A(SSA)检测单元、降钙素原（PCT)检测单元及抵抗素 (resistin)检测单元依次平均分布于该检测芯片的反应池中。
[0025] 各个检测单元预先固定有各个检测指标发生免疫反应所需的抗体，固定方式是物 理吸附、化学交联。
[0026] 实施例2
[0027] 与实施例1基本一样，所不同的是，微流控芯片由聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA)、聚对 苯二甲酸乙二醇酯（PET)和聚酯（PC)材料加工而成。
[0028] 各个检测单元预先固定有各个检测指标发生免疫反应所需的抗体，固定方式是溶 胶-凝胶包埋。
[0029] 实施例3
[0030]与实施例1基本一样，所不同的是，微流控芯片由玻璃石英、聚二甲基硅氧烷 (PDMS)、聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA)、聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET)和聚酯（PC)材料加工而 成。
[0031] 各个检测单元预先固定有各个检测指标发生免疫反应所需的抗体，固定方式是微 珠固定。
[0032] 实施例4实施例1~3-种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备 方法
[0033] 该微流控芯片是利用ELISA双抗夹心法，利用连接于固相载体上的抗体和标记抗 体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体 免疫复合物。具体制备过程如下：
[0034] (1)芯片氧化
[0035] a、移取0. 5M似104加在芯片的每个反应区，将芯片放入湿盒中，置于37°C恒温箱 内避光反应0.5小时；
[0036] b、芯片从湿盒中取出，将反应区内剩余液体用吸水纸从背面吸干，用蒸馏水洗涤 纸上未反应的高碘酸钠。
[0037] (2)包被抗体
[0038] a、在芯片的5个反应区分别加浓度为10 μ g/mL TPS II、hs-CRP、SSA、PCT及抵抗 素单克隆抗体，放入湿盒中，置于37°C恒温箱内反应0. 5小时；
[0039] b、取出芯片，将反应区内剩余液体用吸水纸从背面吸干，用蒸馏水洗涤纸上未反 应的包被抗体。
[0040] (3)封闭
[0041] 在芯片的5个反应区各加质量分数为1% BSA溶液，放入湿盒中，置于37°C恒温箱 内反应0.5小时。
[0042] (4)加抗原
[0043] a、在芯片第一排依次分别依次加入 0/10/20/50/100/200ng/ml 的 TPS II、hs-CRP、 SSA、PCT及抵抗素标准品，在下面两排中每三点加入同一血清样品，放入湿盒中，置于37°C 恒温箱内反应0. 5小时；
[0044] b、取出芯片，将反应区内剩余液体用吸水纸从背面吸干，用蒸馏水洗去多余的抗 原。（5)加标记抗体
[0045] a、在芯片的5个反应区分别加入TPS II、hs_CRP、SSA、PCT及抵抗素的荧光标记抗 体，放入湿盒中，置于37°C恒温箱内反应0. 5小时；
[0046] b、取出芯片，将反应区内剩余液体用吸水纸从背面吸干，用蒸馏水洗涤纸上未反 应的标记抗体。
[0047] 通过以上步骤即可完成该急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备。所制 得的芯片如图1(a) (b) (c)所示。
[0048] 实施例5上述制备的微流控芯片的检测方法以及检测结果
[0049] 检测单元中预先固定相应检测指标检测所需的被荧光或酶标记的抗体；在检测过 程中，待检测血样品溶液借助外接的泵阀系统或其他的控流系统依次经由进样口和微流体 通道进入反应池，并在反应池中与各个检测单元内固定的荧光或酶标记的抗体进行抗原抗 体特异性反应，产生特定的信号；最后通过荧光显微镜或其他光学检测仪器，采集反应产物 产生的信号强度并进行分析，从而实现待测样品中的抗原含量的检测。本试验中所用的血 量为10微升，所得检测结果如表1。
[0050] 表1微流控芯片检测结果
[0051]
【主权项】
1. 一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在于，所述检测微流控 芯片包括进样口（1)、微流体通道（2)、反应池（3)、检测单元（5)和出样口（4)，所述进样口 (1 )、反应池（3 )和出样口（ 4 )由微流体通道（2 )串行联接，所述检测单元（5 )分布于反应池 (3)中。
2. 根据权利要求1所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在 于，所述检测单元（5)包括五个检测单元，依次为胰蛋白酶原-2检测单元、超敏C反应蛋白 检测单元、血清淀粉样蛋白A检测单元、降钙素原检测单元及抵抗素检测单元。
3. 根据权利要求1所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在 于，所述的微流控芯片由玻璃石英、聚二甲基硅氧烷、聚甲基丙烯酸甲酯、聚对苯二甲酸乙 二醇酯或聚酯材料中的一种或几种加工而成。
4. 根据权利要求1所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在 于，所述芯片的形状为圆柱状。
5. 根据权利要求2所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在 于，所述各个检测单元预先固定有各个检测指标发生免疫反应所需的抗体，固定方式是物 理吸附、化学交联、溶胶-凝胶包埋、微珠固定中的一种或几种。
6. 根据权利要求1所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在 于，所述的反应池（3)其容积大于反应体系所需的各种溶液体积的最大值。
7. 权利要求1~6任一项所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备 方法，其特征在于，该微流控芯片是利用ELISA双抗夹心法，利用连接于固相载体上的抗 体和标记抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗 原-标记抗体免疫复合物。
8. 根据权利要求7所述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备方法， 其特征在于，具体包括以下步骤：1)芯片氧化；2)包被抗体；3)封闭；4)加抗原；5)加标 记抗体。
9. 权利要求1~6任一项用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的检测方法，其 特征在于，包括以下步骤：待检测血样品溶液借助外接的泵阀系统或其他的控流系统依次 经由进样口和微流体通道进入反应池，并在反应池中与各个检测单元内固定的荧光或酶标 记的抗体进行抗原抗体特异性反应，产生特定的信号；最后采集反应产物产生的信号强度 并进行分析，从而实现待测样品中的抗原含量的检测，然后结合制定的急症腹痛疾病的筛 查方案，实现对急症腹痛疾病的排查。
【专利摘要】本发明公开了一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，所述检测微流控芯片包括进样口、微流体通道、反应池、检测单元和出样口，所述进样口、反应池和出样口由微流体通道串行联接，所述检测单元分布于反应池中。本发明还公开了上述用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备方法和检测方法。发明基于微流控芯片技术平台，集样品进样、免疫反应和光电检测于一体，极大地简化了操作流程，降低了样品和试剂消耗，并且不需要配备昂贵的仪器，极大地降低了使用成本，使现场即时检测成为可能，具有可预见的巨大的经济价值和社会价值。本发明具有检测便捷、样品消耗少、反应效率高、检测时间短、检测成本低等优点。
【IPC分类】G01N33-68, G01N33-573, G01N33-543, B01L3-00
【公开号】CN104826677
【申请号】CN201510224957
【发明人】许佩佩
【申请人】南京闻智生物科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月5日