1～3的层析柱规格、填料种类、装填高度及柱效均需一致。
[0041]
假定采用p1、p2流路(fow1流路)进行清洗、平衡，p5、p6流路(fow3流路)进行洗脱，首先由p1、p2对column1～3进行平衡，waste6进行排废，然后由p3经fow2、v-pre1对column1进行上样、淋洗，经v-post1、waste6进行排废。column1淋洗完毕，由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱，前杂经v-post1、waste6进行排废。column1前杂洗脱完毕，column2串联于column1后，回收前杂与目标物的重叠组分，同时由p4经v-s1、tw3对重叠组分进行在线稀释，调整样品理化参数，以确保重叠组分能与column2再结合，稀释后的样品进入column2，column2经v-post2、waste6进行排废。column1前杂与目标物的重叠组分回收完毕，column1、column2结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱，经v-post1、v-out1收集目标物，并可选择用collect1进行组分收集，同时由p3经fow2、v-pre2对column2进行上样，上样流穿液经v-post2、waste6进行排废。待column1目标物收集完毕，且column2上样完毕，column2再次串联于column1后，回收后杂与目标物的重叠组分，同时由p4经v-s1、tw3对重叠组分进行在线稀释，稀释后的样品进入column2，column2经v-post2、waste6进行排废。column1后杂与目标物的重叠组分回收完毕，column1、column2结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱，后杂经v-post1、waste6进行排废，同时开始由p3经fow2、v-pre2对column2进行淋洗。待column1后杂洗脱完毕，且column2淋洗完毕，column2再次串联于column1后，column1、column2均切换至柱位旁路，p5、p6切换至淋洗液梯度，依次经fow3、v-pre1、v-post1、v-pre2、v-post2、waste6对管路进行溶液置换。管路溶液置换完毕，column1、column2结束串联状态，且column1、column2均切换至柱位在
线，开始由p1、p2经fow1、v-pre1对column1进行清洗、再平衡，column1经v-post1、waste6进行排废，同时开始由p5、p6经fow3、v-pre2对column2进行洗脱，前杂经v-post2、waste6进行排废。column2前杂洗脱完毕，column3串联于column2后，回收前杂与目标物的重叠组分，同时由p4经v-s1、tw5对重叠组分进行在线稀释，稀释后的样品进入column3，column3经v-post3、waste6进行排废。column2前杂与目标物的重叠组分回收完毕，column2、column3结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre2对column2进行洗脱，经v-post2、v-out1收集目标物，并可选择用collect1进行组分收集，同时由p3经fow2、v-pre3对column3进行上样，上样流穿液经v-post3、waste6进行排废。待column2目标物收集完毕，且column3上样完毕，column3再次串联于column2后，回收后杂与目标物的重叠组分，同时由p4经v-s1、tw5对重叠组分进行在线稀释，稀释后的样品进入column3，column3经v-post3、waste6进行排废。column2后杂与目标物的重叠组分回收完毕，column2、column3结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre2对column2进行洗脱，后杂经v-post2、waste6进行排废，同时开始由p3经fow2、v-pre3对column3进行淋洗。待column2后杂洗脱完毕，且column3淋洗完毕，column3再次串联于column2后，column2、column3均切换至柱位旁路，p5、p6切换至淋洗液梯度，依次经fow3、v-pre2、v-post2、v-pre3、v-post3、waste6对管路进行溶液置换。待管路溶液置换完毕，且column1清洗、再平衡完毕，column2、column3结束串联状态，且column2、column3均切换至柱位在线，开始由p1、p2经fow1、v-pre2对column2进行清洗、再平衡，column2经v-post2、waste6进行排废，同时开始由p5、p6经fow3、v-pre3对column3进行洗脱，前杂经v-post3、waste6进行排废。column3前杂洗脱完毕，column1串联于column3后，回收前杂与目标物的重叠组分，同时由p4经v-s1、tw2对重叠组分进行在线稀释，稀释后的样品进入column1，column1经v-post1、waste6进行排废。column3前杂与目标物的重叠组分回收完毕，column3、column1结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre3对column3进行洗脱，经v-post3、v-out1收集目标物，并可选择用collect1进行组分收集，同时由p3经fow2、v-pre1对column1进行上样，上样流穿液经v-post1、waste6进行排废。待column3目标物收集完毕，且column1上样完毕，column1再次串联于column3后，回收后杂与目标物的重叠组分，同时由p4经v-s1、tw2对重叠组分进行在线稀释，稀释后的样品进入column1，column1经v-post1、waste6进行排废。column3后杂与目标物的重叠组分回收完毕，column3、column1结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre3对column3进行洗脱，后杂经v-post3、waste6进行排废，同时开始由p3经fow2、v-pre1对column1进行淋洗。待column3后杂洗脱完毕，且column1淋洗完毕，column1再次串联于column3后，column3、column1均切换至柱位旁路，p5、p6切换至淋洗液梯度，依次经fow3、v-pre3、v-post3、v-pre1、v-post1、waste6对管路进行溶液置换。待管路溶液置换完毕，且column2清洗、再平衡完毕，column3、column1结束串联状态，且column3、column1均切换至柱位在线，开始由p1、p2经fow1、v-pre3对column3进行清洗、再平衡，column3经v-post3、waste6进行排废，同时开始由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱。这样3柱交替进行洗脱操作，即可实现重叠组分连续回收纯化。
[0042]
在回收过程中，需保证回收组分的样品量与新上样的样品量之和，不得高于第一次上样的样品量，这可通过峰面积积分计算，确认各组分所占比例进行保证。在线稀释过程中，稀释流速是恒定的，因此稀释液与回收组分的流速比例，需保证最高洗脱浓度可以被稀释到与淋洗液(或初始洗脱浓度)相同。在进行离子交换层析或疏水层析时，仅需采用单泵
进行清洗、平衡，因此不需要p1、p2运行梯度，这时还可通过ph-pre1～3、cond-pre1～3监测稀释后的参数情况。在进行反相层析时，通常需要a、b两相混合进行清洗、平衡，因此需要p1、p2运行梯度，这时不需要监测ph、电导率，需保证所有ph检测器旁路，如果运行压力过高，需要取出电导率电极，用假体进行替代或短接相应管路。
[0043]
实施例4微量组分富集功能
[0044]
某些药物组分的含量是很低的，需要通过富集手段进行纯化。很多药物需采用线性梯度洗脱或阶梯梯度洗脱以使各组分得到分离，各组分会根据与层析填料的结合力由弱到强依次洗脱下来。本实用新型可将富集工艺实现连续化，将微量组分进行在线回收和多次富集，最终洗脱时采用分段收集，从而保证获得足量且高纯度的目标组分。
[0045]
本实用新型可采用3柱进行微量组分富集；运行微量组分富集功能时，p3为独立上样泵，进行上样、淋洗，p4为独立稀释泵，进行在线稀释，采用fow1流路(p1、p2流路)或fow3流路(p5、p6流路)其中之一进行洗脱，采用另一流路进行清洗、平衡；进行清洗、平衡时，可采用单泵运行或双泵梯度运行，满足不同类型层析需要；p3上样完毕后，仍采用该流路进行淋洗，可以将管路中残留的样品量降至最低；本实用新型通过column1、column2交替进行洗脱操作，使微量组分富集于column3上，最终对column3进行洗脱和分段收集，可进行一步确保目标物的纯度符合要求；本实用新型可通过v-prep1～3、v-post1～3的流路切换实现微量组分富集；运行微量组分富集功能时，column1、column2的层析柱规格、填料种类、装填高度及柱效均需一致，column3可与column1、column2保持一致，也可采用其它规格的层析柱或其它类型的填料。
[0046]
假定采用p1、p2流路(fow1流路)进行清洗、平衡，p5、p6流路(fow3流路)进行洗脱，首先由p1、p2对column1～3进行平衡，waste6进行排废，然后由p3经fow2、v-pre1对column1进行上样、淋洗，经v-post1、waste6进行排废。column1淋洗完毕，由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱，经v-post1、waste6进行排废，同时开始由p1、p2经fow1、v-pre2对column2进行清洗、再平衡，并继续由p3经fow2、v-pre2对column2进行上样、淋洗，column2经v-post2、waste6进行排废。待column1洗脱至微量组分出现时，column3串联于column1后，回收微量组分，同时由p4经v-s1、tw4对微量组分进行在线稀释，调整理化参数，以确保微量组分能与column3再结合，稀释后的样品进入column3，column3经v-post3、waste6进行排废。column1微量组分回收完毕，column1、column3结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱，经v-post1、waste6进行排废。待column1洗脱完毕，column3再次串联于column1后，column1、column3均切换至柱位旁路，p5、p6切换至淋洗液梯度，依次经fow3、v-pre1、v-post1、v-pre3、v-post3、waste6对管路进行溶液置换。待管路溶液置换完毕，且column2淋洗完毕，column1、column3结束串联状态，且column1、column3均切换至柱位在线，开始由p5、p6经fow3、v-pre2对column2进行洗脱，经v-post2、waste6进行排废，同时开始由p1、p2经fow1、v-pre1对column1进行清洗、再平衡，并继续由p3经fow2、v-pre1对column1进行上样、淋洗，column1经v-post1、waste6进行排废。待column2洗脱至微量组分出现时，column3串联于column2后，回收微量组分，同时由p4经v-s1、tw5对微量组分进行在线稀释，稀释后的样品进入column3，column3经v-post3、waste6进行排废。column2微量组分回收完毕，column2、column3结束串联状态，继续由p5、p6经fow3、v-pre2对column2进行洗脱，经v-post2、waste6进行排废。待column2洗脱完毕，column3再次串联于column2后，
column2、column3均切换至柱位旁路，p5、p6切换至淋洗液梯度，依次经fow3、v-pre2、v-post2、v-pre3、v-post3、waste6对管路进行溶液置换。待管路溶液置换完毕，且column1淋洗完毕，column2、column3结束串联状态，且column2、column3均切换至柱位在线，开始由p5、p6经fow3、v-pre1对column1进行洗脱，经v-post1、waste6进行排废，同时开始由p1、p2经fow1、v-pre2对column2进行清洗、再平衡，并继续由p3经fow2、v-pre2对column2进行上样、淋洗，column2经v-post2、waste6进行排废。这样通过column1、column2交替进行洗脱操作，即可使微量组分富集于column3上。待column3微量组分富集达到目标量时，由p5、p6经fow3、v-pre3对column3进行淋洗和洗脱，经v-post3、v-out1收集目标物，并可选择用collect1进行组分收集。
[0047]
在运行微量组分富集功能的初始阶段，column1开始进行洗脱的同时，column2开始进行清洗、再平衡和上样，而不是column2直接进行上样，这是为了使初始阶段的运行逻辑与循环富集阶段相同，以便于系统进行自动化控制。
[0048]
在线稀释过程中，稀释流速是恒定的，因此稀释液与回收组分的流速比例，需保证最高洗脱浓度可以被稀释到与淋洗液(或初始洗脱浓度)相同。在进行离子交换层析或疏水层析时，仅需采用单泵进行清洗、平衡，因此不需要p1、p2运行梯度，这时还可通过ph-pre3、cond-pre3监测稀释后的参数情况。在进行反相层析时，通常需要a、b两相混合进行清洗、平衡，因此需要p1、p2运行梯度，这时不需要监测ph、电导率，需保证所有ph检测器旁路，如果运行压力过高，需要取出电导率电极，用假体进行替代或短接相应管路。
[0049]
尽管通过以上实施例对本实用新型进行了揭示，但本实用新型的保护范围并不局限于此，在不偏离本实用新型构思的条件下，对以上各结构所做的变形、替换等均将落入本实用新型的权利要求范围内。