专利名称：一种宫血宁胶囊质量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种药物的分析测定方法。更具体地说，本发明涉及一种对宫血宁胶囊主要有效成分的测定方法。
技术方案本发明提供的宫血宁胶囊质量测定方法，包括下述顺序的步骤(1)取胶囊内容物0.13克，加乙醇10毫升，振摇10分钟，过滤，取滤液1毫升，置瓷蒸发皿中，蒸去乙醇，残渣加醋酐0.5毫升使溶解，加硫酸2滴，初显黄色，渐变红色、紫色、污绿色；(2)取胶囊内容物0.13克，加水10毫升，混匀，置分液漏斗中，加正丁醇10毫升，振摇提取，取正丁醇液，用水5毫升洗涤，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1毫升使溶解，作为供试品溶液。另取重楼皂苷VI、重楼皂苷VII对照品，加甲醇制成每1毫升各含1毫克的溶液，作为对照品溶液。
(3)分别取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以重量比为5∶4∶3∶0.6的氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量百分数为10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为45∶55的乙腈—水为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按重楼皂苷VI峰计算，应不低于5000。
(5)取宫血宁胶囊内容物1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25毫升，密塞，称定重量，在功率250W，频率25KHz的条件下超声处理40分钟，放冷后，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀。滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
(6)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，产品中含重楼皂苷VI(C39H62O13)不得少于0.4％，即可。
有益效果由于宫血宁胶囊中重楼的主要成分为多种甾体皂苷，有较强的生理活性，其中重楼皂苷VI为比较典型的成分，含量也较高，故选择其为测定对象。本发明采用辛烷基硅胶键合相色谱柱，建立了一种可靠的分析测定方法，可从原料、半成品、成品着手，进行全面的定量检测，然后根据测量数据采取相应生产措施，有效控制产品质量，成功地解决了宫血宁胶囊分析测定中长期存在的技术难题。
在
图1中，1-对照品，2-宫血宁样品，a-重楼皂苷VI。
具体实施例方式
(1)仪器与试药高效液相色谱仪，沃特斯M510泵、717自动进样器，PDA检测器，TCM柱温控制系统，2010工作站；分析纯甲醇，色谱纯乙腈，中科院昆明植物研究所提供的重楼皂苷VI对照品。
(2)色谱条件色谱柱Symmetry C84.6×250mm；流动相为乙腈—水(45∶55)；检测波长203nm；柱温40℃；流量1ml/min。此条件下重楼皂VI与其它组份能达基线分离，如附图1所示。
(3)对照品溶液的制备精密称取重楼皂苷VI对照品适量，加甲醇制成每1毫升含0.4毫克的溶液，作为对照品溶液。
(4)供试品溶液的制备采用甲醇提取重楼甾体皂苷类成份，对冷浸提取17小时、索氏提取5小时和超声处理15、30、40、60、120分钟进行对比试验，实验结果表明前两种方法测定结果与超声处理40分钟大致相同，其中超声处理40分钟与处理120分钟结果一致，故选择操作简单、效率高的超声处理40分钟，试验中还采用硅胶、C18、吸附树脂等材料进行样品纯化处理，但回收率不佳故未采用。从长期检测情况看，由于样品成分较单一，污染成分较少，未经纯化处理的供试品溶液对色谱柱的污染较小。
(5)线性关系的考察精密吸取对照品溶液5，10，15，20和25μl按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，重楼皂苷VI进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程Y＝394432x-95464 γ＝0.9995表明重楼皂苷VI在2.2～11.0μg范围内具有良好线性关系。
(6)稳定性试验重楼皂苷VI的甲醇溶液室温放置考察43天，其峰面积值变化甚微，较为稳定。
(7)精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，重复5次，测得重楼皂苷VI峰面积积分值的相对标准偏差＜2％，结果见表1。
(8)重复性试验取同一供试品，分别进行供试溶液制备，测定，重复5次，按计算公式1计算重楼皂苷VI的含量，测得重楼皂苷VI含量相对标准偏差＜5％，结果列于表2。
计算公式1 表1.精密度试验结果表2.重复性试验结果次数 峰面积 RSD％ 次数含量％ RSD％1 1629941 1 0.7602 1631148 2 0.7673 1635705 1.343 0.7941.734 1679307 4 0.7695 1662263 5 0.781(9)回收率试验采用加样回收法，取已知含量的宫血宁样品，添加重楼皂苷VI对照品，按上述供试品溶液制备方法制备，测定，按计算公式2计算回收率，平均回收率为97.1％，结果列于表3。
计算公式2。 (10)样品测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，按计算公式1计算重楼皂苷VI含量，30批样品测定结果列于表4.测试结果表明，重楼皂苷VI含量最低为0.26％，最高为0.96％，大鼠子宫收缩检查均符合规定，为保证产品质量，按90％的合格率确定低限，故确定含量限度为产品中重楼皂苷VI的含量不得低于0.4％。
表3.回收率测定结果序号 样品中苷VI的量添加苷VI的量测出苷VI的量 回收率％平均回收率(mg) (mg) (mg) (η＝3)％1 4.5932.00 6.373 96.82 4.5672.40 6.887 96.73 4.6542.80 7.502 101.797.14 4.5774.40 8.715 94.05 4.5495.50 9.833 96.1表4.宫血宁样品测定结果
权利要求
1.一种宫血宁胶囊质量的测定方法，该方法包括下述顺序的步骤(1)取胶囊内容物0.13克，加乙醇10毫升，振摇10分钟，过滤，取滤液1毫升，置瓷蒸发皿中，蒸去乙醇，残渣加醋酐0.5毫升使溶解，加硫酸2滴，初显黄色，渐变红色、紫色、污绿色；(2)取胶囊内容物0.13克，加水10毫升，混匀，置分液漏斗中，加正丁醇10毫升，振摇提取，取正丁醇液，用水5毫升洗涤，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1毫升使溶解，作为供试品溶液；另取重楼皂苷VI、重楼皂苷VII对照品，加甲醇制成每1毫升各含1毫克的溶液，作为对照品溶液；(3)分别取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以重量比为5∶4∶3∶0.6的氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量百分数为10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为45∶55的乙腈—水为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按重楼皂苷VI峰计算，应不低于5000；(5)取宫血宁胶囊内容物1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25毫升，密塞，称定重量，在功率250W，频率25KHz的条件下超声处理40分钟，放冷后，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀；滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；(6)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，产品中含重楼皂苷VI(C39H62O13)不得少于0.4％，即可。
全文摘要
一种官血宁胶囊质量的测定方法,涉及药物有效成分的分析。取宫血宁胶囊内容物1克,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25毫升,密塞,称定重量,在功率250W,频率25KHz的条件下超声处理40分钟,放冷后,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀。滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪测定,产品中含重楼皂苷VI(C
文档编号G01N33/15GK1384357SQ0211381
公开日2002年12月11日 申请日期2002年5月30日 优先权日2002年5月30日
发明者韦建荣, 赵永言, 高崇昆, 赵守仁 申请人:云南白药集团天然药物研究院