专利名称：一种提取具柄植物叶片维管束汁液的方法
技术领域：
本发明涉及植物学领域，具体是涉及一种提取具柄植物叶片维管束汁液的方法。
背景技术：
刺吸式口器害虫利用其口针插入到寄主植物筛管的维管束中吸食汁液获取营养 (Gerling, D. and M. Lindenbaum. Host-plant related behavior of Be脂'57'fl to6fl"'. WPRS Bull., 1991， 14:83~88.)(刘光杰，Wilkins RM, Saxena R C.白背飞虱对不同抗虫稻株 糖类物质的利用.昆虫学报，1995， 38 (4) : 421 427)，因此，为了准确分析寄主 营养与刺吸式口器害虫的关系，就必须准确地获得植物维管束汁液。
传统的提取植物维管束汁液的方法主要用"蚜虫吻针法"，即利用一种蚜虫让其刺 入植物叶片中，然后用刀切断其口针，从而使汁液沿着口针流出。这种方法主要存在以 下几个问题①蚜虫存在寄主选择，它不能按人们的要求刺入所有的植物叶片，即它的 使用对象存在局限；②由于口针较细，而且是利用膨压使维管束汁液流出，因此汁液的 量比较少；③蚜虫口针刺入叶片的过程中要分泌唾液，这将不可避免地造成对样品的污 染。
另一方面，由于直接获取寄主植物筛管中的汁液比较困难，在寄主植物与刺吸式口 器害虫关系的研究中，目前主要应用寄主植物全叶片、寄主植物叶片茎部伤流液等为分 析研究对象，也有的以人工词料饲养法进行研究，这些间接取样的分析方法造成了较大 的试验误差。
发明内容
为了克服现有提取植物维管束汁液方法的局限性、易污染及误差大的不足，本发明
提供了一种用压力法直接获取具柄植物叶片维管束汁液的方法，有效地解决了问题。 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种提取具柄植物叶片维管束汁液的
方法，包括以下步骤
(1)样品收集前处理用洁净、锋利的刀片沿叶片外缘0.5 lcm处环切，打开叶 缘维管束；保留3~8cm的叶柄，多余叶柄用刀片切除；在距叶柄端部0.5~lcm处半环切，切出筛管部分。
(2)将处理过的植物叶片放入压力室内，叶柄留在压力室外，然后对压力室内加 压，使叶片筛管内汁液从叶柄切口处流出，收集从筛管切口处流出的汁液。
上述步骤(2)中所说的对压力室内加压，是用钢瓶装高压气体对压力室进行加压， 工作压力1.0 5kpa，优选1.5 3.5kpa 。所说的高压气体优选惰性气体，如氮气、氦气等。
本发明方法适用于的所有的具有叶柄的植物叶片的维管束汁液收集，包括但不限 于棉花。
本发明的核心技术是利用"压力室"产生的压力将具柄植物叶片维管束汁液压出。 本发明方法与"蚜虫吻针法"相比，适用范围宽，获得样品量大，样品无污染；与"植 物全叶片法"相比，试验结果更准确。
具体实施例方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明， 一般具有本领域普通技术人员通常理 解的含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施 例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所 用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用 相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例一棉花叶片维管束汁液收集
选大田棉花叶片若干，在叶柄基部用刀片切断，放在瓷盘中用湿纱布保湿，外包黑 布避光。
用洁净、锋利的刀片沿叶片外缘0.5 lcm处环切，打开叶缘维管束；保留3~8cm 的叶柄，多余叶柄用刀片切除；在距叶柄端部0.5~1011处半环切，切出筛管部分。将处 理过的棉花叶片放入压力室内，叶柄留在压力室外，加压，使叶片筛管内汁液从叶柄切 口处流出，收集从筛管切口处流出的汁液。抽取液放入-37'C的冰箱中保存、待测。压 力室工作气体为钢瓶装氮气，工作压力1.0 5kpa。
棉花叶片维管束汁液中可溶性糖含量分析比较
以国抗22和常规棉亲本泗棉3号为研究对象，分析、比较转基因棉与常规棉亲本之间维管束汁液中可溶性糖含量的差异。 1.1供试棉花
供试棉花品种为国抗22、泗棉3号。 1.2可溶性糖测定
采用蒽酮法。取一定量上述收集的维管束汁液，加入3ml蒽酮试剂，90'C加热15min， 在620nm处测定光密度。取10 50u g葡萄糖采用同样方法测定光密度，作标准曲线。
检测发现，转Bt基因棉花国抗22叶片维管束汁液中可溶性糖含量明显低于常规 棉亲本泗棉3号，其中，苗期和花铃期分别低63.1%和低26.2%。
叶片维管束组织中可溶性糖含量随着棉花生育进程的推进而增加。研究发现，棉花 苗期叶片维管束汁液中可溶性糖含量相对较低，花铃期叶片维管束汁液中含量迅速提 高，如国抗22棉花花铃期的可溶性糖含量是苗期的3.3倍。
实施例二与实施例一基本相同，不同之处在于，用洁净、锋利的刀片沿叶片外缘 0.5 lcm处环切，打开叶缘维管束；保留6cm左右的叶柄，多余叶柄用刀片切除；在距叶 柄端部0.5 lcm处半环切，切出筛管部分。将处理过的棉花叶片放入压力室内，叶柄留在 压力室外，加压，使叶片筛管内汁液从叶柄切口处流出，收集从筛管切口处流出的汁液。 抽取液放入-37'C的冰箱中保存、待测。压力室工作气体为钢瓶装氮气，工作压力 1.5 3.5kpa。
权利要求
1. 一种提取具柄植物叶片维管束汁液的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)样品收集前处理用洁净、锋利的刀片沿叶片外缘0.5～1cm处环切，打开叶缘维管束；保留3～8cm长的叶柄，多余叶柄用刀片切除；在距叶柄端部0.5～1cm处半环切，切出筛管部分。(2)将上述处理过的植物叶片放入压力室内，叶柄留在压力室外，然后对压力室内加压，使叶片筛管内汁液从叶柄切口处流出，收集从筛管切口处流出的汁液。
2、 根据权利要求1所说的提取具柄植物叶片维管束汁液的方法，其特征在于，步 骤(2)中所说的对压力室内加压，是用钢瓶装高压气体对压力室进行加压，压力为 1.0 5kpa。
3、 根据权利要求2所说的提取具柄植物叶片维管束汁液的方法，其特征在于，所 说的高压气体是惰性气体。
全文摘要
本发明涉及植物学领域，具体是涉及一种提取具柄植物叶片维管束汁液的方法。所说的提取具柄植物叶片维管束汁液的方法，是先用洁净、锋利的刀片沿叶片外缘0.5～1cm处环切，打开叶缘维管束；保留3～8cm的叶柄，多余叶柄用刀片切除；在距叶柄端部0.5～1cm处半环切，切出筛管部分；再将处理过的植物叶片放入压力室内，叶柄留在压力室外，然后对压力室内加压，使叶片筛管内汁液从叶柄切口处流出，收集从筛管切口处流出的汁液。本发明方法具有适用范围宽，获得样品量大，样品无污染，试验结果更准确的优点。
文档编号G01N1/28GK101290274SQ200810024869
公开日2008年10月22日 申请日期2008年5月8日 优先权日2008年5月8日
发明者周福才 申请人:扬州大学