专利名称：血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板及其制作方法
技术领域：
本发明涉及一种血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板及其制作方法，它是在 做血红蛋白电泳分离时所使用的载体，属体外诊断试剂。
背景技术：
传统的手工电泳方法是在电泳槽内加缓冲液，用醋酸纤维素膜作载 体，用手工将血清加在载体上，然后接通电源，开始电泳，它的缺点是: ①操作起来很麻烦，做一次电泳标本，需一个人忙七、八个小时才能完 成；②电泳质量不高，分辨率低，区带不明显且歪歪扭扭，精度差，又 不能长期保存；③数据处理麻烦，电泳完了用剪刀把每条区带剪开，分 头在一种专用溶液里进行洗脱，把洗下来的液体在比色计上进行比色， 换算成百分比，这种方法非常不准确，而且计算起来也特别麻烦； 手 工点样无法控制它的点样量，点样存在不一致性，电泳区带不在一条线 上，且电泳出来的区带是歪歪扭扭的。其实电泳分离技术能为临床诊断 提供重要依据，但由于方法落后，操作复杂，电泳质量不高，提供的数 据不准确，使医院逐渐不开展电泳分离技术，阻碍了这门学科的发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使用方便，节省时间，分离区带清晰准 确，分辨率高，保存期长的，可用于血红蛋白电泳分离时作载体用的琼 脂糖凝胶板及其制作方法。
本发明的目的是由如下技术方案实现的，琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板，上层为琼脂糖胶，两层之间用无化学反应透明胶粘合。
琼脂糖胶的配方如下
三羟甲基氨基甲烷(C4H N03) 12~ 15克
乙二胺四乙酸二钠(C1()H14N2Na208 2H20) 1 2克
硼酸(H3B03) 4 6克
磷酸二氢钾(KH2P04) 3.5 5.5克
磷酸氢二钠 (Na2HP04) 2 4克
将上述五种组分按配比溶入1000毫升蒸馏水中配制成溶液 琼脂糖 每100毫升上述溶液中含0.5 2.0克
其制作方法包括以下步骤-
① 先将三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、硼酸、磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠按上述配比溶入蒸馏水中，搅拌均匀，充分溶解，配制成溶 液；再按上述相应的配比放入琼脂糖搅拌，将盛放上述混合溶液的容器， 放在水浴锅内加热，保湿保温，待琼脂糖全部溶解后保持在70°C-85°。度 温；
② 将亲水性塑料板上表面中央位置涂上无化学反应透明胶，四周留 3毫米左右的边框不涂胶，然后置于胎具的底模板上，再将上模板扣上， 用定位销固定。
③ 将固定好的胎具放在恒温加热板上，温度恒在50-65°C;
倒胶，用专用吸液器吸出足够量的琼脂糖胶，加压挤在胎具内， 在压力的作用下，琼脂糖胶能顺畅排净胎具内的气体而充满胎具空间；
⑤把浇满琼脂糖胶的胎具放在阶梯冷却恒温板上，慢慢的平稳冷
却，使琼脂糖胶慢慢凝成半干式状态；
⑥ 20分钟后用专用工具把胎具打开，把铺好的凝胶板进行检验，完 好无损即可放在盒内封好；再用铝塑袋密封。
所述制作方法步骤④中所用的压力，只是用手挤压的压力。
所述凝胶板厚度在0.3 0.9毫米，且均匀不能出现凹凸不平现象，不 能厚薄不均匀，如果出现上述现象就无法保证电泳区带的质量。故对表 面平整性、均匀性要求很严格。凝胶板一般为正方形，也可为长方形， 上层琼脂糖胶比底层亲水性塑料板四周均小3毫米左右。
所述无化学反应的透明胶可为明胶或猪皮胶等。
所用胎具可拆装，当亲水性塑料板置于胎具底模板时，亲水性塑料 板已涂有无化学反应的透明胶，因此，当琼脂糖胶占满胎具空间时，其 底部即与亲水性塑料板粘合成一体。
成型胎具出气孔要开的合理科学，不产生死角，使液态琼脂糖胶能 很均匀的把气排出去，从而使琼脂糖胶薄层流的也就很均匀；
发明原理分离血红蛋白的方法很多，但电泳法是最为常用而且是 既经济又准确的方法之一，很多异常血红蛋白病都是用电泳方法发现的， 因为在血红蛋白中的珠蛋白和其他蛋白一样为两性电解质，在不同的缓 冲液中可带正或负电荷；在直流电场作用下，正负电荷会向其相反的方 向移动，由于分子所带电荷量不同，泳动距离速度不同，从而可以把HbA、 HbA2和HbF等多种变异分子分离出来，从而判断不同病理的变化。例 地中海贫血是常见的一种遗传血液病，釆用电泳法能经济快速准确的判
断出是否是"地贫"基因携带者。
本发明必须处于半干式状态中才能在电场作用下泳出好电泳区带片 子，泳出清晰度高的区带，所以必须密封包装，使用时才可打开。
本发明是放在干式平板电泳仪的电泳平板上使用。
在使用本发明前要将样本进行预处理
1. 采静脉血，放入带有抗凝剂的试管中，吸出上层血浆，将剩余的血 压积红细胞中加五倍量的生理盐水，混匀，离心，吸出上清液弃去，再 用生理盐水重复如上方法洗三至五次，最后将上层清液全部吸出弃去， 向洗净的压积红细胞中加一倍的蒸馏水、0.5倍的四氯化碳，振荡充分混
匀，以4000转/分的转速离心十五分钟，取上层液加入样品槽中，准备进 行电泳分离。
2. 把包装琼脂糖凝胶板铝塑袋用剪刀剪开，取出塑料包装盒，把塑料 盒轻轻打开，并把琼脂糖凝胶板取出，轻轻放在电泳平板上。
本发明的优点是
1、 表面平整，厚薄均匀，厚度仅在0.3 0.9毫米。
2、 它是干式平板电泳仪最佳的配套试剂，不仅使用寿命长， 一致性 好，而且使用方便，即拆即用节省时间，分离区带清晰准确，分辨率高。
3、 提供的数据准确，能为临床诊断提供重要依据。
图1为血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板俯平面结构示意图
图2为图1的A-A剖面图
图3为胎具结构示意图
图中l.亲水性塑料板，2.琼脂糖胶，3.底模板，4.上模板，5.定位销， 6.挤胶孔，7.出气孔；箭头分别为挤胶方向和出气方向。
具体实施例方式
实施例1:
本实施例所述的琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板1， 上层为琼脂糖胶2，两层之间用无化学反应透明胶粘合。 琼脂糖胶2的配方如下
三羟甲基氨基甲垸(C4H N03) 12克
乙二胺四乙酸二钠(C1()H14N2Na2082H20) 1.5克 硼酸(H3B03) 6克
磷酸二氢钾(KH2P04) 3.5克
磷酸氢二钠 (Na2HP04) 3克
将上述五种组分按配比溶入1000毫升蒸馏水中配制成溶液 琼脂糖 每100毫升上述溶液中含0.5克
其制作方法包括以下步骤-
① 先将三羟甲基氨基甲垸、乙二胺四乙酸二钠、硼酸、磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠按上述配比溶入蒸馏水中，搅拌均匀，充分溶解，配制成溶 液；再按上述相应的配比放入琼脂糖搅拌，将盛放上述混合溶液的容器， 放在水浴锅内加热，保湿保温，待琼脂糖全部溶解后保持在7(TC-85-C恒 温；
② 将亲水性塑料板上表面中央位置涂上无化学反应透明胶，四周留
3毫米左右的边框不涂胶，然后置于胎具的底模板上，再将上模板扣上，用定位销固定。
③将固定好的胎具放在恒温加热板上，温度恒在50-65°C;
④倒胶，用专用吸液器吸出足够量的琼脂糖胶，加压挤在胎具内， 在压力的作用下，琼脂糖胶能顺畅排净胎具内的气体而充满胎具空间；
⑤把浇满琼脂糖胶的胎具放在阶梯冷却恒温板上，慢慢的平稳冷 却，使琼脂糖胶慢慢凝成半干式状态；
⑥20分钟后用专用工具把胎具打开，把铺好的凝胶板进行检验，完 好无损即可放在盒内封好；再用铝塑袋密封。
所述凝胶板为正方形，厚度在0,3 0.9毫米，且厚薄均匀无凹凸不平 现象；琼脂糖胶2比底层亲水性塑料板1四周均小3毫米。
实施例2:
本实施例所述的琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板1, 上层为琼脂糖胶2，两层之间用无化学反应透明胶粘合。
琼脂糖胶2的配方如下
三羟甲基氨基甲烷(C4H N03) 13.5克
乙二胺四乙酸二钠(C1()H14N2Na208 2H20) 2克
硼酸(H3B03) 4克
磷酸二氢钾(KH2P04) 4.5克
磷酸氢二钠(Na2HP04) 4克
将上述五种组分按配比溶入1000毫升蒸馏水中配制成溶液 琼脂糖 每100毫升上述溶液中含1.2克
其制作方法同实施例l。
实施例3:
本实施例所述的琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板1， 上层为琼脂糖胶2，两层之间用无化学反应透明胶粘合。
琼脂糖胶2的配方如下
三羟甲基氨基甲烷(C4H11N03) 15克
乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2Na208 2H20) 1克
硼酸(H3B03) 5克
磷酸二氢钾(KH2P04) 5.5克
磷酸氢二钠 (Na2HP04) 2克
将上述五种组分按配比溶入1000毫升蒸馏水中配制成溶液
琼脂糖 每100毫升上述溶液中含2.0克
其制作方法同实施例l。
权利要求
1、一种血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征在于凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板(1)，上层为琼脂糖胶(2)，两层之间用无化学反应透明胶粘合。
2、 如权利要求l所述的血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征在于 所述凝胶板厚度在0.3~0.9毫米。
3、 如权利要求l所述的血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征在于 所述琼脂糖胶(2)的配方如下-三羟甲基氨基甲烷 12 15克乙二胺四乙酸二钠 1 2克硼酸 4~6克磷酸二氢钾 3.5 5.5克磷酸氢二钠 2 ~ 4克将上述五种组分按配比溶入1000毫升蒸馏水中配制成溶液琼脂糖每100毫升上述溶液中含0.5 2.0克
4、 一种血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板的制作方法，其特征在于包括 以下步骤-①先将三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、硼酸、磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠按上述配比溶入蒸馏水中，搅拌均匀，充分溶解，配制成溶液；再按上述相应的配比放入琼脂糖搅拌，将盛放上述混合溶液的容器， 放在水浴锅内加热，保湿保温，待琼脂糖全部溶解后保持在70℃-85℃恒 温；② 将亲水性塑料板上表面中央位置涂上无化学反应透明胶，四周留3 毫米左右的边框不涂胶，然后置于胎具的底模板上，再将上模板扣上， 用定位销固定。③ 将固定好的胎具放在恒温加热板上，温度恒在50-65℃; ④倒胶，用专用吸液器吸出足够量的琼脂糖胶，加压挤在胎具内，在压力的作用下，琼脂糖胶能顺畅排净胎具内的气体而充满胎具空间；⑤ 把浇满琼脂糖胶的胎具放在阶梯冷却恒温板上，慢慢的平稳冷却， 使琼脂糖胶慢慢凝成半干式状态；⑥ 20分钟后用专用工具把胎具打开，把铺好的凝胶板进行检验，完 好无损即放在盒内封好；再用铝塑袋密封。
全文摘要
本发明涉及一种血红蛋白电泳琼脂糖凝胶板及其制作方法，凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板，上层为琼脂糖胶。琼脂糖胶由琼脂糖、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠配制而成。其制作方法是把琼脂糖胶配好放在容器内，在水浴锅内加热，待全部溶解后保持恒温；把胎具置于恒温加热板上，用吸液器吸出足够量的琼脂糖胶，加压挤在胎具内，把浇满琼脂糖胶的胎具放在阶梯冷却恒温板上，慢慢冷却凝成半干式状态后，把胎具打开，把铺好的凝胶板放在盒内封好。本发明是干式平板电泳仪最佳的配套试剂，不仅一致性好，且使用方便，即拆即用，节省时间，电泳分离区带清晰准确，分辨率好，精度高，使用寿命长。
文档编号G01N27/453GK101173910SQ200610114128
公开日2008年5月7日 申请日期2006年10月30日 优先权日2006年10月30日
发明者姜尚武, 文庆成, 王兆成 申请人:姜尚武;王兆成;文庆成