专利名称：珍菊降压片质量控制方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及珍菊降压片的质量控制方法。
背景技术：
珍菊降压片是一种疗效确切的中西药复方降压制剂，其处方是由野菊花膏粉、珍珠层粉、芦丁、盐酸可乐定和氢氯噻嗪组成，该制剂的质量控制标准已收载入部颁药品标准。但在现有标准中仅采用定性的鉴别方法鉴别制剂中酚性或黄酮类成份，专属性差。
由于没有定量的控制方法，使制剂有效成份量无法控制，造成制剂治疗剂量的不稳定，影响疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于采用现代分析手段，提供珍菊降压片有效质量控制方法。
珍菊降压片由野菊花膏粉、珍珠层粉、芦丁、盐酸可乐定和氢氯噻嗪组成，其中野菊花膏粉是经水提醇沉后与淀粉混合干燥后获得的，该膏粉是珍菊降压片处方中重要的一味原料，相对其它药味而言，其受原药材质量影响最大。由于原药品标准中对野菊花膏粉质量缺乏有效的控制，使得珍菊降压片的质量评价体系缺乏比较客观的指标，因此，设立野菊花膏粉质量控制，对提高和发挥野菊花在珍菊降压片中的药效具有重要意义。
野菊花主含蒙花甙、木犀草素及木犀草甙、刺槐素及刺槐甙等，本发明曾探索以芦丁、木犀草素和蒙花甙为对照的分光光度法测定野菊花提取物和制剂中总黄酮含量，其中以芦丁和木犀草素为对照的测定能获得满意的平行结果(二者的差异仅是因为对照品分子量不同所引起)，而以蒙花甙作对照者，则不具备分光光度法测定黄酮的基础。分析原因是因为该黄酮的酚羟基被甲基化，无法与铝盐形成络合反应。显然，以芦丁和木犀草素为对照的分光光度法测定野菊花提取物具有实际意义，但若应用到制剂中，则会因处方中有大量芦丁存在而显得无专一性了。对此，本发明尝试了以蒙花甙为对照的HPLC法测定野菊花提取物和制剂中有效成分含量试验。试验证明，HPLC法稳定可靠、专一性强，对控制珍菊降压片中重要药味野菊花提取物质量起到关键作用，同时对提升珍菊降压片整体的质量水准也具有积极的推进作用。另外制剂处方中有芦丁成分，故设立了以芦丁作为对照品的芦丁薄层层析鉴别方法。
本发明根据上述分析及试验确定了能全面控制珍菊降压片的质量控制方法，即对制剂采用定性和定量相结合的检测方法，包括1、鉴别(1)采用薄层层析法鉴别芦丁成份；(2)采用珍珠层粉专属性反应鉴别珍珠层粉成份；(3)采用氢氯噻嗪专属性反应鉴别氢氯噻嗪成份；2、含量测定采用高效液相色谱法定量测定野菊花膏粉中蒙花苷的含量。
本发明珍菊降压片质量控制方法具体步骤包括1、鉴别(1)取珍菊降压片2片，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，超声处理20分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；另取芦丁对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国2000年版药典一部附录VIB)试验，分别吸取上述二种溶液2-4ul，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，吹干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的颜色斑点。
(2)取珍菊降压片5片，除去薄膜衣，研细，加适量50％乙醇溶解，滤过，取不溶物，加稀盐酸即产生泡沸，通入氢氧化钙试液中，产生白色沉淀。另将酸性溶液加氨试液中和至中性，加草酸铵试液即产生白色沉淀，分离，所得沉淀不溶于醋酸，但溶于盐酸。
(3)取本品5片，研细，加丙酮10ml，振摇，滤过，滤液蒸去丙酮，加氢氢化钠试液5ml，放冷，加盐酸使成酸性，加4％亚硝酸钠溶液0.25ml，摇匀，加10％氨基磺酸铵溶液0.2ml，摇匀，加新制的0.5％变色酸溶液1ml与醋酸钠试液5ml，即显红色。
2、含量测定 照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。
(1)色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷基合硅胶为填充剂；乙腈-水(28∶72)为流动相；检测波长为326nm，理论板数按蒙花苷计算，应不低于1000。
(2)对照品溶液的制备精密称取蒙花苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加适量甲醇溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。(每1ml中含蒙花苷0.1mg)(3)供试品溶液制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放置，擦干，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5-10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含野菊花膏粉以蒙花苷(C28H32O14)计，不得少于0.45mg。
本发明高效液相色谱法测定蒙花苷含量的方法也可用于制剂药材野菊花的质量控制。
采用本发明质量控制方法能使珍菊降压片的活性成份得到有效控制，且本发明方法稳定可靠，专一性强，大大提升了珍菊降压片的整体质量，保证了疗效。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述
图1、珍菊降压片中芦丁的薄层鉴别色谱2、蒙花苷对照品溶液色谱图
图3、珍菊降压片供试品溶液色谱4、野菊花膏粉空白溶液色谱图
具体实施例方式实施例1、珍菊降压片质量标准处方野菊花膏粉100g 珍珠层粉100g氢氯噻嗪5g 盐酸可乐定30mg 芦丁20g制法以上五味，取野菊花膏粉、珍珠层粉、氢氯噻嗪、芦丁混匀，另加70％乙醇适量溶解盐酸可乐定，将乙醇液均匀拌入上述混合粉中，反复搅拌后，制成颗粒，干燥，加入润滑剂适量，压制成1000片，包衣，即得。
性状本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后显黄褐色；味苦。
鉴别(1)取本品2片，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，超声处理20分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；另取芦丁对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国2000年版药典一部附录VIB)试验，分别吸取上述二种溶液2-4ul，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，吹干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的颜色斑点。
(2)取本品5片，除去薄膜衣，研细，加适量50％乙醇溶解，滤过，取不溶物，加稀盐酸即产生泡沸，通入氢氧化钙试液中，产生白色沉淀。另将酸性溶液加氨试液中和至中性，加草酸铵试液即产生白色沉淀，分离，所得沉淀不溶于醋酸，但溶于盐酸。
(3)取本品5片，研细，加丙酮10ml，振摇，滤过，滤液蒸去丙酮，加氢氢化钠试液5ml，放冷，加盐酸使成酸性，加4％亚硝酸钠溶液0.25ml，摇匀，加10％氨基磺酸铵溶液0.2ml，摇匀，加新制的0.5％变色酸溶液1ml与醋酸钠试液5ml，即显红色。
检查应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录ID)。
含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷基合硅胶为填充剂；乙腈-水(28∶72)为流动相；检测波长为326nm，理论板数按蒙花苷计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备 精密称取蒙花苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加适量甲醇溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。(每1ml中含蒙花苷0.1mg)供试品溶液制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放置，擦干，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5-10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含野菊花膏粉以蒙花苷(C28H32O14)计，不得少于0.45mg。
功能与主治降压。用于高血压症。
用法与用量口服，一次1片，一日3次或遵医嘱。
贮藏密封。
注珍珠层粉 为蚌科动物三角帆蚌Hyriopsis cumingii(Lea)、褶纹冠蚌Cristaria plicata(leach)贝壳的珍珠层部分，洗净后，除去角质层及棱柱层部分，粉碎，过七号筛，即得。
野菊花膏粉 取野菊花，加水煎煮二次，每次一小时，合并煎液，浓缩药液至1g药汁相当于1g生药，加入一倍量90％乙醇，搅匀，静置沉淀，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.30(65～75℃)的清膏，加入清膏重量50％的淀粉，拌匀，干燥，粉碎，即得。
实施例2、蒙花苷含量测定方法的建立1.仪器与试剂
shimadzu 10VP液相色谱工作站对照品 蒙花苷甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
样品批号珍菊降压片(1)030715 (2)030716 (3)0307172.方法与结果(1)流动相的选择曾经对不同的流动相系统进行选择，包括甲醇-水，乙腈-水不同比例试验，结果以乙腈-水(28∶72)流动相可使蒙花苷成分与其他成分得到较好的分离，同时作阴性对照，在蒙花苷峰位上无其他吸收峰干扰。见附图2、3和4。
(2)线性关系精密称取蒙花苷适量，用甲醇溶解，制成每1ml含蒙花苷0.112mg。分别注入1、3、5、7、9、11、13ul，按高效液相色谱法测定，结果在0.112～1.456μg范围内与峰面积具有良好的线性关系，W(μg)＝6.45093×10-7×A+0.010934911，R＝0.9999(3)精密度试验取同一对照品多次测试(n＝5)结果见表1。
表1.精密度试验数据
(4)重复性试验取同一批样品，按含量测定方法进行多次测定(n＝5)，结果见表2.
表2.重复性试验数据
(5)回收率试验本试验采用加样回收法，精密称取已知含量的样品7份，分别精密加入一定量蒙花苷对照品，按含量测定法进行测定，结果见表3.
表3.回收率试验数据
(6)样品的含量测定和限度的制订6.1 样品前处理方法考察珍菊降压片是一种中西药组合的复方制剂，为确保充分提尽药物中的蒙花苷成分，对前处理的不同提取方法和提取时间进行了考察。根据相关文献报道，蒙花苷易溶于甲醇，本试验以甲醇为溶剂，比较了超声提取与索氏提取两种不同的提取方法，结果见表4。
表4.提取方法的比较数据
表4.的测定结果表明，用超声提取法，30分钟与50分钟测得含量几乎相同，可以确认30分钟已达坪值；而索氏提取法需提取180分钟才能达到最高含量，考虑操作上的方便和省时，选择了超声30分钟作为样品的前处理方法并纳入正文。
6.2 样品含量测定根据确定的方法，测定了7个批号的样品，结果见表5。
表5.6 批样品的测定数据
6.3含量限度的制订依据上述7批样品测定，其平均值为0.61mg/片。考虑到测定批数不多，故暂拟以其平均含量的75％计，制订含量限度，即“本品每片含野菊花膏粉以蒙花苷(C28H32O14)计，不得少于0.45mg/片”。
实施例3、芦丁的鉴别展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)薄层板硅胶G(以羧甲基纤维素钠为粘合剂)点样量供试品溶液2μl，对照品溶液2μl点样编号1.芦丁对照品溶液 2.供试品030715 3.供试品0307164.供试品030717 5.芦丁阴性对照溶液检视方法晾干，紫外灯(365nm)下观察结论供试品色谱2～4中，在与芦丁对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点，且空白样品无干扰。见图1。
实施例4、野菊花药材质量控制方法野菊花(FLOS CHRYSANTHEMI INDICI)为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。秋、冬二季花初开放时采摘，晒干，或蒸后晒干。
性状本品呈类球形，直径0.3～1cm，棕黄色。总苞由4～5层苞片组成，外层苞片卵形或条形，外表面中部灰绿色或淡棕色，通常被有白毛，边缘膜质；内层苞片长椭圆形，膜质，外表面无毛。总苞基部有的残留总花梗。舌状花1轮，黄色，皱缩卷曲；管状花多数，深黄色。体轻。气芳香，味苦。
鉴别取本品粉末3g，加乙醇40ml，加热回流1小时，滤过，滤液照下述方法试验。
(1)取滤液1滴，点于滤纸上，喷洒三氯化铝试液，晾干，置紫外灯(365nm)下观察，显黄绿色荧光。
(2)取滤液2ml，加镁粉少量与盐酸4～5滴，加热，显棕红色。
含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷基合硅胶为填充剂；乙腈-水(28∶72)为流动相；检测波长为326nm，理论板数按蒙花苷计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备精密称取蒙花苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加适量甲醇溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。(每1ml中含蒙花苷0.1mg)供试品溶液制备取本品粉末0.3g，精密称定，研细，密称定，置置索氏提取器中，加石油醚(60-90℃)50ml，加热回流2小时，弃去石油醚，药渣挥干，再加甲醇80ml继续回流4小时，提取液浓缩至适量，转移至50量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5-10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品以蒙花苷(C28H32O14)计，不得少于0.85％。
权利要求
1.一种珍菊降压片的质量控制方法，该方法采用珍珠层粉专属性反应鉴别制剂中珍珠层粉成份，采用氢氯噻嗪专属性反应鉴别制剂中氢氯噻嗪成份，其特征在于该方法还采用薄层层析法鉴别制剂中芦丁成份，采用高效液相色谱法定量测定野菊花膏粉中蒙花苷的含量。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于其中所述的薄层层析法鉴别制剂中芦丁成份的步骤包括取珍菊降压片2片，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，超声处理20分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；另取芦丁对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的对照品溶液；照薄层色谱法中国2000年版药典一部附录VIB试验，分别吸取上述二种溶液2-4ul，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，吹干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的颜色斑点。
3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于其中所述的采用高效液相色谱法定量测定野菊花膏粉中蒙花苷含量的步骤包括(1)色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷基合硅胶为填充剂；乙腈-水＝28∶72为流动相；检测波长为326nm，理论板数按蒙花苷计算，应不低于1000；(2)对照品溶液的制备精密称取蒙花苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加适量甲醇溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，即得每1ml中含蒙花苷0.1mg；(3)供试品溶液制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放置，擦干，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5-10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；每片含野菊花膏粉以蒙花苷(C28H32O14)计，不得少于0.45mg。
全文摘要
本发明涉及珍菊降压片的质量控制方法。该方法采用定性和定量相结合的检测方法，即采用薄层层析法鉴别芦丁成分，采用高效液相色谱法定量测定野菊花膏粉中蒙花苷的含量。本发明质量控制方法能使珍菊降压片的活性成分得到有效控制，且方法稳定可靠，专一性强，大大提升了珍菊降压片的整体质量，保证了疗效。
文档编号G01N30/00GK1654951SQ20041001622
公开日2005年8月17日 申请日期2004年2月11日 优先权日2004年2月11日
发明者张国明, 华菊根, 邓海林 申请人:上海市中药研究所