专利名称：旋毛虫病快速诊断试纸条的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种旋毛虫病诊断试剂显示器具，特别是涉及一种旋毛虫病快速诊断试纸条。
背景技术：
众所周知，旋毛虫病是人畜共患的一种寄生虫病。其感染宿主众多，流行范围非常广泛，传染途径复杂，约有150多种动物能感染旋虫病，对人类身体健康造成很大威胁。旋毛虫病对畜牧业(特别是养猪业)，肉食品加工业，外贸出口业造成巨大的经济损失。旋毛虫的含虫包囊对外界环境具有很强的抵抗能力，如在--12℃的环境中可存活57天，对含有旋毛虫的肉类进行熏烤、腌制、爆炒及曝晒等很难杀死包囊内的旋毛虫的幼虫，人类感染旋毛虫的途径，往往是吃了保持活力的肉类食品中的旋毛虫肌幼虫，如水饺、爆炒肉片或被污染的凉菜等。人被感染后，其临床表现为微热，身体虚弱、易疲劳，有时有腹泻，呕吐，腹痛现象；严重者会出现咀嚼、吞咽和说话困难，声音嘶哑，呼吸及眼球疼痛，最为严重的可能会波及心脏和中枢神经，造成心力衰竭、昏迷甚至死亡。所以旋毛虫病对人类健康为害是人之共知的。但是很多动物如猪等对旋毛虫具有很大的耐受力，感染旋毛虫的病猪几乎不表现临床症状。这给人类预防旋毛虫病又带来一定困难。1979年某省猪的旋毛虫病感染率为0.4％，而到1982年，感染率上升到0.85％，其中1980年～1982年，某地区猪的旋毛虫病感染率为13.8％，而1986年猪的旋毛虫血清学阳性率上升到18.7％，据1996年不完全统计，仅某省旋毛虫病患者已达1万多人，可看出旋毛虫病对人们身体健康危害日益严重。长期以来，为确保肉食品安全，兽医卫生检验部门主要依靠传统屠宰后取隔肌压片镜检法，或用胃蛋白酶消化肌肉收集虫体的方法诊断旋毛虫病。但上述方法，检出率底，部分旋毛虫病猪漏检流向市场，危害人们健康，影响食品安全。同时上述两种检验方法不能在家畜宰杀前进行，不适应现代化肉类加工厂屠宰作业生产线的现场检疫，也不适应市场检疫，也无法提供活猪出口检疫，给生猪的检疫带来较大困难。为此国内外科技工作者又创造其它几种诊断旋毛虫病的方法。
(1)皮内试验，该方法是应用变态反应来诊断旋毛虫病。该诊断方法所需时间较短，对人体的诊断约15分钟，对猪体诊断约需30～45分钟。但该方法的突出缺陷是存在严重的假阳性反应和交叉反应，只有60％的检率，目前很少采用。
(2)补体结合反应(CF)，由于并非所有的抗体均能固定补体、所以该法只能检出一部分旋毛虫抗体，其敏感性和特异性较差，并且，补体结合反应操作复杂，费时费工，不同操作者之间存在差异较大，影响结果判断，造成难以推广应用。
(3)凝集试验，将旋毛虫可溶性抗原吸附于某些载体表面，然后用吸附抗原的载体颗粒与血清中的抗体进行间接凝集试验，以检测旋毛虫病，近几年来发展起来的旋毛虫病凝集试验检测方法，主要有皂土絮状凝集试验(BFT)，乳胶凝集试验(LA)，间接血凝试验(IHA)等。这些方法的优点是较大提高了旋毛虫病的检出率，但操作复杂，要求操作人员的素质较高，并且只能在实验室内进行，无法到现场检测。
(4)沉淀试验，主要有微量沉淀试验，对流免疫电泳，琼脂扩散试验(AGP)等。这些方法的敏感性评价不一，所用试剂和方法欠标准化。
(5)免疫荧光抗体技术(IF)，IF不仅可用于旋毛虫病的检测，也可用于旋毛虫抗原的定位。应用抗原抗体反应的敏感性和特异性同显微镜形态学观察相结合，具有敏感、特异、稳定及结果判定准确直观等优点，是目前检测旋毛虫病的一种较好方法。但存在制片工作繁琐，工作量大，显微镜观察带有主观性，同时非特异性荧光的干扰也常常影响结果的判定，需要较好显微设备。
(6)酶联免疫吸附试验(ELISA)，将ELISA技术应用于旋毛虫病的检测，大大提高了检出率，而且非常敏感；假阳性率大大下降，大幅度提高准确度，使旋毛虫病的免疫学检测取得突破性进展。当前我们研制成功的猪旋毛虫病快诊断试剂盒已得到广泛应用，但操作复杂，且需要附带4种试剂才能完成实验操作，对操作人员的技术水平要求较高，无法实现现场检测。
(7)DNA检测技术，是从分子水平上检测旋毛虫感染的一种高新技术，具有高度的敏感性和特异性。对旋毛虫的分类和鉴定开辟了新的途径，使旋毛虫病的研究更加深入。但由于旋毛虫本身及其在宿主体内寄生部位的特殊性。使得难以从感染动物血液及其组织或排泄物中扩增到旋毛虫DNA，因而用PCR等基因检测技术对旋毛虫的检测受到限制。
综合上述，从二十世纪四十年代开始至今，许多学者探索了旋毛虫病的很多检测方法，不断取得进步，不断提高检测的准确率，但始终未能克服特异性不强和出现假阳性现象，上述方法均存在操作复杂、繁琐，有的还需要专用仪器设备，需要专业人员操作。不适应现代化肉类联合加工厂的流水作业生产线操作，造成旋毛虫病猪的漏检，危害人们的食用安全，威胁人类健康。
发明内容
本发明的目的是利用旋毛虫抗原、抗体技术，建立旋毛虫特异、敏感、快速、简便的旋毛虫病诊断方法，研制出两种对人和动物旋毛虫病的快速诊断试纸条(I)和(II)。
本发明的技术方案是一种旋毛虫病快速诊断试纸条(I)含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗体W1或W2纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，分别用旋毛虫的单克隆抗体W1或W2溶液和抗小鼠IgG抗体溶液在纤维素膜层上印制诊断印迹“|”或“一”和对照印迹“一”或“|”。
支撑层可为硬质塑胶片条，或为不吸水硬纸条，纤维层可为玻璃棉，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，吸水材料层可用吸水纸，旋毛虫金标抗体W1或W2纤维层，为胶金标记抗旋毛虫分泌抗原(ES)的单克隆抗体吸附在玻璃棉上，诊断印迹和对照印迹组合可为“+”，“‖”，“＝”，中的一种，选用“+”或“‖”或“＝”组合印迹较好，在纤维层，金标W1或W2玻璃棉，吸水材料层上覆盖有塑胶保护膜，在纤维层和金标W1或W2纤维层交界处对应保护膜偏向纤维层一侧约0.5cm处印制样品标记线。
一种旋毛虫病快速诊断试纸条(II)，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗原M纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，用抗人或抗某动物IgG抗体Xi溶液在纤维素膜层上印制检测印迹“|”或“一”，用抗旋毛虫ES抗原的单克隆抗体溶液在纤维素膜层上印制对照印迹“一”或“|”。
不吸水的支撑层可用硬塑料胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层可用玻璃棉，金标抗原M纤维层为吸附金标ES抗原的玻璃棉，金标抗原M为胶金标记旋毛虫的ES抗原，检测印迹和对照印迹的组合可为“+”，或“‖”，或“＝”，或 或 ，或 ，或 中的一种，选用“+”或“‖”或“＝”组合印迹较好，在纤维层，金标M纤维层及吸水材料层上覆盖固定有塑胶保护膜，在纤维层和金标M纤维层交界处对应保护膜偏纤维层一侧约0.5cm处印制样品标记线。
抗人或抗某动物IgG的抗体Xi印制检测印迹“|”或“一”可为下列抗体中的一种；抗人IgG抗体X1，抗猪IgG抗体X2，抗猫IgG抗体X3，抗狗IgG抗体X4，……抗某动物IgG抗体Xn，旋毛虫ES抗原包括虫体分泌ES抗原及表达ES抗原。
本发明具有积极有益效果。
(1)旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)，特异性强，敏感性高。两种诊断试纸条都使用以胶金标记高亲和力单克隆抗体及重组ES抗原为基础试剂制备而成，金标抗体和抗原中金颗粒与抗体或ES抗原分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶金标记对单克隆抗体的特异性及亲和力和对ES抗原的抗原性影响很小，且具有很高的标记率，使两种快速诊断试纸条具有特异性强，敏感性高的特性。
(2)操作简便、快速，大幅度缩短诊断时间。只要将快速诊断试纸条插入待测样品中10秒左右，在2分钟内即可判断诊断结果。
(3)显示诊断结果形象，直观、准确、明了。两种诊断试纸条以显示红棕色和“‖”或“-”和“+”作为诊断结果的阴性或阳性标记，结果判断甚为形象，直观，准确、明了，易记，不会出现假阳性和误判。
(4)无需仪器设备，无需其它任何试剂，无需专业检测人员，投资少，成本低，将会深受客户欢迎。
(5)实现现场操作诊断，一步到位，将深受饲养场，肉类联合加工厂，海关等部门欢迎，适合我国国情。
(6)容易推广应用，由于诊断操作简单，无需专门培训，可说是人人都可操作，容易推广应用。
图1旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)结构示意2旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)俯视结构示意图之一图3旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)俯视结构示意图之二具体实施例方式旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)可广泛用于人和动物(猪，猫，狗等)的旋毛虫病快速诊断。为完成本发明的实施，首先必须完成制备旋毛虫分泌抗原ES，制备抗ES抗原的单克隆抗体，制备抗人，抗小鼠、抗猪、抗猫、抗狗等动物IgG抗体。用于制备金标W1和M纤维层。
(1)旋毛虫ES抗原的制备以表达性质粒pCDM8为载体，构建了猪旋毛虫肌幼虫表达性cDNA基因文库。以该基因文库转染COS7细胞后，用免疫组化法鉴定阳性表达细胞，阳性细胞用微吸管吸取获得，提取制备细胞中的质料DNA转化大肠杆菌并快速克隆，应用该法准确地获得了全息ES抗原(分子量为45kda、49kda)两个编码基因即TS·ESI和TS·ESII。用0.25％胰酶(含0.02％EDTA)消化细胞培养瓶中单层COS7细胞，将消化细胞1000r/min，离心10min，弃上清液，沉淀加入DMEM-10培养基(含10％胎牛血清)重新悬浮细胞，进行细胞计数。将细胞悬浮液稀为105个/ml，接种24孔细胞培养板，每孔接种1ml，置37℃ 5％CO2培训箱中培养24h.，培养后细胞覆盖率为60％。用DMEM-SF(无血清DMEM)洗涤COS7细胞一次，每孔加入1ml。用EMEM稀释表达质料DNA和脂质体，每孔转染细胞按以下程序操作，取Eppendorf 1支管，加入DMEM-SF 100μl，文库DNA 3μl(0.5μg/μl)，混合均匀。另取Eppendorf 1支管依次加入，EMEM-SF 100μl，脂质体10μl，混合均匀，室温放置40min后，将两个Eppendorf管混合均匀，室温放置15min，加入800μl DMEM-SF，轻轻混合后加入COS7细胞孔内。置37℃ 5％ CO2培养箱中培养20h.，吸出DMEM-SF培养基，用DMEM-10洗涤一次，加入DMEM-10每孔1ml，继续培养48～60h后，收取细胞培养上清液并浓缩，以镍螯合树脂纯化重组ES抗原，用于制备抗ES抗原单克隆抗体及金标抗原(M)。
(2)制备抗ES抗原单克隆抗体以50mg-100mg/只的ES抗原免疫BALB/c系小鼠三次，每次间隔15～30天，第三次加强免疫后3～4天将免疫小鼠眼球放血，拉颈致死，于75％酒精浸泡5-10min，无菌取其脾脏，剪碎并经100目尼龙网过滤，1000r/min离心10min，收集脾细胞；将1×108的脾细胞与2-5×107的NS0浆细胞瘤细胞混合，1000r/min离心10min，弃上清，细胞沉淀于37℃水浴中缓缓加入0.7-1ml的40％-59％PEG4000(pH8.5-9.0)作用1min，然后缓慢加入无血清1640培养基15ml，以终止PEG的作用，37℃水浴5-10min，1000r/min离心10min弃上清，将细胞沉淀重悬于HAT选择培养基中，并加入96孔培养板(100ul-200ul/孔)置37℃5％CO2培养箱中培养。培养7-10天后，以5mg-10mg/ml的ES抗原包被酶标板(40孔/块)以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测杂交瘤的培养上清，挑取强阳性细胞克隆(CD492＝0.8以上)，进行连续三次的有限稀释法克隆化，所生产的杂交瘤细胞染色体数为92-98，其分泌的单克隆抗体特异地与ES抗原反应，而不与其它无关蛋白发生交叉反应，亲和力常数达109-10，轻链亚型为K或入，重链亚型为IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3、针对ES抗原决定簇的单克隆抗体，用于制备金标抗体棉。
(3)制备金标抗体(W1或W2)、金标抗原M及金标抗体W1或W2玻璃棉或金标M玻璃棉。
以柠檬酸钠还原法制备金溶胶，即在沸腾的50-100ml0.01％-0.05％氯金酸水溶液中加入2-4ml的0.5％-2％柠檬酸三钠溶液，获得直径15nm左右的胶金。以0.1mol/L K2CO3调胶金pH至8.5-9.5，以1∶1000-1∶3000的标记比将待标记的抗ES单克隆抗体W1或W2或ES抗原加入pH8.5-9.5金溶胶中，标记10min后，加20％PEG10000至终浓度0.05％，4℃1500-3000g离心20min，除去未结合的金颗粒，4℃15000g离心1h，弃上清，获初步纯化金标蛋白混合物后，用丙烯葡聚糖S-400柱层析，分离纯化金标蛋白，获得胶金标记抗体或抗原。将1∶100-1∶500稀释的胶金标记抗体或抗原吸附于精制玻璃棉中，4℃低温真空干燥，制备成金标抗体棉或金标抗原棉。
(4)制备抗人及抗小鼠、抗猪、抗猫、抗狗等动物IgG抗体以饱和硫酸铵提取人血清IgG蛋白，取1份人血清加2份PBS(7.2)混匀，加等体积饱和硫酸铵混匀，置4℃冰箱2h，4℃12000r/min离心15min，弃上清；以两倍血清体积的PBS(7.2)溶解沉淀，加饱和硫酸铵至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃12000r/min离心15min，弃上清，以少量PBS(7.2)溶解沉淀，置4℃冰箱在PBS(7.2)中过夜透析，换液2-3次，4℃12000r/min离心15min，收集上清，以紫外分光光度计测定其蛋白浓度，以50mg-100mg/kg体重的人血清IgG蛋白经皮下和肌肉注射免疫健康羊或家兔3-4次，末次免疫10天后，静脉采血，以ELISA测定其血清抗体效价在1∶2000以上，心脏采血或颈动脉放血，收集其高免血清，以饱和硫酸铵提取羊或兔抗人IgG抗体(方法与提取人血清IgG相同，不重述)。该方法适用于抗小鼠、抗猪、抗猫、抗狗等动物IgG抗体的制备不重述。
(5)旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)的反应原理旋毛虫病快速诊断试纸条(I)的反应原理是，当旋毛虫病快速诊断试纸条(I)样品端插入待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动旋毛虫ES抗原及金标玻璃棉中的金标抗体W1或W2一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗入滤纸中(吸水层)，在扩散过程中ES抗原可与抗ES抗原的金标抗体W1或W2相结合，形成ES抗原-金标抗体复合物，该复合物又与纤维素膜层上的抗ES单克隆抗体检测印迹相结合，生成红棕色″-″或″|″标记，部分未与检测印迹结合的金标抗体W1或W2与纤维膜层上的抗小鼠IgG抗体对照印迹相结合，生成红棕色“|”或“—”标记，两种标记互相组合叠加结果，形成阳性显示“+”或“‖”，反之，金标抗体(W1或W2)由于没有形式ES抗原-金标抗体复合物，不能与纤维素膜层上的抗ES单克隆抗体检测印迹相结合，只能与纤维素膜层上的抗小鼠IgG抗体对照印迹相结合，生成单一红棕色阴性标记“|”或“—”，如果试纸条检测结果，纤维素膜上既没有阳性显示标记“+”或“‖”，也没有阴性显示标记“|”或“—”，则表时试纸条已失效，不能再用于检测。
旋毛虫病快速诊断试纸条(II)的反应原理是，当旋毛虫病快速诊断试纸条II样品端插入待检样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动旋毛虫抗体及金标抗原M一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗入吸水层滤纸中，在扩散过程中旋毛虫抗体可与ES金标抗原M相结合，形成ES金标抗原-抗体复合物，该复合物又可与纤维素膜层上的抗人或抗猪、抗猫、抗狗等抗体(Xi)检测印迹相结合，生成红棕色“—”或“|”标记，部分未与检测印迹结合的金标抗原M与纤维素膜层上抗ES抗原单克隆抗体对照印迹相结合，生成红棕色“|”或“—”标记，两种标记互相组合叠加结果，形成阳性显示“+”或“‖”，反之，金标抗原M由于没有形成金标ES抗原-抗体复合物，不能与纤维素膜层上的抗人或抗猪、或抗猫、或抗狗等抗体(Xi)检测印迹相结合，只能与纤维素膜层上的抗ES单克隆抗体对照印迹相结合，生成单一的红棕色阴性标记“|”或“—”，如果试纸条检测结果，纤维素膜上既没有阳性显示标记“+”或“‖”，也没有阴性显示标记“|”或“—”，则表明试纸条已失效，不能继续使用。
(6)制备旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)的待测样品及检测方法检测样品液的制备，旋毛虫病快速诊断试纸条用于检测血液、肉及肉制品旋毛虫感染，采集人或猪、猫、狗等动物抗凝血，或将猪、猫、狗等动物的肉及肉制品的样品剪碎、研磨，以生理盐水制成1∶2～1∶10待检样品悬液，旋毛虫病抗体检测试纸条用于检测血清抗体，采集人或猪、猫、狗等动物静脉血制备血清，用生理盐水将样品作1∶2、1∶4、1∶8.....倍比稀释，制备检测样品溶液。
将旋毛虫病快速诊断试纸条(I)或(II)的样品端插入待检样品溶液，插入深度不要超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果。
结果判定如果在纤维素膜上有红棕色阳性标记“+”或“‖”显示表示检测结果为阳性，即在所检样品中检出旋毛虫抗原或旋毛虫抗体，表示被检测的人或动物患有旋毛虫病。如果纤维素膜上有红棕色阴性标记“—”或“|”显示，表示检测结果为阴性，即在所检样品中未检出旋毛虫抗原或旋毛虫抗体，表示被检测的人或动物未患旋毛虫病。如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条失效，要停止使用，报废。
实施例一人旋毛虫病快速诊断试纸条(I)，参见图1和2或图1和3。首先按实施例(1)步骤制备旋毛虫ES抗原，按实施例(2)步骤制备旋毛虫金标抗体W1或W2，以及相对应的金标W1或W2纤维棉，即金标W1或W2玻璃棉。按实施例中(4)步骤制备抗小鼠IgG抗体溶液。
图中，1为支撑层，采用塑胶薄片制成，2为玻璃棉(样品端)即纤维层，3为吸附有旋毛虫金标抗体W1或W2的玻璃棉，即金标W1或W2棉，4为纤维素膜层，本实施例选用硝酸纤维素膜，5为吸水材料层，选用滤纸(即手柄端)上述标号2、3、4、5依次粘固在支撑层1上的塑胶薄片上，构成反应试剂载体吸附层，使用旋毛虫ES抗原单克隆抗体溶液在硝酸纤维素膜层4上印制诊断印迹6“|”或“—”，使用抗小鼠IgG抗体溶液在硝酸纤维素膜层4印制对照印迹7“—”或“|”。两种印迹叠加后呈“+”或“‖”，在玻璃棉2，旋毛虫金标W1或W2棉3上覆盖有保护膜8-1，滤纸吸水层5的上面覆盖固定有保护膜8-2，本实施例采用浅黄色透明塑料膜。在玻璃棉2和旋毛虫金标W1或W2棉3的交界处偏玻璃棉2一侧约0.5cm处印制标记线9，9的右边印制有箭头指向标记线，箭头下印有max字样。试纸条全长约8cm，宽约0.3cm。
制备待测样品溶液，对待检人进行静脉采血1～2ml，加适量抗凝剂，用生理盐水制成1∶5至1∶10待测样品悬液。
诊断检测方法是将人的旋毛虫病快速诊断试纸条(I)的样品端即玻璃棉纤维层2，插入待检样品溶液中，插入深度不要超过标记线9，约10秒后，取出试纸条，水平放置，2分钟左右即可看到快速诊断结果，如果在硝酸纤维素膜层4上显示有红棕色“+”或“‖”标记，表示检测样品呈阳性，即所采人的血样中存在旋毛虫ES抗原，被检测者患有旋毛虫病；如果硝酸纤维素膜层4上显示“-”或“|”的红棕色标记，表示所检样品呈阴性，说明被检测血液中不存在旋毛虫ES抗原，即被检测者未患旋毛虫病。如果硝酸纤维素膜层4上不显标记，即表示该试纸条已失效。
实施例二人旋毛虫病快速诊断试纸条(II)。本实施例的快速诊断试纸条(II)，其结构与实施例一快速诊断试纸条(I)基本相同，相同的结构不再重复叙述。不同的是3为旋毛虫金标抗原M棉，6为抗人IgG抗体溶液印制的检测印迹“|”或“—”，7为旋毛虫抗ES抗原的单克隆抗体溶液印制的对照印迹“—”或“|”。
待测样品溶液制备对待人进行静脉采血1～2ml制备血清，用生理盐水作1∶2，1∶4，1∶8，......倍比稀释，制成检测样品溶液。
其检测方法的步骤，显示结果方式，以及判断方法同实施例一不重叙。
实施例三，猪旋毛虫病快速诊断试纸条(I)，参见图1和2，或图1和3，本实施例的试纸条(I)结构和实施例一试纸条(I)相同不重述。
猪的待测样品，采猪血，按人血相同的处理方法处理，不重述，若采用猪肉或猪肉制品为待检样品，先将猪肉或猪肉制品剪碎或研磨制成1∶5～1∶10的样品溶液，其检测方法及结果观察同实施例一，不重述。
实施例四猪旋毛虫病快速诊断试纸条(II)，本实施例试纸条(II)的结构基本相同实施例二，有一点不同的是在硝酸纤维素膜层4的诊断印迹6使用抗猪IgG抗体(X2)溶液印制，猪的待测样品溶液的制备同实施例三，不重述。
实施例五猫旋毛虫病快速诊断试纸条(I)其结构和检测方法、显示结果和实施例一相同，不重述。猫的待测样品制备同实施例三中猪的待测样品，不重述。
实施例六猫旋毛虫病快速诊断试纸条(II)，同其结构检测方法，显示结果同实施例二，不重述。有点不同的是在硝酸纤维素膜层4上的诊断印迹6使用抗猫IgG抗体(X3)溶液印制。待测样品的制备同实施例二和三类似不重述。
实施例七狗旋毛虫病快速诊断试纸条(I)，其结构检测方法，显示结果，同实施例一，不重述。其待测样品溶液的制备同实施例三不重述。
实施例八狗旋毛虫病快速诊断试纸条(II)其结构，检测方法，显示结果同实施例二，不重述。有一点不同的是硝酸纤维素膜层4上的诊断印迹采用抗狗IgG抗体(X4)印制。其待测样品溶液的制备同实施例二和实施例三类似，不重述。
其它动物旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)可用类似方法制造设计出，在这里不再重述。
权利要求
1.一种旋毛虫病快速诊断试纸条(I)含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，其特征是吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗体W1或W2纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，分别用旋毛虫的单克隆抗体 或W2溶液和抗小鼠IgG抗体溶液在纤维素膜层上印制诊断印迹“|”或“一”和对照印迹“一”或“|”。
2.根据权利要求1所述的试纸条(I)，其特征是支撑层可为硬质塑胶片条，或为不吸水硬纸条，纤维层可为玻璃棉，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，吸水材料层可用吸水纸，旋毛虫金标抗体W1或W2纤维层，为胶金标记抗旋毛虫分泌抗原(ES)的单克隆抗体吸附在玻璃棉上，诊断印迹和对照印迹组合可为“+”，“‖”，“＝”， 中的一种，选用“+”或“‖”或“＝”组合印迹较好，在纤维层，金标W1或W2玻璃棉，吸水材料层上覆盖有塑胶保护膜，在纤维层和金标W1或W2纤维层交界处对应保护膜偏向纤维层一侧约0.5cm处印制样品标记线。
3.一种旋毛虫病快速诊断试纸条(II)含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，其特征是吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗原M纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，用抗人或抗某动物IgG抗体Xi溶液在纤维素膜层上印制检测印迹“|”或“一”，用抗旋毛虫ES抗原的单克隆抗体溶液在纤维素膜层上印制对照印迹“一”或“|”。
4.根据权利要求3所述的试纸条(II)，其特征是不吸水的支撑层可用硬塑料胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层可用玻璃棉，金标M纤维层为吸附金标ES抗原的玻璃棉，金标抗原M为胶金标记旋毛虫的ES抗原，检测印迹和对照印迹的组合可为“+”，或“‖”，或“＝”，或 或 或 或 中的一种，选用“+”或“‖”或“＝”组合印迹较好，在纤维层，金标抗原M纤维层及吸水材料层上覆盖固定有塑胶保护膜，在纤维层和金标抗原M纤维层交界处对应保护膜偏纤维层一侧约0.5cm处印制样品标记线。
5.根据权利要求3或4所述的试纸条(II)，其特征是抗人或抗某动物IgG的抗体Xi印制检测印迹“|”或“一”可为下列抗体中的一种；抗人IgG抗体X1，抗猪IgG抗体X2，抗猫IgG抗体X3，抗狗IgG抗体X4，……抗某动物IgG抗体Xn，旋毛虫ES抗原包括虫体分泌ES抗原及表达ES抗原。
全文摘要
本发明涉及一种旋毛虫病诊断试剂显示的器具，特别是涉及一种旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)，含有支撑层、反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗体W
文档编号G01N33/53GK1403813SQ0210192
公开日2003年3月19日 申请日期2002年1月14日 优先权日2001年12月15日
发明者张改平, 李学伍, 杨艳艳, 邓瑞广, 肖治军, 康晓笛, 郭军庆, 李青梅, 李灵霞, 王爱萍, 杨继飞 申请人:河南省农业科学院生物技术研究所