专利名称：Abo血型反定型试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于新生物制品领域，是用于ABO血型鉴定的反定型试剂盒。
背景技术：
血型是人类血液的主要特征之一，表达了血液各种成份抗原的遗传性状，其中ABO血型系统因其存在的规律性，广泛性、特殊性成为输血和器官移植中最重要的血型系统。Hoktoen早在1907年就首先提出了血型检定对输血治疗的重要性，Ottenberg等在1908年进一步提出了供受体血液交叉配合试验的概念，更强调血型检定对临床输血的深远意义。ABO血型不相容输血，几乎毫无例外要发生溶血性输血反应症状；弥漫性血管内凝血、肾衰以至死亡。因此，ABO血型的准确定型至关重要。
ABO血型系统的分型原则是红细胞上有A抗原，血清中有抗B抗体为A型；红细胞上有B抗原，血清中有抗A抗体为B型；红细胞上有A、B两种抗原，血清中不含抗A、抗B抗体为AB型；红细胞上没有A和B抗原，血清中含抗A和抗B抗体的为O型。
由于ABO血型是由红细胞表面抗原和血清中的抗体两者共同决定的，两者都检测，即正反定型，才能正确判定ABO血型。用抗-A和抗-B试剂检测红细胞抗原，称之正定型；用A型和B型红细胞检测血清中的抗体，称之反定型。仅进行ABO正定型的试验结果不可靠，需要采用ABO反定型试验来验证。
在ABO血型检定中，往往会出现一些非人为操作引起的定型错误，其影响因素主要来自待检标本及正定型试剂两个方面。受标本和试剂两方面因素的影响，即使应用高质量的正定型试剂也不可能完全避免ABO血型定型错误，只有进一步改进定型技术才能解这一难题，正确的血型检定方法和合格的血型试剂是同等重要的。英国药典中特别强调“检测ABO血型要检测红细胞抗原和血清或血浆中抗体两方面”。2000年卫生部颁发的《临床输血技术规范》(卫医发 184号)第四章第十五条明确规定“输血科(血库)要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型(正反定型)，并常规检查患者的Rh(O)血型，正确无误时可进行交叉配血。”目前在国内的医院和采血站使用的反定型试剂都是自己配制，保存期很短，一般在三天左右，这种现状给临床使用单位带来了诸多不便，导致一些临床使用单位只做正定型，不做反定型，导致血型鉴定的差错，甚至出现严重的输血事故。
发明内容
本发明的目的是提供一种方便、有效期长、灵敏度高、准确性好的ABO型反定型试剂盒，能够在临床上准确地诊断ABO血型。
为了达到上述目的，保证ABO反定型试验结果准确可靠，本发明由A型、B型和O型红细胞和红细胞保养液组成，A型、B型和O型红细胞的浓度为4％，红细胞保养液是使用蒸馏水按照以下配方配制而成柠檬酸三钠·2H2O 19-22毫摩尔浓度磷酸二氢钾 1.45-1.48毫摩尔浓度磷酸氢二钠 1.10-1.20毫摩尔浓度氯化钠 65-67毫摩尔浓度葡萄糖 47-49毫摩尔浓度蔗糖15-18毫摩尔浓度腺嘌呤 1.4毫摩尔浓度肌苷4.2-4.4毫摩尔浓度分子量≤40000的葡聚糖 0.018-0.020％(w/v)硫酸新霉素 0.01％(w/v)氯霉素 0.03-0.04％(w/v)防腐剂Proclin 300 5ml/L用0.01摩尔浓度氢氧化钠调整溶液PH为6.8-7.1，除菌过滤。
本发明的红细胞是经过准确鉴定了ABO血型的红细胞加入了上述保养液中调配而成，红细胞的浓度为4％，在2-8℃的条件下有效期不低于3个月。
本发明的配置方法包括按比例配制红细胞保养液和加入红细胞调配，在制备过程中，需要对红细胞进行筛选和处理，首先要选择非血缘正常人的全血，各项检查全部合格，即HBsAg阴性、HCV Ab阴性、HIVAb阴性、梅毒阴性，转氨酶在正常范围内，红细胞无溶血现象，再用抗-A和抗-B抗体准确鉴定出血型，经过过滤和洗涤，去除其中已发生了凝集的红细胞和蛋白成分，特别是经过白细胞过滤器过滤，去除其中的白细胞，最后用保养液调节红细胞的浓度，制成标准浓度的反定型试剂。
本发明的优点是使用方便、有效期长、灵敏度高、准确性好的ABO血型反定型试剂盒，能够在临床上准确地诊断ABO血型。
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施和所具有的有益效果，不能对本发明的实施范围构成任何限定。
实施例1、保存液的配制，使用蒸馏水按照以下配方配制而成柠檬酸三钠·2H2O 22毫摩尔浓度磷酸二氢钾1.48毫摩尔浓度磷酸氢二钠1.10毫摩尔浓度氯化钠67毫摩尔浓度葡萄糖50毫摩尔浓度蔗糖 18毫摩尔浓度腺嘌呤1.4毫摩尔浓度肌苷 4.4毫摩尔浓度分子量≤40000的葡聚糖 0.30％(w/v)硫酸新霉素0.01％(w/v)氯霉素0.04％(w/v)防腐剂5ml/L用0.01摩尔浓度氢氧化钠调整溶液PH为6.8-7.1，除菌过滤。
2、红细胞的选择使用三天内采集的非血缘正常人的全血，检测各项指标，要求HBsAg阴性、HCV Ab阴性、HIVAb阴性、梅毒阴性，转氨酶在正常范围内，红细胞无溶血现象。用抗-A和抗-B抗体准确鉴定待用红细胞的血型，经过过滤和洗涤，去除其中已发生了凝集的红细胞和蛋白成分，用白细胞过滤器过滤除去白细胞。
3、反定型试剂盒的调配将上述红细胞加入保养液，利用分光光度计准确调节细胞浓度达到4％。
权利要求
1.一种ABO血型反定型试剂盒，由A型、B型和O型红细胞和红细胞保养液组成，其特征在于A型、B型和O型红细胞的浓度为4％，所述的红细胞保养液是使用蒸馏水按照以下配方配制而成柠檬酸三钠·2H2O 19-22毫摩尔浓度磷酸二氢钾 1.45-1.48毫摩尔浓度磷酸氢二钠 1.10-1.20毫摩尔浓度氯化钠 65-67毫摩尔浓度葡萄糖 47-49毫摩尔浓度蔗糖 15-18毫摩尔浓度腺嘌呤 1.4毫摩尔浓度肌苷 4.2-4.4毫摩尔浓度分子量≤40000的葡聚糖 0.018-0.020％(w/v)硫酸新霉素 0.01％(w/v)氯霉素 0.03-0.04％(w/v)防腐剂Proclin 300 5ml/L用0.01摩尔浓度氢氧化钠调整溶液PH为6.8-7.1，除菌过滤。
2.根据权利要求1所述的ABO血型反定型试剂盒的红细胞保养液，其特征在于该试剂盒的有效期不低于3个月。
3.根据权利要求1所述的ABO血型反定型试剂盒的红细胞保养液，其特征在于A型、B型和O型红细胞事先经过了过滤和洗涤，去除其中已发生了凝集的红细胞和蛋白成分。
4.根据权利要求4所述的ABO血型反定型试剂盒的红细胞保养液，其特征在于特别是经过白细胞过滤器过滤，去除其中的白细胞。
5.根据权利要求1所述的ABO血型反定型试剂盒，其特征在于ABO血型反定型试剂可储存于密封瓶中，密封瓶的材质可以是塑料、玻璃等透明材料。
全文摘要
本发明提供了一种ABO血型反定型试剂盒，由A型、B型和O型红细胞和红细胞保养液组成，其特征在于A型、B型和O型红细胞的浓度为4％，所述的红细胞保养液是使用蒸馏水按照特定配方配制而成，A型、B型和O型红细胞的浓度为4％，A型、B型和O型红细胞事先经过了过滤和洗涤，去除其中已发生了凝集的红细胞和蛋白成分，可储存于密封瓶中，密封瓶的材质可以是塑料、玻璃等透明材料，本发明的有效期不低于3个月，本发明的优点是使用方便、有效期长、灵敏度高、准确性好的ABO血型反定型试剂盒，能够在临床上准确地诊断ABO血型。
文档编号A61J1/06GK1831535SQ20061007592
公开日2006年9月13日 申请日期2006年4月24日 优先权日2006年4月24日
发明者刘淑红, 范明, 周明非, 李娅 申请人:中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所, 周明非