专利名称：：南方红豆杉饮片质量标准及其检测方法
技术领域：
：本发明涉及中药，具体涉及中药南方红豆杉饮片质量标准及其检测方法。
背景技术：
：红豆杉作为中药在《本草纲目》等医学古籍中已有记载，传统用药叶入药消炎、止痛、治疗疥癣；种子用于治疗食积、消化不良和蛔虫病；树皮治疗糖尿病。近年来科学研究发现红豆杉植株内含有紫杉醇等高效抗癌活性成分，用于妇科癌症、前列腺、上胃肠道、肺癌等有较好的治疗效果。紫杉醇成分被誉为"晚期肿瘤的最后一道防线"，"十五年来最有效的抗癌制剂之一"，疗效确实，使用安全，已开发了很多药物。中医认为红豆杉有益气养阴、补血生津、解毒抗癌的功效。本发明涉及南方红豆杉是红豆杉的品种之一，在中国分布最为广泛，主产于福建、浙江、江西、湖南、湖北、四川等地。南方红豆杉饮片质量标准在国家标准和地方标准中尚无收载，但是，质量标准及其检测方法是确保中药饮片质量的关键，南方红豆杉饮片作为治疗癌症的有效药物，研究其质量标准及其检测方法是一项重要工作
发明内容本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，结合南方红豆杉的特性，研究设计南方红豆杉质量标准及其检测方法。本发明提供了南方红豆杉饮片的质量标准为本品为红豆杉禾斗植物南方红豆杉7in:wwa/re/fe附ee"/ev/.^S.K/fwexZiw栽培品的带叶枝条；性状本品呈段状。茎呈细圆柱形，直径约14mm，有的切面有细小的髓，表面黄绿色至黄褐色，嫩枝具纵棱；叶多切断；完整者条形，黄绿色至黄褐色，长1.53cm，宽0.250.35cm，上部渐窄，先端急尖或渐尖，叶柄短，叶片全缘，近革质，上面中脉隆起明显。质脆，易折断，气微，味苦、涩；鉴别本品粉末黄绿色至黄褐色，气孔较多。叶肉薄壁细胞类圆形，排列较疏松。木栓细胞方形或多角形，内含棕黄色物。薄壁细胞类方形、多角形。螺纹管胞多见，少数为梯纹管胞，直径2060um;检査水分不得过12.5%。总灰分不得过8.0%。酸不溶性灰分不得过1.0%。浸出物照水溶性浸出物不得少于18.0%。含量测定本品按干燥品计算，含10-脱乙酰巴卡亭III(C29H360u)不得少于0.03%。性味与归经微甘、苦，平；有小毒。归肾、心经。功能与主治消肿散结，通经利尿；用于肿瘤、肾病、类风湿关节炎等症。用法与用量39g。注意可能引起恶心、呕吐、皮疹。IC藏置通风、干燥、避光处。本发明另一目的是提供了南方红豆杉饮片的检测方法，该方法包括下列步骤原料本品为红豆杉科植物南方红豆杉roxwsma/w/(7e附ee"/ev"S.i:i/t/ex丄/w栽培品的带叶枝条；性状本品呈段状。茎呈细圆柱形，直径约14mm，有的切面有细小的髓，表面黄绿色至黄褐色，嫩枝具纵棱；叶多切断；完整者条形，黄绿色至黄褐色，长1.53cm，宽0.250.35cm，上部渐窄，先端急尖或渐尖，叶柄短，叶片全缘，近革质，上面中脉隆起明显。质脆，易折断，气微，味苦、涩；鉴别(1)本品粉末黄绿色至黄褐色，气孔较多。叶肉薄壁细胞类圆形，排列较疏松。木栓细胞方形或多角形，内含棕黄色物。薄壁细胞类方形、多角形。螺纹管胞多见，少数为梯纹管胞，直径2060um;(2)取本品粉末lg，加甲醇50ml，超声处理(温度405(TC)40分钟，滤过，滤液4050。C减压回收至干，残渣加水-三氯甲烷(l:2V/V)的混合液45ml溶解，分取下层三氯甲烷，4050。C减压回收至干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取10-脱乙酰巴卡亭m对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2yl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(8:1.2:0.8V/V)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%香草醛浓硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检査水分照水分测定法(中国药典2005年版一部附录KH第一法)不得过12.5%。总灰分不得过8.0%(中国药典2005年版一部附录KK)。酸不溶性灰分不得过1.0%(中国药典2005年版一部附录仅K)。浸出物照水溶性浸出物测定法项下热浸法(中国药典2005年版一部附录XA)测定，不得少于18.0%。含量测定照高效液相测定法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为232nm。理论板数以IO-脱乙酰巴卡亭III峰计应不低于3500。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0277822273578—2022—80对照品溶液的制备取在4045'C减压干燥12小时以上的10-脱乙酰巴卡亭III对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml放置过夜，超声处理(功率300W，频率50kHz，温度4050。C，40分钟，滤过；再加入甲醇20，超声处理20分钟，合并滤液，减压蒸干，残渣以水-三氯甲垸(1:2V/V)的混合液45ml,分次溶解并转移至分液漏斗中，分取下层三氯甲烷，水层再加三氯甲烷20ml，振摇提取，合并三氯甲垸液，4050'C减压蒸干，残渣以甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10"1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含IO-脱乙酰巴卡亭III(C29H3eOn)不得少于0.03%。本发明原料来源经实地考察、实验室鉴定，确定来源为南方红豆杉7ia:ms附fl/7-e,(7eweeef/ev/.」S.K//mexIiw。本发明建立了南方红豆杉饮片的质量标准及其检测方法，本发明方法检测结果重复性好，数据准确。使用本发明的方法能较好地控制南方红豆杉饮片的质量，为进一步制备南方红豆杉抗癌药，提供符合质量标准的南方红豆杉原料，有利于药物的安全有效，有较大的应用价值。具体实施例方式实施例1鉴别10(1)性状本试验为真伪鉴别。用肉眼观察。经IO批样品复核检验，形状均符合规定。(2)鉴别显微鉴别本试验为真伪鉴别。本品粉末过65目筛，挑取少许置载玻片上滴加水合氯醛，，在酒精灯上加热透化并滴加水合氯醛，盖上盖玻片。置显微镜下观察。复核检验10批样品，均具有明显的显微鉴别特征。薄层鉴别本试验为真伪鉴别。供试品溶液的制备取本品粉末lg，加甲醇50ml，超声处理40分钟，温度45°C，滤过，滤液45。C减压回收至干，残渣加水-三氯甲垸(1:2V/V)的混合液45ml溶解，分取下层三氯甲烷，45。C减压回收至干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备取10-脱乙酰巴卡亭III对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。展开剂三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(8:1.2:0.8V/V)硅胶板硅胶H板点样量对照品2ul，供试品5ul显色剂10%香草醛浓硫酸溶液。方法预制硅胶H板干燥箱11(TC烘30分钟活化，干燥器中放冷后，用毛细管点样，对照品2ul，供试品5ul;放入已放有展开剂的展开缸中，上行展开815cm，取出，晾干；喷以10%香草醛浓硫酸溶液，105。C干燥箱加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。复核检验4批样品，结果符合规定。实施例2(1)水分本试验为品质检验。照水分测定法(中国药典2005年版一部附录KH第一法)测定。取供试品25g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定；打开瓶盖在105°C干燥5小时将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥l小时，称重，根据减失的重量，计算供试品的含水量。检验5批样品，平均值为11.3。数据见下表。(2)总灰分本试验为品质检验。照(中国药典2005年版一部附录KK)灰分测定法测定。本品粉碎过二号筛，取35g置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至O.Olg)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至580，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(％)。检验5批样品，平均值为4.3。数据见下表。(3)酸不溶性灰分本试验为品质检验。照(中国药典2005年版一部附录IXK)灰分测定法测定。取灰分测定法所得灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。残渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量(％)。检验5批样品，平均值为0.5。数据见下表5批样品检査项数据序号批号水分总灰分酸不溶性灰分108090112.02.80.3208090212.33.70.530809038.45.01.3408092011.93.90.008102412.46.30.6平均值11.34.30.5(4)浸出物本试验为品质检验。照水溶性浸出物测定法项下热浸法(中国药典2005年版一部附录XA)测定。取供试品约2g，精密称定，置250ml的锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸l小时，放冷后取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105"C干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，易干燥品计算供试品中水溶性浸出物的的含量(％)。检验5批样品，平均值为25.6。数据见下表。(5)含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为232mn。理论板数以IO-脱乙酰巴卡亭III峰计应不低于3500。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0277822273578—2022—80对照品溶液的制备取在40'C减压干燥12小时的10-脱乙酰巴卡亭III对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml放置过夜，超声处理(功率300W，频率50kHz，45°C，40分钟，滤过；再加入甲醇20，超声处理20分钟，合并滤液，减压蒸干，残渣以水-三氯甲烷(h2V/V)的混合液45ml，分次溶解并转移至分液漏斗中，分取下层三氯甲垸，水层再加三氯甲烷20ml，振摇提取，合并三氯甲垸液，45'C减压蒸干，残渣以甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。检验5批样品，平均值为0.048。数据见下表。浸出物、含量测定数据序号批号浸出物％含量测定％108090126.10.050208090230.50.05314<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>权利要求1、一种南方红豆杉饮片的质量标准，其特征在于其质量标准为(1)本品为红豆杉科植物南方红豆杉Taxusmaireilemeeetlevl.S.Y.HuexLiu栽培品的带叶枝条；(2)性状本品呈段状，茎呈细圆柱形，直径约1～4mm，有的切面有细小的髓，表面黄绿色至黄褐色，嫩枝具纵棱；叶多切断；完整者条形，黄绿色至黄褐色，长1.5～3cm，宽0.25～0.35cm，上部渐窄，先端急尖或渐尖，叶柄短，叶片全缘，近革质，上面中脉隆起明显；质脆，易折断，气微，味苦、涩；(3)鉴别本品粉末黄绿色至黄褐色，气孔较多，叶肉薄壁细胞类圆形，排列较疏松，木栓细胞方形或多角形，内含棕黄色物，薄壁细胞类方形、多角形，螺纹管胞多见，少数为梯纹管胞，直径20～60μm；(4)水分不得过12.5％；(5)总灰分不得过8.0％；(6)酸不溶性灰分不得过1.0％；(7)浸出物照水溶性浸出物不得少于18.0％；(8)含量测定本品按干燥品计算，含10-脱乙酰巴卡亭IIIC29H36O11不得少于0.03％；性味与归经微甘、苦，平；有小毒，归肾、心经；功能与主治消肿散结，通经利尿；用于肿瘤、肾病、类风湿关节炎症；用法与用量3～9g；注意可能引起恶心、呕吐、皮疹；贮藏置通风、干燥、避光处。2、一种南方红豆杉饮片的检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)原料本品为红豆杉科植物南方红豆杉Taxusmaireilemeeetlevl.S.YHuexLiu栽培品的带叶枝条；(2)性状本品呈段状,茎呈细圆柱形，直径约14mm，有的切面有细小的髓，表面黄绿色至黄褐色，嫩枝具纵棱；叶多切断；完整者条形，黄绿色至黄褐色，长1.53cm，宽0.250.35cm，上部渐窄，先端急尖或渐尖，叶柄短，叶片全缘，近革质，上面中脉隆起明显，质脆，易折断，气微，味苦、涩；(3)鉴别①粉末显微鉴别本品粉末黄绿色至黄褐色，气孔较多，叶肉薄壁细胞类圆形，排列较疏松，木栓细胞方形或多角形，内含棕黄色物，薄壁细胞类方形、多角形，螺纹管胞多见，少数为梯纹管胞，直径2060um;②薄层鉴别方法取本品粉末lg，加甲醇50ml，超声处理40分钟，温度405(TC,滤过，滤液5(TC以下减压回收至干，残渣加水-三氯甲垸l:2V/V的混合液45ml溶解，分取下层三氯甲垸，温度4050°C，减压回收至干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取10-脱乙酰巴卡亭m对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VIB试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2pl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲垸-乙酸乙酯-甲醇8:1.2:0.8V/V为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%香草醛浓硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)水分照水分测定法中国药典2005年版一部附录KH第一法，不得过12.5%;(5)总灰分不得过8.0%中国药典2005年版一部附录KK;(6)酸不溶性灰分不得过1.0%中国药典2005年版一部附录KK;(7)浸出物照水溶性浸出物测定法项下热浸法中国药典2005年版一部附录XA测定，不得少于18.0%;(8)含量测定照高效液相测定法中国药典2005年版一部附录VID测定对照品溶液的制备取在4045'C减压干燥12小时的10-脱乙酰巴卡亭III对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品粉末过三号筛lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml放置过夜，超声处理40分钟(功率300W，频率50kHz,温度405(TC，滤过；再加入甲醇20，超声处理20分钟，合并滤液，减压蒸干，残渣以水-三氯甲烷1:2V/V的混合液45ml，分次溶解并转移至分液漏斗中，分取下层三氯甲垸，水层再加三氯甲烷20ml，振摇提取，合并三氯甲垸液，4050。C减压蒸干，残渣以甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得;测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得，本品按干燥品计算，含IO-脱乙酰巴卡亭III(G晶60n)不得少于0.03%。3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(8)含量测定中高效液相测定的色谱条件为十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈与水为流动相，乙腈水为78-20:22-80V/V进行梯度洗脱；时间0-35分钟；检测波长为232nm，理论板数以10-脱乙酰巴卡亭m峰计应不低于3500。全文摘要本发明提供了一种南方红豆杉饮片的质量标准及其检测方法。检测标准包括性状呈段状、鉴别粉末为黄绿色至黄褐色、水分不得过12.5％、总灰分不得过8.0％、酸不溶性灰分不得过1.0％、水溶性浸出物不得少于18.0％和含量测定，按干燥品计算，含10-脱乙酰巴卡亭III(C<sub>29</sub>H<sub>36</sub>O<sub>11</sub>)不得少于0.03％等。本发明方法检测结果重复性好，数据准确。使用本发明的方法能较好地控制南方红豆杉的质量。文档编号G01N33/15GK101477102SQ20081020430公开日2009年7月8日申请日期2008年12月10日优先权日2008年12月10日发明者王艳春,陈维荣申请人:上海康桥中药饮片有限公司