1.本发明属于pcpa溶解技术领域，尤其涉及一种高浓度pcpa的溶解方法及应用。
背景技术：
2.失眠是一种日间功能受到影响的睡眠障碍，已经成为重要的公共卫生问题。各地对失眠进行了流行病学调研。张云淑等通过整群随机抽样方法对河北省18岁人群失眠患病情况进行调查后发现14.5%人患有失眠,老年人患病率23.3%。刘鹏飞等对甘肃省成年人进行调查，发现22.3%的人患有失眠症。其中在老年人和中年妇女的失眠中，郁证失眠较为常见，且危害较大。制备失眠模型进行动物研究是研究郁证失眠机制的重要方法。由于失眠是一种与主观体验相关的精神障碍，其模型的制备与躯体疾病相比更加困难，模型制备成功的标准不够明确。现有的失眠症模型制备方法主要有物理刺激和药物干预。如水中平台法、束缚应激法、不可预知应激法、强迫运动法、旋转圆筒法、水上转盘法、低压法、低氧法、咖啡因法、酒精法、pcpa法等等；不同的方法从不同的角度制备失眠模型，但同时引起了一些其他疾病的症状，相比之下，pcpa制备郁证模型通常有失眠表现，失眠模型也可有郁证表现。目前发表文献最多的失眠模型是pcpa动物模型；pcpa是一种色氨酸羟化酶抑制剂，可以阻断5-羟色胺的合成，导致抑郁和失眠。因此许多学者使用pcpa建立郁证模型及失眠模型，进行郁证及失眠机制的相关研究。目前的问题在于郁证模型和失眠模型要求的pcpa剂量均在300mg/kg(每kg大鼠需注射300mg pcpa)，甚至更高。而pcpa仅仅微溶于水，25℃ 水中的溶解度为 0.96mg /ml。按350mg/kg的剂量计算，每kg大鼠需要用超过350ml的生理盐水配制pcpa饱和溶液。这样，给药质量超过了大鼠自身体质量的1/3，显然不切合实际。且由于pcpa在水中起泡沫，使得悬浊液难以注射，泡沫悬液易堵塞针头，用力过大常常导致注射针头受压脱落，另外，用力过大很容易刺伤动物内脏，为此，寻找pcpa的对大鼠脑无毒害作用的溶解液成为应用pcpa制备郁证及失眠动物模型的关键。
技术实现要素：
3.本发明的目的是提供一种高浓度pcpa的溶解方法及应用。
4.为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种高浓度pcpa的溶解方法，于常温下将pcpa溶解于花生油或大豆油中，其浓度可高达100g/l，即每升花生油或大豆油溶解100g的pcpa。
5.一种高浓度pcpa溶液的应用，将其通过皮下注射或灌胃方式用于制备失眠动物模型中，建立郁证失眠模型。
6.花生油和大豆油为食用油，没有毒副作用，现有文献记载花生油润肠通便，用于蛔虫性肠梗阻为4～8两口服；用于肠炎，地图舌均为穴位注射（足三里、上巨虚），每穴1毫升。在基础医学实验中，花生油常常用于溶解脂溶性物质，然后灌胃制备动物模型。如李俊涛应用花生油溶解邻苯二甲酸二丁酯(di-butylphthalate,dbp)灌胃制作生殖功能损伤大鼠模型；有研究表明大豆油对大鼠的胃肠道有保护作用；花生油和大豆油溶解pcpa的原理是相
似相容，花生油和pcpa都是有机物，都有酸的结构，花生油含油酸41.2%，亚油酸37.6%等不饱和脂肪酸，油酸难溶于水，能与醇、醚、氯仿、苯、轻质汽油等相混溶，是油类、脂肪酸和油溶性物质的优良溶剂，亚油酸溶于乙醇、乙醚、氯仿，能与二甲基甲酰胺和油类混溶，不溶于水和甘油。
7.本发明具有的优点是：本发明通过选用花生油或大豆油作为pcpa的溶剂，在实验中发现将350mg pcpa加入逐渐加量的花生油中，发现2ml花生油可配制流动性尚可的混悬液，可用于灌胃制备郁证及失眠动物模型中，建立郁证模型或失眠模型，对郁证及失眠研究提供数据的支撑。4ml花生油配制350mgpcpa流动性很好，可用于注射，不堵塞针头。
具体实施方式实施例
8.一种高浓度pcpa的溶解方法，于常温下将pcpa溶解于花生油或大豆油中，其浓度可高达100mg/ml。在制备郁证模型或失眠大鼠模型时，通常剂量为每千克大鼠用350mg或更高的pcpa。大鼠的花生油灌胃剂量或皮下注射剂量通常为5ml/kg（每kg大鼠给pcpa花生油溶液5ml)。通常从实验中心购买的用于实验的大鼠在7~8周，质量在200g左右，需要pcpa70mg，600g的老年大鼠需要210mg的pcpa，以花生油溶解对pcpa的量完全可以满足制备失眠大鼠模型的需要。
9.对比例现有技术制备动物模型时，70mg的pcpa需溶解于70ml 25度水中，供1只7~8周的大鼠（200g) 1天注射应用。实际上这种溶解技术根本无法应用。所以一些学者尝试进行改良pcpa的溶解方法。如现有改良的方案：naoh 溶液配制弱碱性生理盐水溶解 pcpa法 ，将naoh片剂溶于水，配成 5%naoh 溶液，在0.9%nacl 溶液中缓慢滴入naoh溶液 ，用ph 计调节至 ph 7~8 之间，加入 pcpa，搅拌后用超声机超声15 min 后，腹腔注射。我们进行了重复性实验，对温度进行25到60度范围的不同温度的实验，发现这种方法配制的液体静置2分钟后即分为3层：上层为pcpa泡沫，中间为混有氢氧化钠的生理盐水，下层为大量的pcpa絮状沉淀。从泡沫和絮状沉淀看，pcpa基本上没有溶解。可以注射的只有中间层，含有极微量的pcpa。强行注射带泡沫和颗粒的混悬液只能导致针头堵塞，且很容易导致动物死亡。理论上，生理盐水本身的ph值就在7~8之间，加naoh将ph调至7~8本身就属于无意义的操作，甚至会破坏pcpa的结构。
10.然而现有应用pcpa制备大鼠失眠及抑郁模型的论文中大鼠用药剂量为腹腔注射pcpa 350mg/kg或者更高。在溶解度不足1mg/ml的情况下配制泡沫悬浊液，不仅堵塞针头，残留药液，容易导致动物死亡，而且浪费严重。每克药物超过150元，供2~5只大鼠应用一次，成本很高，但成功注射量甚微。郭海波，王慧.pcpa在动物失眠模型中的应用概述[j].2019:29(6):135 － 140．魏歆然，郑雪娜，裴 芸，吴雪芬，刘 丽，陈小丽，文琪琦，岳增辉，魏高文.大鼠失眠模型造模中pcpa混悬液改良法的探讨[j].湖南中医药大学学报，2018，38（9）：986-989。两篇文章都指出了pcpa的溶解度不能满足注射剂量的需要，改用混悬液仍然不能去除泡沫、团块，导致针头堵塞和动物死亡。
[0011]
实验例
为了达到制备失眠及抑郁动物模型的pcpa给药剂量350mg/kg~700mg/kg，将所需量的pcpa在室温自然大气压下置于容积适合的容器中，如离心管中，玻璃器皿中，然后加入适量的花生油或大豆油，边加入边用玻璃器皿搅拌，直至完全溶解、没有颗粒、没有团块状物为止。这一过程约需几分钟，浓度可高达100mg/ml。可以进行超声，也可以不进行超声。200g的大鼠灌胃体积可以控制在1ml药液以内。
[0012]
操作步骤如下所示：（以花生油为例）。
[0013]
1.称取所需的pcpa，置于容器中。
[0014]
2.缓慢加入新鲜清洁的花生油，边加边用玻璃棒搅拌，直至无颗粒，形成乳状液为止。