专利名称：一种氯霉素滴眼液的检测方法
技术领域：
本发明属于一种氯霉素滴眼液的检测方法，特别属于含有葛根黄酮的氯霉 素滴眼液的检测方法。
背景技术：
氯霉素滴眼液是一种眼部常用的药品，曾经作为0TC甲类药品在市场上流 通使用，其主要成份为氯霉素、缓冲液、抑菌剂、水，也有在氯霉素滴眼液中 加入玻璃酸钠、甘油以增强粘度，改善在眼部的保留时间。《中国药典》2005年 版二部中第778页公开了氯霉素滴眼液的检测方法，检测项目包括性状项、鉴 别项、检查项、含量测定项、类别项、规格项、贮藏项，在检査项中包括PH值 项、有关物质项、其它项的检测，在鉴别项中所提供的两种鉴别方法均为主药 氯霉素的鉴别方法，方法l为颜色反应，方法2为高效液相色谱法。
药品通常的有效期或保质期为2年，而氯霉素滴眼液的保质期只能达到8 一12个月，这是由于氯霉素滴眼液中氯霉素容易分解成氯霉素二醇物、对硝基 苯甲醛，氯霉素二醇物及对硝基苯甲醛对眼睛有较强的刺激性，影响患者的使 用。通过研究发现，通过对氯霉素滴眼液中物质成份进行调整，可以使氯霉素 滴眼液的保质期提高至2年以上，这些物质成份直接影响氯霉素滴眼液的保质 期，对氯霉素滴眼液的质量起着重要作用，有些物质成份还有一定的辅助治疗 作用，但目前中国药典所记载的氯霉素滴眼液的检测方法中对这些物质没有进 行鉴别或者含量测定，存在着一定的缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种完整的氯霉素滴眼液检测方法。本发明解决技术问题的技术方案为氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国 药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了葛根黄酮的鉴别方法。 所述的葛根黄酮的鉴别方法为
取氯霉素滴眼液1一5毫升，用60—80%甲醇水溶液(v/v)稀释10 —20倍， 照紫外一可见分光光度法(药典附录IV A)在250nm的波长处有最大吸收。
由于葛根黄酮含多种黄酮类成份，主要活性成份为葛根素(Puerarin)、葛 根素-7-木糖武(P匿arin-7-xyloside)、大豆素(Daidzein)、大豆武(Daidzin)。
葛根黄酮的用量一般为氯霉素滴眼液总重量的0. 3_0. 5%，为了更加准确的 对氯霉素滴眼液中葛根黄酮的用量进行控制，还可在含量测定项中增加葛根黄 酮的含量测定方法。
所述的葛根黄酮的含量测定方法为高效液相色谱条件进行测定
取氯霉素滴眼液1 —5毫升，过滤，取滤清液10ul，注入高效液相色仪， 记录色谱图，色谱条件为以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动 相为体积比为20: 80的甲醇水溶液，柱温25。C，检测波长250nm;
另取葛根素的标准品适量，同法测量，以外标法计算葛根黄酮中葛根素的 含量，以此来确定葛根黄酮的含量。
当采用了高效液相色谱法测定草根黄酮的含量后，还可在氯霉素滴眼液检 测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体为在含量测定项下的葛 根黄酮的测定中，氯霉素滴眼液的主峰保留时间应与葛根素的保留时间一致。
为了避免葛根黄酮鉴别过程中主药氯霉素的干扰，可以在鉴别反应中增加 预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液，加入混合菌种，在30 — 35。C保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素滴眼液与混合菌种体积 比为100: 0. 5—5。混合菌种可以选择性针对氯霉素滴眼液中氯霉素产生黄色沉淀，而不影响 氯霉素滴眼液中其它的物质成份。
所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌 (Escherichia coli)CGMCCl. 1425、其扩大培养液混合的体积比为6-10:1-10: 10-12。
申请人认为葛根黄酮作为天然的抗氧化剂，具有很强的清除溶液中自由基 的作用，通过对氯霉素滴眼液中自由基的消除，能够达到提高氯霉素滴眼液有 效期的目的，同时还有一定的保健治疗作用，因此在中国药典的鉴别项中增加 葛根黄酮的鉴别方法，能够更加有效的提高中国药典中氯霉素滴眼液检测的完 整性。
由于在氯霉素滴眼液中增加了葛根黄酮能够提高氯霉素滴眼液的稳定性， 故可以将中国药典中有着氯霉素的标示量规定为85 — 115%，而不是现行规定的 标示量大于85%即为合格产品，从而避免部分生产厂家采用多加主药氯霉素的形 式使氯霉素滴眼液在8 — 12个月的有效期内标示量达标。
由于药品的有效期目前采取备案制度，不同厂家的相同产品的有效期经常
不一致，从而使消费者产生困惑，为此，在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项 中增加有效期项，并将有效期定为2年。
本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的葛根黄酮检 测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴眼 液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做详细的说明。 所述的氯霉素滴眼液的样品通过以下方法进行制备。
取氯霉素2.5克，硼酸1.5克，硼砂0.5克，氯化钠6.5克，纯度9(F。的葛根黄酮0. 3克，用水加到1000毫升即可。 葛根素为市购的SIGMA标准品。 实施例1:
取氯霉素滴眼液样品lml，用60%甲醇水溶液(v/v)稀释10倍，照紫外一 可见分光光度法(药典附录IV A)在250mn的波长处有最大吸收。 实施例2:
取氯霉素滴眼液1毫升，过滤，取滤清液10 ii 1注入高效液相色仪，记录
色谱图，色谱条件为以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为
体积比为20: 80的甲醇水溶液，柱温25。C，检测波长250nm;
另取葛根素的标准品适量，同法测量，以外标法计算葛根黄酮中葛根素的 含量，以此来确定葛根黄酮的含量。
实施例3:
a) 混合菌种的制备
取多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏 菌(Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1425、其扩大培养液混合的体积比为6: 1: 10。(每毫升液体中含有2 X107个活性菌体以上)。
b) 将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的1%(V/V)加入，在30—35。C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液2ml，用80%甲醇水溶液(v/v)稀释10倍，照紫外一可见分光光 度法(药典附录IV A)在250nm的波长处有最大吸收。
实施例4: a)混合菌种的制备为
取多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens ) CGMCC 1.203 、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1425、其扩大培养液混合的体积比为1: 1: 1.2。(每毫升液体中含有2X107 个活性菌体以上)，
b)将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的W。(V/V)加入，在30—35。C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液作为氯霉素滴眼液样品，注入高效液相色仪，记录色谱图，色谱 条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为体积比为20: 80的甲醇水溶液，柱温25。C，检测波长250nm;
另取葛根素的标准品适量，同法测量，以外标法计算葛根黄酮中葛根素的 含量，以此来确定葛根黄酮的含量。
上面结合实施例对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受 上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质 性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均 在本发明的保护范围之内。
权利要求
1、一种氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，其特征在于在鉴别项中增加葛根黄酮的鉴别方法。
2、 根据权利要求1所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于所 述的葛根黄酮的鉴别方法为取氯霉素滴眼液l一5毫升，用60 — 80%甲醇水溶液(v/v)稀释10 — 20倍，照紫外—可见分光光度法(药典附录IV A)在250nm 的波长处有最大吸收。
3、 根据权利要2所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在含 量测定项中，增加葛根黄酮的含量测定方法。
4、 根据权利要3所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于所述 的葛根黄酮的含量测定方法为高效液相色谱法。
5、 根据权利要4所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于所述 的高效液相色谱法为取氯霉素滴眼液l一5毫升，过滤，取滤清液10ul，注入高效液相色仪，记录色谱图，色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为体积比为20: 80的甲醇水溶液，柱温25'C，检测波长250nm;另取葛根素的标准品适量，同法测量，以外标法计算葛根黄酮中葛根素的 含量，以此来确定葛根黄酮的含量。
6、 根据权利要3所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在氯霉素滴眼液检测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体为在含量测定项下的葛根黄酮的测定中，氯霉素滴眼液的主峰保留时间应与葛根素的保 留时间一致。
7、 根据权利要求2所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在 鉴别反应中增加预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液，加入混合菌种，在30—35"C保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素滴眼液 与混合菌种体积比为100: 0.5-5。
8、 根据权利要求7所述的一种氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于所 述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质 沙雷氏菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203 、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1425、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 10-12。
9、 根据权利要求2所述的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于所述的 氯霉素的标示量为85 — 115%。
10、 根据权利要求2所述的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项目中增加有效期项，并将有效期定为2年。
全文摘要
本发明公开了一种氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了葛根黄酮的鉴别方法。本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的葛根黄酮检测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴眼液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
文档编号G01N33/15GK101183097SQ20071019225
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月24日 优先权日2007年12月24日
发明者南 方 申请人:南 方