专利名称：一种用于检测人abo血型的反定型用红细胞试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物化学领域，尤其涉及鉴定血型的试剂，特别是一种用
于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒。
背景技术：
由于ABO血型系统是临床输血、器官移植中最重要的血型系统，因此 对献血者和受血者ABO血型的预先确认也是输血工作中最为重要的实验， 错误的ABO血型定型导致的输血反应将给受血者带来十分严重的后果，因 此ABO血型的鉴定必须以正、反定型试验结果相互参照来确定。所述的正 定型检测是用已知的抗A和抗B血型定型试剂来测定红细胞上有无相应的A 抗原或/B抗原。反定型检测是用己知的ABO血型来测定血清中有无相应的 抗A抗体/或B抗体。
ABO试剂红细胞是体外诊断试剂，用于ABO血型鉴定的反定型检测，是 血型定型的常规试剂，在临床上有着极为广泛的使用，过去由于存在体外 长期保存时间短、运输不方便等许多问题，使得试剂的难以商品化生产和 销售。基本是由各使用单位自行配制，基本上是现用现配。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂 盒，所述的用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试试剂盒要解决现有技 术中试剂盒体外保存时间短、运输不方便的技术问题。
本发明的一种用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒，由盒体
和试剂组成，试剂设置在盒体中，试剂由A型试剂、B型试剂和O型试剂 组成，所述的A型试剂由红细胞保存液和A型压积红细胞组成、所述的B 型试剂由红细胞保存液和B型压积红细胞组成，所述的O型试剂由红细胞 保存液和O型压积红细胞组成，所述的红细胞保存液由葡萄糖、枸橼酸三钠、枸橼酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、核苷酸和抗生素组成，其
中，所述的葡萄糖占所述的红细胞保存液的质量百分比为1.7—2.1%，所述 的枸橼酸三钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为2.0—2.2%，所述的枸 橼酸占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.030—0.040%，所述的磷酸二 氢钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.20—0.30%,所述的乙二胺四 乙酸二钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.08—0.12%，所述的核苷 酸占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.040—0.045%，所述的抗生素占 所述的红细胞保存液的质量百分比为0.001—0.002%，余量为蒸馏水；所述 的抗生素可以采用氯霉素、西力欣等医用的其它抗生素。
所述的A型压积红细胞通过如下方法制备,首先将至少三人份的A型血 液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞至少两次， 再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞至少一次，在3 — 5'C洗涤离心，3000 一4000转/分10—20分钟，最后一次离心后，3000—4000转/分15—25分
钟，弃血清，沉淀即为A压积红细胞；
所述的B型压积红细胞的制备方法同所述的A型压积红细胞的制备方
法；
所述的O型压积红细胞的制备方法同所述的A型压积红细胞的制备方
法；
在所述的A型试剂中，所述的A型压积红细胞占所述的A型试剂的浓 度为2 —5%，余量为所述的红细胞保存液；
在所述的B型试剂中，所述的B型压积红细胞占所述的A型试剂的浓 度为2 — 5%，余量为所述的红细胞保存液；
在所述的O型试剂中，所述的O型压积红细胞占所述的A型试剂的浓 度为2 —5%，余量为所述的红细胞保存液。
进一步的，所述的一种用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒， 所述的葡萄糖占所述的红细胞保存液的质量百分比为1.9%，所述的枸橼酸
三钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为2.1 % ，所述的枸橼酸占所述的 红细胞保存液的质量百分比为0.035%,所述的磷酸二氢钠占所述的红细胞 保存液的质量百分比为0.25%，所述的乙二胺四乙酸二钠占所述的红细胞 保存液的质量百分比为0.1%，所述的核苷酸占所述的红细胞保存液的质量 百分比为0.043%,所述的抗生素占所述的红细胞保存液的质量百分比为 0.0015%，余量为蒸t留水。
进一步的，所述的A型压积红细胞通过如下方法制备,首先将至少三 人份的A型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红 细胞三次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4。C洗涤离心， 3500转/分15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀 即为压积红细胞。
进一步的，所述的B型压积红细胞通过如下方法制备,首先将至少三人 份的B型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细 胞三次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4t:洗涤离心，3500 转/分15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为 压积红细胞。
进一步的，所述的0型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三 人份的0型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红 细胞三次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4。C洗涤离心， 3500转/分15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉 淀即为压积红细胞。
本发明的工作原理是AB O血型系统是以人体红细胞上的抗原与血 清中抗体而定型的。凡红细胞上含有A抗原，而血清中含有抗B抗体的称 为A型；红细胞上含有B抗原，而血清中含有抗A抗体的称为B型；红细 胞上含有A和B抗原，而血清中无抗A、抗B抗体的称为AB型；红细胞 上不含有A、 B抗原，而血清中含有抗A和抗B抗体称为O型。反定型检
测是用已知的ABO血型来测定血清中有无相应的抗A抗体/或B抗体。具体^ 可见下表
正定型 抗A 抗B
受检者血型
A B 0
反定型
A细胞 B细胞 O细胞
A B
本发明与已有技术相对照，其效果是积极和明显的。本发明因为将葡 萄糖、枸橼酸三钠、枸橼酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、核苷酸和 抗生素按一定的配比制成红细胞保存液，由该红细胞保存液保存的压积红 细胞，可以更好的保存压积红细胞，使得压积红细胞能够较长时间的保持 稳定，增加长距离运输的可行性，使得本发明可以进行商品化的生产和销 售。
具体实施例方式
实施例1
本发明的一种用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒，由盒体 和试剂组成，试剂设置在盒体中，试剂由A型试剂、B型试剂和O型试剂
组成，所述的A型试剂由红细胞保存液和A型压积红细胞组成、所述的B 型试剂由红细胞保存液和B型压积红细胞组成，所述的O型试剂由红细胞 保存液和O型压积红细胞组成，所述的红细胞保存液由葡萄糖、枸橼酸三 钠、枸櫞酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、核苷酸和抗生素组成，其 中，所述的葡萄糖占所述的红细胞保存液的质量百分比为1.9%，所述的枸 橼酸三钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为2.1%,所述的枸橼酸占所 述的红细胞保存液的质量百分比为0.035%，所述的磷酸二氢钠占所述的红
细胞保存液的质量百分比为0.25%，所述的乙二胺四乙酸二钠占所述的红 细胞保存液的质量百分比为0.1%，所述的核苷酸占所述的红细胞保存液的 质量百分比为0.043%，所述的抗生素占所述的红细胞保存液的质量百分比 为0.0015%，余量为蒸馏水；所述的抗生素可以采用氯霉素、西力欣等医 用的其它抗生素。
所述的A型压积红细胞通过如下方法制备,首先将至少三人份的A型 血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞三次， 再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4'C洗涤离心，3500转/分 15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为压积红 细胞；
所述的B型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三人份的B型 血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞三次， 再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4t:洗涤离心，3500转/分 15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为压积红 细胞；
所述的0型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三人份的0型血 液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞三次，再 分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4t:洗涤离心，3500转/分15 分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为压积红细 胞；
在所述的A型试剂中，所述的A型压积红细胞占所述的A型试剂的浓 度为2—5%，余量为所述的红细胞保存液；
在所述的B型试剂中，所述的B型压积红细胞占所述的A型试剂的浓 度为2_5%，余量为所述的红细胞保存液；
在所述的O型试剂中，所述的O型压积红细胞占所述的A型试剂的浓 度为2—5%,余量为所述的红细胞保存液。
实施例2
采用试管法检测血型
1. 取被检者血清(或血浆)各一滴分别加于标记好的小试管中；
2. 分别各加1滴A型、B型、O型试剂；
3. 摇动试管，离心，速度和时间可选择以下任意一种
转速1000RPM,时间1分钟； 转速3400RPM，时间15秒；
4. 先观察是否溶血(溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染)，然 后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来；
5. 观察凝集状况，并立即记录结果。参照表1可知血型。
实施例3
微量板法检测血型
1. 在U型板三个孔内分别加入25 — 35ul的被检者血清(血清)；
2. 每孔内分别加入与血清等量的A、 B、 0型试剂；
3. 混匀；
4. 离心，转速2000RPM，时间30秒；
5. 检测溶血情况(溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染)；
6. 用振荡仪振动微量板，振动能使阳性反应出现凝集的细胞扣，若 是阴性反应，细胞扣很快消除；
7. 记录结果，参照表l可知血型。
权利要求
1.一种用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒，由盒体和试剂组成，试剂设置在盒体中，试剂由A型试剂、B型试剂和O型试剂组成，所述的A型试剂由红细胞保存液和A型压积红细胞组成、所述的B型试剂由红细胞保存液和B型压积红细胞组成，所述的O型试剂由红细胞保存液和O型压积红细胞组成，其特征在于所述的红细胞保存液由葡萄糖、枸橼酸三钠、枸橼酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、核苷酸和抗生素组成，其中，所述的葡萄糖占所述的红细胞保存液的质量百分比为1.7-2.1％，所述的枸橼酸三钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为2.0-2.2％，所述的枸橼酸占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.030-0.040％，所述的磷酸二氢钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.20-0.30％，所述的乙二胺四乙酸二钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.08-0.12％，所述的核苷酸占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.040-0.045％，所述的抗生素占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.001-0.002％，余量为蒸馏水，所述的A型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三人份的A型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞至少两次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞至少一次，在3-5℃洗涤离心，3000-4000转/分10-20分钟，最后一次离心后，3000-4000转/分15-25分钟，弃血清，沉淀即为A压积红细胞，所述的B型压积红细胞的制备方法同所述的A型压积红细胞的制备方法，所述的O型压积红细胞的制备方法同所述的A型压积红细胞的制备方法，在所述的A型试剂中，所述的A型压积红细胞占所述的A型试剂的浓度为2-5％，余量为所述的红细胞保存液，在所述的B型试剂中，所述的B型压积红细胞占所述的A型试剂的浓度为2-5％，余量为所述的红细胞保存液，在所述的O型试剂中，所述的O型压积红细胞占所述的A型试剂的浓度为2-5％，余量为所述的红细胞保存液。
2. 如权利要求1所述的用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒，其特 征在于所述的葡萄糖占所述的红细胞保存液的质量百分比为1.9%，所述 的枸橼酸三钠占所述的红细胞保存液的质量百分比为2.1%，所述的枸橼酸 占所述的红细胞保存液的质量百分比为0.035%，所述的磷酸二氢钠占所述 的红细胞保存液的质量百分比为0.25%，所述的乙二胺四乙酸二钠占所述 的红细胞保存液的质量百分比为0.1%，所述的核苷酸占所述的红细胞保存 液的质量百分比为0.043%，所述的抗生素占所述的红细胞保存液的质量百 分比为0.0015%，余量为蒸馏水。
3. 如权利要求1所述的用于检测人AB0血型的反定型用红细胞试剂盒，其 特征在于所述的A型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三人份的 A型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞三 次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4t:洗涤离心，3500 转/分15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为 压积红细胞。
4. 如权利要求1所述的用于检测人AB0血型的反定型用红细胞试剂盒，其 特征在于所述的B型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三人份的 B型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞三 次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4。C洗涤离心，3500 转/分15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为 压积红细胞。
5. 如权利要求1所述的用于检测人AB0血型的反定型用红细胞试剂盒，其 特征在于所述的O型压积红细胞通过如下方法制备，首先将至少三人份的 O型血液去血浆，然后混合，然后用适量的生理氯化钠溶液洗涤红细胞三 次，再分别用适量红细胞保存液洗涤红细胞一次，在4。C洗涤离心，3500 转/分15分钟，最后一次离心后，3500转/分20分钟，弃血清，沉淀即为压积红细胞。
全文摘要
本发明的一种用于检测人ABO血型的反定型用红细胞试剂盒，试剂盒由A型试剂、B型试剂和O型试剂组成，A型试剂由红细胞保存液和A型压积红细胞组成、B型试剂由红细胞保存液和B型压积红细胞组成，O型试剂由红细胞保存液和O型压积红细胞组成，红细胞保存液由葡萄糖、枸橼酸三钠、枸橼酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、核苷酸和抗生素组成；本发明因为将葡萄糖、枸橼酸三钠、枸橼酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、核苷酸和抗生素按一定的配比制成红细胞保存液，由该红细胞保存液保存的压积红细胞，可以更好的保存压积红细胞，使得压积红细胞能够较长时间的保持稳定，增加长距离运输的可行性，使得本发明可以进行商品化的生产和销售。
文档编号G01N33/80GK101178410SQ20061011802
公开日2008年5月14日 申请日期2006年11月7日 优先权日2006年11月7日
发明者丁苏鄂, 刘剑荣, 包于勤, 沈轶明, 晔 王, 詹申宏, 顾桂玲 申请人:上海血液生物医药有限责任公司